学术讨论—贴壁细胞和悬浮细胞传代方法上有什么不同.ppt
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1、 实验实验(shyn)三、细胞的传代与冻存三、细胞的传代与冻存第一页,共二十页。l1.1.细胞培养中为什么添加血清?细胞培养中为什么添加血清?l2.2.使用使用(shyng)(shyng)血清需注意哪些方面?血清需注意哪些方面?l3.3.消化液胰酶的浓度是多少?消化液胰酶的浓度是多少?l4.4.使用小滤器过滤要注意哪些?使用小滤器过滤要注意哪些?第二页,共二十页。针头滤器针头滤器(lq)(lq)使用应注意的问题使用应注意的问题 1.1.拧紧滤器拧紧滤器 2.2.注射器吸液体注射器吸液体 3.3.注射器插好滤器注射器插好滤器 4.4.对着烧杯慢推压针芯看是否漏对着烧杯慢推压针芯看是否漏 5.5.
2、如不漏对小瓶过滤。如不漏对小瓶过滤。6.6.滤器放在小瓶瓶口上,取下针头再吸液体,反复滤器放在小瓶瓶口上,取下针头再吸液体,反复屡次,滤完。屡次,滤完。7.7.检查滤器滤膜是否完好。检查滤器滤膜是否完好。第三页,共二十页。一、实验原理一、实验原理(yunl)(yunl)细胞贴壁过程细胞贴壁过程第四页,共二十页。培养细胞一代(y di)生长过程第五页,共二十页。什么什么(shn me)(shn me)时候传代?时候传代?第六页,共二十页。第七页,共二十页。细胞消化细胞消化(xiohu)(xiohu)的最正确程度的最正确程度第八页,共二十页。细胞冻存细胞冻存要求要求冻存条件冻存条件(tiojin)
3、(tiojin)操作要点操作要点 第九页,共二十页。二、实验目的 掌握无菌操作技术。掌握传代细胞的培养的一般方法与步骤。掌握培养细胞的消化方法。了解在倒置相差显微镜下观察培养细胞的形态(xngti)和生长状况。第十页,共二十页。三、实验材料及设备三、实验材料及设备 1.1.细胞细胞 人宫颈癌人宫颈癌HeLa HeLa 细胞细胞 人胃癌人胃癌BGC-823BGC-823细胞细胞2.2.试剂试剂 胰酶、DMEM培养基、血清、DMSO、抗生素 3.3.仪器仪器 超净工作台、CO2培养箱、倒置相差显微镜4.其它用品:培养瓶,试管(shgun),移液管,巴斯德吸管,废液缸,75酒精棉球,酒精灯 第十一页
4、,共二十页。四、实验步骤四、实验步骤1.1.准备:超净工作台紫外线处理准备:超净工作台紫外线处理3030分钟分钟,用肥皂洗手用肥皂洗手,穿鞋套,用新洁尔灭溶液拭擦双手消毒。穿鞋套,用新洁尔灭溶液拭擦双手消毒。2.2.倒置显微镜下观察细胞形态,确定细胞是否需要传倒置显微镜下观察细胞形态,确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。将培养代及细胞需要稀释的倍数。将培养(piyng)(piyng)用液置用液置室温下预热。室温下预热。3 3关闭超净台紫外灯关闭超净台紫外灯,翻开可见光灯开关翻开可见光灯开关,翻开抽风机翻开抽风机清洁空气,除去臭氧。用清洁空气,除去臭氧。用75%75%酒精擦双手消毒酒精擦双
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