发热出疹症候群.pptx

发热呼吸道症候群病毒核酸检测技术的应用 发热呼吸道症候群病毒检测内容核酸检测方法荧光定量：敏感性 操作繁琐 成本高普通RT-PCR：方便 快捷 性价比高 敏感性xTAGRVP-Luminex原理纽罗西敏SeegeneRV15-原理DPO专利技术莱夫时代RespiFinderSMART22逆转录后分2管进行PCR扩增溶解曲线法QIAcell法北京卓城惠生 ABT9+7A管管名称名称RNasePHRVFluBCoV-229ECoV-OC43CoV-HKU1sH1N1FluAPIV1Adv扩增片段大小（bp）125144539182200219250270283338B管管名称RNasePRSVACoV-NL63PIV2HMPVPIV3RSVBHBoV扩增片段增片段大小大小（bp）1251581741932072292782909+7原理 两种引物：两种引物：多对靶基因特异性嵌合引物 一对通用引物 三个退火温度三个退火温度 9+7检测实例胶图仅作为参考A3A10PIV1PIV19+7应用注意事项1.卡夹选择HighResolution12002.AlignmentMarker15-600bp（注意有效期）3.SizeMarker50-500bp4.对操作人员要求较高5.定期维护5.不看胶图看峰图！北京赛蓝斯GenTouch12重TubeAdetection产物大小物大小内内质控控863bp鼻病毒鼻病毒586bp冠状病毒冠状病毒477bp乙型流感病毒乙型流感病毒399bp呼吸道合胞病毒通用型呼吸道合胞病毒通用型316bp甲型流感病毒甲型流感病毒249bpTubeBdetection产物大小物大小内内质控控863bp副流感病毒副流感病毒2型型544bp偏肺病毒偏肺病毒453bp副流感病毒副流感病毒1型型354bpTubeCdetection产物大小物大小内内质控控863bp腺病毒通用性腺病毒通用性663bp肠道病毒通用型道病毒通用型477bp博卡病毒博卡病毒307bp副流感病毒副流感病毒3型型226bp条条带SizeMarkerASizeMarkerBSizeMarkerC1#条条带863bp863bp863bp2#条条带586bp544bp663bp3#条条带477bp453bp477bp4#条条带399bp354bp307bp5#条条带316bp226bp6#条条带249bp北京赛蓝斯GenTouch12重TubeATubeBTubeCSizeMarkerA内质控RVFluBRSVFluALane1 Lane2 Lane3Lane4Lane5 Lane6 Lane7RVFluBRSVFluAFluBFluAFluAFluA内质控内质控内质控内质控RVFluARSV内质控AdVEV71BoVPIV3内质控 内质控 内质控内质控AdVEV71BoVPIV3AdVAdV1.能有效检测出多重感染2.3个SizeMarker,容易判断结果SizeMarkerC北京赛蓝斯GenTouch12重DL2000SizeASizeBDL2000SizeCFluBRSV RSV RSVFluARSVHRVPIV1PIV1PIV2hMPVPIV1PIV1PIV3RSVADVhMPVEVGenTouchTube1301 304 305 306 308 M1 309 311 313 314 315 M1 316 317 318 319 320 M1 321 322 323 324 325 DL 326 327 329 331 332 M1 DL非特异筛查FluARSVFluARSVFluAFluAFluBHRVFluAHRVHRVFluAGenTouchTube2301 304 305 306 308 M2 309 310 311 312 314 M2 315 316 317 318 319 M2 321 322 323 324 325 DL M2 326 328 329 332PIV1非特异筛查GenTouchTube3DL 301 304 305 306 308 M3 309 310 311 312 314 M3 315 316 317 318 319 M3 321 322 323 324 325 326 328 329 332 M3PIV3非特异筛查1.