人体X—染色质的观察.ppt

实验实验(shyn)(shyn)三三 人体人体(rnt)x-染色质的观察染色质的观察第一页，共二十三页。一一.实验实验(shyn)(shyn)目的目的 观察与区别观察与区别X染色质染色质：通过实验初步：通过实验初步掌握简易方法，识别其形态及所在部位掌握简易方法，识别其形态及所在部位(bwi)，为进一步研究人体染色质的畸变与，为进一步研究人体染色质的畸变与疾病提供参考条件。疾病提供参考条件。第二页，共二十三页。1949年年Barr等发现，在等发现，在雌猫的神经细胞核间雌猫的神经细胞核间期期有一个凝缩的深染小体，而在雄性的细胞有一个凝缩的深染小体，而在雄性的细胞中没有中没有(mi yu)。后来了解，在雌体中的两条后来了解，在雌体中的两条X染色体在间期时染色体在间期时有一条有一条(或这条的大部分或这条的大部分)处于凝集而不活动状态，处于凝集而不活动状态，从而形成了这种从而形成了这种X-染色质染色质(或称性染色质、或称性染色质、Barr小小体体)。二二.实验实验(shyn)(shyn)原理原理第三页，共二十三页。1932年美国遗传学家首先在年美国遗传学家首先在果蝇果蝇中发中发现了现了剂量补偿效应剂量补偿效应，并把它看作是维持雌雄，并把它看作是维持雌雄两性生物基因表达的一致所特有的一种遗传两性生物基因表达的一致所特有的一种遗传效应。效应。剂量补偿效应剂量补偿效应：在：在XY型性别型性别(xngbi)决定决定机制的生物中，使性连锁基因在两种性别机制的生物中，使性连锁基因在两种性别(xngbi)中有相等或近乎相等的有效剂量的遗传中有相等或近乎相等的有效剂量的遗传效应。效应。第四页，共二十三页。进一步研究发现，进一步研究发现，所有哺乳类雌所有哺乳类雌体细胞中体细胞中都有一都有一条条这种表现的这种表现的X染色体；染色体；Lyon假说假说：1961年由年由Lyon提出，又称单个活性提出，又称单个活性X染色体假说。染色体假说。1正常雌性哺乳动物的体细胞中，两条正常雌性哺乳动物的体细胞中，两条X染色体中只有一染色体中只有一条有活性条有活性(activation X,Xa)，另一条失活，另一条失活(inactivation X,Xi)；2失活是随机的；失活是随机的；3失活发生在胚胎发育的早期；失活发生在胚胎发育的早期；4杂合体杂合体(h t)雌性在伴性基因的作用上是嵌合体雌性在伴性基因的作用上是嵌合体(h t)。第五页，共二十三页。第六页，共二十三页。人类正常的男女体细胞中，分别有人类正常的男女体细胞中，分别有XY和和XX性染色体，性染色体，女性女性的两条的两条X染色体中，在染色体中，在间期也有间期也有一条一条不表现活性而保持不表现活性而保持浓缩浓缩状态，状态，因此易于用适当的染料因此易于用适当的染料(rnlio)加以显示，成为加以显示，成为便于观察的便于观察的X-染色质（染色质（Barr小体）。小体）。在个别的雌或雄体中，有多于在个别的雌或雄体中，有多于2条条X染色染色体时，在间期细胞内除一条外，其余都将形体时，在间期细胞内除一条外，其余都将形成成X-染色质，以维持剂量补偿。染色质，以维持剂量补偿。第七页，共二十三页。第八页，共二十三页。X-染色质的形态染色质的形态(xngti)(xngti)：1.结构致密的浓染小体，轮廓清楚；结构致密的浓染小体，轮廓清楚；2.大小约大小约1u左右，常附着于核膜左右，常附着于核膜(h m)边缘或边缘或靠近内侧；靠近内侧；3.其形状有微凸形、三角形、卵形、短棒形其形状有微凸形、三角形、卵形、短棒形及双球形；及双球形；第九页，共二十三页。MALEFEMALE第十页，共二十三页。第十一页，共二十三页。第十二页，共二十三页。三三.实验实验(shyn)(shyn)材料材料1.