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尿沉渣检查方法的进展

　　【关键词】 尿沉渣；镜检；染色法
　　Evolvement of Examine Method obout Uric Sediment　　
　　Key words:Uric Sediment; Microscope examine; Dyeing
　　尿沉渣是指尿液排出体外经离心沉淀，在显微镜下看到的有形成分。尿沉渣检查可以弥补尿液理、化检查不足造成的漏诊，可以了解泌尿系统各部位的变化，对辅助泌尿系统疾病的定位诊断、鉴别诊断及预后判断等有重要意义。尿沉渣检查有“体外肾活检”之称［1］，多年来其检查方法不断向准确、规范、干化学和自动化分析方向进展，现综述如下。
　　1 尿沉渣手工制片镜检
　　直接镜检法 将尿液充分混匀，取其中1滴尿直接涂于载玻片上，依据各种有形成分的形态特点，用显微镜观察作出报告。
　　玻片画框法［2］ 用标定好的滴管加混匀尿2滴涂满蜡笔画好的 mm× mm框内，静止3 min后累计20个高倍视野细胞数，结果以每微升细胞数报告。细胞数/μl=T×1/20×A/B×1/V。式中T=细胞累计数，20=所观察的视野数，A=标本分布面积，B=高倍视野面积=(高倍视野直径/2)2.π，V=标本用量(μl)，高倍视野直径=目镜中光栏直径/目镜放大倍数，光栏直径可用千分尺测出。
　　自然沉降法 将尿液在室温下放置一定时间(15 min～30 min)后，移去上层的尿液，保留底层大约 mL左右，然后混匀，取其中1滴沉淀于载玻片上，镜检同直接镜检法。
　　离心沉淀法［3］ 尿液10 ml离心5 min，相对离心力(RCF)为400，弃上清留沉渣尿量 ml混匀，吸取20 μl，滴在玻片上用18 mm×18 mm盖片覆盖，先用10×10低倍镜观察全片，再用10×40高倍镜仔细观察，检查细胞至少10个视野，检查管型至少20个低倍视野，报告以高倍视野所见最低至最高数字表示。建议国内逐步以每微升细胞数报告。
　　染色法［4］ 包括湿润染色法及特定成分染色法。
　　特殊显微镜检查
　　相差显微镜法 相差显微镜又称相衬显微镜，是以光的衍射和干涉现象照射标本，产生明暗不同的反差识别，有助于增强透明与半透明的有形成分的轮廓，尤其是透明管型、不典型红细胞、血小板的辨别。
　　干涉显微镜法 在不同位相时，当两种相同颜色的光波相遇时，其亮度发生增强或减弱的变化，从而提高物体的清晰度，可观察到细胞或管型的三维空间结构。
　　偏振光显微镜法 利用光的偏振特性对光有双折射性的物体进行鉴别，可观察活细胞的内含物、神经纤维、植物纤维的结构细节和动物肌肉纤维等。可分析变性过程，观察到细胞的死活：正常细胞对光偏振呈左旋，肿瘤细胞多数呈右旋，可显示盐类结晶在自然光下见不到的精细结构。
　　透射电镜法 利用电子束作为“照明波源”可明显提高分辨率，将尿沉渣标本切成超薄片在电子显微镜下观察，可准确分辨出细菌管型、白色念珠菌管型、血小板管型、粗颗粒管型和细颗粒管型等。
　　2 尿沉渣定量计数板法
　　取一定量(10 ml)尿液置特制的离心管内，在规定离心时间和转速的条件下离心沉淀，移去上清尿液，保留一定量的尿沉淀物，取1滴滴人计数板内，在显微镜下计数，然后换算成一定体积(1/μl)内尿有形成分的含量。