内质控扩增效率较好2.无明显非特异条带3.引物二聚体，但不影响结果判断*多重非特异条带多GenTouch序列测定试剂盒配有12种病毒序列测定试剂盒进一步确定病原体、分子流病、基因特征分析2014年核酸盲样考核麻疹/风疹核酸盲样考核手足口病核酸盲样考核发热呼吸道症候群病毒核酸盲样考核发热伴出疹症候群病毒核酸盲样考核麻疹风疹、HFMD核酸盲样考核考核内容：包括不同基因型的麻疹和风疹病毒10份标本：1.Negative2.Negative3.RV 1E4.MV H1a5.RV 2B6.MV H1a7.MV H1a8.RV 2B9.MV H1a10.RV 1E考核内容：包括不同基因型的HFMD病原10份标本：1.EV71 1000+CA16 1002.EV71 103.EV71 B5 10004.EV71 C5 10005.CA16 1000+EV71 1006.CA16 1007.CA6 100008.CA10 100009.Echo30 1000010.Negative考核单位：全国各省级疾控中心麻疹/风疹盲样考核Ct值河北、湖南和山东CDC鉴定了麻疹病毒基因定型，湖南也鉴定了风疹病毒基因定型。MV/RV与平均CT值相比，过低,Why？！通用道肠道病毒定量检测结果肠道病毒EV71定量检测结果肠道病毒CA16定量检测结果HFMDCA161000+EV71100EV71100发热呼吸道症候群病毒核酸检测盲样考核参加单位：1.陕西省疾控中心2.湖南省疾控中心3.河北省疾控中心4.山东省疾控中心5.中国检科院6.新疆自治区疾控中心7.上海浦东新区疾控中心共计7家课题参与单位。考核内容：核酸检测的病原学范围为发热呼吸道症候群监测方案中的必检病毒，包括：1.流感病毒(Iflu)2.呼吸道合胞病毒(RSV)3.腺病毒(Adv)4.副流感病毒(PIV)5.偏肺病毒(hMPV)6.冠状病毒(hCoV)7.博卡病毒(hBoV)8.鼻病毒(hRv)。7家单位正确率为94%；陕西、湖南、河北和山东四家正确率为100%；新疆和上海浦东正确率为90%；在Influ、ADV和RSV血清型别鉴定能力方面:1.湖南、河北和山东鉴定了上述三种病毒的血清型别，其中湖南和河北血清型别鉴定结果正确率为100%，山东正确率为90%。2.陕西、新疆和上海浦东鉴定了RSV血清型别，正确率均为100%。发热伴出疹症候群病毒核酸检测盲样考核参加单位：1.陕西省疾控中心2.湖南省疾控中心3.河北省疾控中心4.山东省疾控中心5.山西省疾控中心6.新疆自治区疾控中心7.上海浦东新区疾控中心共计7家课题参与单位。考核内容：核酸检测的病原学范围为发热伴出疹症候群监测方案中的必检病毒，包括：1.肠道病毒（EV）2.麻疹病毒（MV）3.风疹病毒（RV）4.水痘-带状疱疹病毒VZV5.登革病毒(DenV)6.人类小DNA病毒B197.EB病毒8.人类疱疹病毒6型7家单位整体正确率为99%；陕西、湖南、河北、山东、新疆和上海浦东六家单位正确率为100%；山西正确率为90%。在MV、RV、EV71和CA16病毒基因型别鉴定能力方面:湖南、河北和山东鉴定了上述四种病毒的基因型别，其中湖南和河北正确率为100%，山东正确率为90%。注意事项1.实验室仍要注意控制实验污染，如发现有污染的可能，应及时排查并尽快消除污染；2.商品化试剂盒质量至关重要，敏感性高、特异性强、稳定可靠的试剂盒用于常规检测，需不同品牌试剂用于对可疑结果进行复合；3.同一品牌不同批号的试剂也要进行试剂质量评估；4.不能完全相信产品注册证；5.各实验室应制备手足口病、麻疹风疹病毒核酸组合盘，用于实验室质量控制及商品化试剂盒的验证；6.手足口病原交叉6.每年一次定期组织各省的市级、区县级疾控中心进行手足口病、麻疹风疹病毒核酸盲样考核工作，提高各地区核酸检测水平。总 结敏感性特异性稳定性简便性 性价比Noperfect!Justcompatible!E-mail:Tel:[phone]THANKYOUFORYOURTHANKYOUFORYOURATTENTIONATTENTION