女性女性口腔口腔(kuqing)颊部黏膜细颊部黏膜细胞胞2.毛发根部细胞毛发根部细胞第十三页，共二十三页。四四.实验仪器实验仪器(yq)(yq)及试剂及试剂 仪器仪器:显微镜显微镜 试剂试剂(shj):1M盐酸、蒸馏水、改良苯酚品红盐酸、蒸馏水、改良苯酚品红 第十四页，共二十三页。五五.实验方法实验方法(fngf)(fngf)和步骤和步骤1.口腔颊部黏膜细胞的观察：口腔颊部黏膜细胞的观察：a.刮取口腔黏膜细胞刮取口腔黏膜细胞:漱口，用牙签从女性口腔两侧颊部刮取上皮黏膜细胞，漱口，用牙签从女性口腔两侧颊部刮取上皮黏膜细胞，原位刮原位刮2-3次，分别涂抹在干净载片上，每次可涂次，分别涂抹在干净载片上，每次可涂1-2片，涂抹范围约盖片大小片，涂抹范围约盖片大小(男性做对照男性做对照)。b.染色染色:待稍干后，滴加待稍干后，滴加1-2滴改良滴改良(giling)苯酚品红，染色苯酚品红，染色10-15分钟。分钟。第十五页，共二十三页。c.压片压片:加盖片，覆以吸水纸，用手指轻度压片。加盖片，覆以吸水纸，用手指轻度压片。d.镜检镜检:镜下检测典型的可数细胞，标准是：镜下检测典型的可数细胞，标准是：核质呈网状或细颗粒状分布；核质呈网状或细颗粒状分布；核膜清晰、无缺损；核膜清晰、无缺损；染色染色(rns)适度；适度；周围无杂质。周围无杂质。第十六页，共二十三页。2毛发根部细胞的观察：毛发根部细胞的观察：拔取拔取(bq)一根带有毛根的头发，自基部截取一根带有毛根的头发，自基部截取2cm左右置载片上，再加一滴左右置载片上，再加一滴1M盐酸解离盐酸解离5-7分分钟，待毛根后鞘软化后拔去毛干，蒸馏水清洗钟，待毛根后鞘软化后拔去毛干，蒸馏水清洗3-5次，滴加一滴染液染次，滴加一滴染液染10-15分钟，吸取多余的染料，分钟，吸取多余的染料，再覆以盖片，隔一片吸水纸用手指轻度加压后镜再覆以盖片，隔一片吸水纸用手指轻度加压后镜检。检。第十七页，共二十三页。六六.实验实验(shyn)(shyn)结果结果1.观察观察50个女性可数细个女性可数细胞胞(xbo)，同时观察，同时观察50个个男性者为对照，分别计算显示男性者为对照，分别计算显示X-染色质细染色质细胞胞(xbo)所占的百分比所占的百分比。2.观察中选绘观察中选绘4-5个典型细胞，示明个典型细胞，示明X-染色质染色质的形态部位的形态部位。第十八页，共二十三页。Barr小体小体(xio t)(xio t)Barr小体小体(xio(xio t)t)Detection of sex chromatin by Thionin stain 400第十九页，共二十三页。七七.实验分析实验分析(fnx)(fnx)与讨论与讨论 1.分析此次实验成败的原因。分析此次实验成败的原因。2.此次实验有哪些地方可以此次实验有哪些地方可以(ky)改进改进?第二十页，共二十三页。八八.思考题思考题 为什么雄性的一条为什么雄性的一条(y tio)X-染色体不浓缩染色体不浓缩？它的合理的解释是什么？它的遗传学意义？它的合理的解释是什么？它的遗传学意义是什么？是什么？第二十一页，共二十三页。九九.参考文献参考文献1.遗传学实验遗传学实验(shyn)高等教育出版社高等教育出版社2.遗传学实验方法和技术遗传学实验方法和技术 高等教育出版社高等教育出版社第二十二页，共二十三页。内容(nirng)总结实验三。观察与区别X染色质：通过实验初步掌握简易方法，识别其形态及所在部位，为进一步研究人体染色质的畸变与疾病提供参考条件。X-染色质的形态：。加盖片，覆以吸水纸，用手指轻度压片。2.观察中选(zhng xun)绘4-5个典型细胞，示明X-染色质的形态部位。它的合理的解释是什么。九.参考文献第二十三页，共二十三页。