　　LiUcc型尿沉渣计数板［5］ 计算室为正方形边长9 mm，池深 mm，混匀尿滴入池内计数规定区结果除以5，细胞少时计数全室结果除以10，即为每微升细胞数。
　　牛鲍计数板法 将混匀尿充池，计数9大格细胞数×10÷9，即为每微升细胞数。
　　FR定量板法［6］ 混匀尿10 ml于Biostd离心管内，经1 500 r/min 离心5 min，倾去上清余 ml沉渣即留在管底缩小区内，将沉渣混匀滴入FR板内，计数10大格即得每微升细胞数。每板10人份一次性使用，保湿，细胞形态及分布稳定。
　　3 干化学法
　　将试剂包含在纤维素中作为反应部分粘附在塑料支持片上干燥而成试纸带，以镜检为标准半定量检测尿中成分。Schumann认为干化学检查阴性再镜检是浪费时间，周仲玲等认为即使干化学检查全部阴性，而滴虫、霉菌及病理性结晶等仍需镜检。1996年的推荐方法中确定，干化学检验只有符合下列四项要求才可以不作镜检:尿白细胞结果为阴性；红细胞结果阴性；尿蛋白为阴性；亚硝酸盐为阴性。来源于肾科标本不适合干化学筛选，应一律显微镜检查。丛玉隆等6 349例研究结果:干化学分析结果同时存在红细胞阴性、白细胞阴性、蛋白质阴性时免于镜检对病理性管型检出率影响不大［7］。
　　4 尿沉渣自动化分析［8］
　　尿沉渣分析自动化的研究由来己久，但难度较大。直到1986年才由美国国际遥控摄像系统有限公司研制生产了世界上第一台高速摄像机式的尿沉渣自动分析仪。目前，尿沉渣分析仪主要有两大类:基于尿沉渣镜检影像分析原理；基于尿沉渣流式细胞术和电阻抗检测原理。影像式尿沉渣(或称“工作站”)其检测原理与人工显微镜检查原理基本相似，都是直观地观察有形成分的形态，但它须经过严格的定时、定速离心，而后留取定量的尿沉渣，由配套动力装置将其转移至显微镜载物台上刻有标尺的流动样品池内，通过频闪光源灯、相聚光镜、彩色摄像机等，在电脑显示屏上得到清晰的尿沉渣画面，再由操作者在屏幕上统计出各种有形成分的数目，由计算机自动换算成每微升单位的数据。同普通光学显微镜方法相比，其分析标准定量、视野清晰、速度快捷、准确度高。在全自动尿沉渣分析检测分析中，应用流式细胞和电阻抗分析的原理:尿液中细胞等经荧光色素染色后，在鞘流液的作用下，形成单个、纵列细胞流，通过氩激光检测区，仪器检测荧光、散射光和电阻抗的变化；当仪器在捕获了荧光强度Fl、前向荧光脉冲宽度Flw、前向散射光强度Fsc、前向散射光脉冲宽度Fscw、电阻抗信号后，综合识别和计算得到了相应细胞的大小、长度、体积和染色质长度等资料，并做出红细胞、白细胞、细菌、管型等的散射图及定量报告。
【参考文献】
　　［1］ 李影响.临床医学检验手册［M］.吉林科学出版社，1987：183.
　　［2］ 吴穷.关于尿沉渣镜检标准化的探讨［J］.中华医学检验杂志，1986，9(1):52.
　　［3］ 娄永新.尿沉渣检验［J］.中华医学会推荐十种方法学方案汇编，1983.
　　［4］ 娄永新.尿沉渣染色方法［J］.上海医学检验杂志，1986，1(2):120.
　　［5］ 李建华.尿液有形成分容量检测法的实验研究［J］.中华医学检验杂志，1998，12(4):234.
　　［6］ 叶美珍.比较FR定量分析板与计数板法检查尿沉渣结果［J］.上海医学医学检验杂志，1995，10(3):154.
　　［7］ 丛玉隆.尿液干化学分析与显微镜检查［J］.中华医学检验杂志，1997，20(3):136.
　　［8］ 熊立凡.临床检验基础［M］.北京:人民卫生出版社，2003：49.