学术讨论—筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选.ppt
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1、2.2.2 2.2.2 动物动物(dngw)(dngw)细胞融合与单克隆抗体细胞融合与单克隆抗体第一页,共二十七页。1 1、概念概念(ginin)(ginin)动物细胞融合动物细胞融合也称细胞杂交也称细胞杂交,是指是指两个或多个两个或多个动物细胞形成动物细胞形成一个一个(y)细胞的过程细胞的过程一、一、动物动物(dngw)(dngw)细胞融细胞融合合2 2、原理:、原理:膜的流动性膜的流动性第二页,共二十七页。一、一、动物动物(dngw)(dngw)细胞融细胞融合合3 3、结果:形成杂交、结果:形成杂交(zjio)(zjio)(zjio)(zjio)细胞。细胞。杂交细胞:杂交细胞:融合后融合后
2、形成的形成的具有原具有原来两个或多个细胞遗传信息的来两个或多个细胞遗传信息的单核单核 细胞细胞。4 4、诱导、诱导(yudo)(yudo)方法:方法:聚乙二醇(聚乙二醇(PEGPEG)、)、灭活的病毒、电激等。灭活的病毒、电激等。第三页,共二十七页。5 5、过程、过程(guchng)(guchng):第四页,共二十七页。3 3、过程、过程(guchng)(guchng):细胞相互细胞相互(xingh)凝凝集集膜上蛋白质分子膜上蛋白质分子(fnz)和脂质分子和脂质分子(fnz)重新重新排布排布细胞膜打开细胞膜打开细胞发生融合细胞发生融合病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够病毒表面含有的糖蛋白和一些酶
3、能够与细胞膜的糖蛋白发生作用,使细胞与细胞膜的糖蛋白发生作用,使细胞相互凝集。相互凝集。第五页,共二十七页。6 6、优点、优点(yudin)(yudin):突破了有性杂交的局限,突破了有性杂交的局限,使远缘使远缘(yun yun)杂交成为可能杂交成为可能7 7、应用:、应用:用于研究细胞遗传、细胞免疫、用于研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培养肿瘤和生物新品种培养(piyng)(piyng)(piyng)(piyng)等的重要手等的重要手段。段。最重要的用途:制备单克隆抗体最重要的用途:制备单克隆抗体第六页,共二十七页。2 2、动植物细胞在结构上有何区别?这与它们杂交动植物细胞在结构上有
4、何区别?这与它们杂交或融合过程有什么或融合过程有什么(shn me)(shn me)影响?影响?3 3、植物体细胞杂交诱导、植物体细胞杂交诱导(yudo)(yudo)(yudo)(yudo)原生质体融合常用的原生质体融合常用的方法有哪些?方法有哪些?离心、振动、电激等物理方法离心、振动、电激等物理方法(fngf)(fngf)(fngf)(fngf);PEGPEG等化学方法等化学方法(fngf)(fngf)(fngf)(fngf)问题讨论问题讨论动物细胞无细胞壁,动物细胞融合过程中不动物细胞无细胞壁,动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。须去除细胞壁和再生出细胞壁。、植物体细胞杂交最终
5、得到的是完整的植物个体,、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体,动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗?动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗?不能,只能得到杂交细胞不能,只能得到杂交细胞第七页,共二十七页。4 4、动物细胞融合能利用、动物细胞融合能利用(lyng)(lyng)(lyng)(lyng)上述两类方法吗?还上述两类方法吗?还有其他方法吗?有其他方法吗?能能,还可以利用灭活的病毒(生物还可以利用灭活的病毒(生物(shngw)(shngw)(shngw)(shngw)方法)进行诱导方法)进行诱导问题问题(wnt)讨论讨论、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原、动物细胞融合与植物原生质体融
6、合的基本原理是否相同?理是否相同?相同,都是细胞膜的流动性相同,都是细胞膜的流动性第八页,共二十七页。问题问题(wnt)讨讨论论6 6、为什么要用、为什么要用灭活灭活的病毒的病毒(bngd)(bngd)(bngd)(bngd)?病毒病毒(bngd)(bngd)一般对生物体是有伤害的。一般对生物体是有伤害的。仙台病毒仙台病毒物理或物理或物理或物理或化学方法化学方法化学方法化学方法丧失感染活性丧失感染活性保留融合活性保留融合活性第九页,共二十七页。主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得获得(hud)(hud)杂种植杂种植株株物理、化学方法物理、化学方法(同左)(同左)灭活的病毒灭活的病毒
7、物理(离心、振物理(离心、振荡、电激)荡、电激)化学(聚乙二醇)化学(聚乙二醇)使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性用途用途诱导方法诱导方法步骤步骤融合的原理融合的原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目8 8、植物、动物植物、动物(dngw)(dngw)(dngw)(dngw)细胞融合的比细胞融合的比较较第十页,共二十七页。1.1.抗体抗体(kngt)(kngt)(kngt)(kngt)是由何种细胞产生的?是由何种细胞产生的?2.2.2.
8、2.抗体是如何产生的?抗体是如何产生的?二、二、单克隆抗体单克隆抗体(kngt(kngt)第十一页,共二十七页。(一)获得抗体的传统(一)获得抗体的传统(chuntng)方法方法1、方法:、方法:向动物体内反复注射某种抗原向动物体内反复注射某种抗原(kngyun),使动物产生抗体,从动物血清中分离所需使动物产生抗体,从动物血清中分离所需抗体。抗体。2、缺点:、缺点:产量少、纯度低、特异性差产量少、纯度低、特异性差.第十二页,共二十七页。3、解决问题的设想、解决问题的设想:免疫反应过程中,免疫反应过程中,每一个每一个B淋巴细淋巴细胞胞只分泌一种只分泌一种特异性抗体。特异性抗体。克隆单一的克隆单一
9、的B淋巴细胞,形成细胞淋巴细胞,形成细胞群,获得大量的单一抗体。群,获得大量的单一抗体。4、面临的新问题:、面临的新问题:一个一个B淋巴细胞不可能在体外培养淋巴细胞不可能在体外培养条件条件(tiojin)下无限增殖的。下无限增殖的。.第十三页,共二十七页。1 1、如何、如何(rh)(rh)获得化学性质单一、特异性强的抗体?获得化学性质单一、特异性强的抗体?问题问题(wnt)讨讨论论提示提示(tsh):1.1.什么样的细胞可以产生抗体?什么样的细胞可以产生抗体?2.2.什么样的细胞可以无限增殖?什么样的细胞可以无限增殖?2 2、瘤细胞和癌细胞有何区别?、瘤细胞和癌细胞有何区别?共同点:共同点:两
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