OLYMPUSIX倒置显微镜操作规程厦门大学生物医学仪器共享平台.docx

操作规程

Olympus IX5
厦门大学医学院中心实验室
黄静茹
2016年10月

说明：
①透射光主开关；②汞灯高压电源开关；③透射光光强控制钮；④滤色片架；
⑤光路选择杆；⑥X轴和Y轴调节钮；⑦物镜转盘；⑧粗/微调焦旋钮；
⑨双目观察筒；⑩屈光度调节环；⑪聚光镜高度调节钮；⑫聚光镜对中旋钮；
⑬视场光阑调节杆；⑭孔径光阑调节杆；⑮聚光镜转盘；⑯荧光光闸（SHUTTER）；
⑰荧光激发块转盘；⑱荧光减光阀
一、开机
1、 打开透射光源（白光）主开关①；
2、 打开荧光光源（汞灯高压电源）②；
3、 打开电脑，进入cellSens Standard工作站；
备注：标本为HE染色、免疫组化时，不需要打开荧光光源；标本为荧光染料染色时，一般也不需要打开白光光源。
二、明场观察（Bright Field BF）
1、正确放置标本，BF主要用于HE染色、免疫组化标本；
2、转动荧光激发块转盘⑰到“6”的位置；
3、转动聚光镜转盘⑮到“BF”位置，直到听到咔嗒声；
4、将光路选择杆⑤推进去（ 选择目镜观察光路）；
5、转动物镜转盘⑦，选用合适的物镜，调节白光光强控制钮③至合适的强度，调
节粗/细调焦旋钮⑧聚焦观察,根据需要调节瞳间距⑨和屈光度⑩；
三、相衬观察（Phase contrast PH)
1、正确放置标本，PH主要用于没有任何染色的、较透明的标本；
2、转动荧光激发块转盘⑰到“6”的位置；
3、转动物镜转盘⑦，选用合适的物镜；
4、转动聚光镜转盘⑮，使相衬光学元件与所用物镜相匹配（见表1）；
5、将光路选择杆⑤推进去（ 选择目镜观察光路）；
6、调节光强控制钮③直至合适的强度，调节粗/细调焦旋钮⑧进行聚焦观察,根
据需要调节瞳间距⑨和屈光度⑩。
表1：物镜、相差元件匹配表
物镜
4X
10X、20X
40X
相差元件
PHL
PH 1（PH C）
PH 2
四、荧光观察
1、如果需要，可先用明场观察对标本定位，再转入荧光观察；
2、如果不再需要BF观察，可关闭白光电源②；或将白光光强调节钮③逆时针旋
至最低，将孔径光阑向右拨至最小；
3、转动荧光激发块转盘⑰，根据所用的荧光染料选择匹配的荧光激发块；
表2：荧光激发块
序号
激发块名称
激发光λ（nm）
发射光λ（nm）
滤掉光λ（nm）
1
WU
330-385
420
＜400
2
WB
450-480
515
＜500
3
WG
510-550
590
＜570
4
WBV
400-440
475
＜455
5
WIY
545-580
610
＜600
6
BF
明场、相差
4、打开荧光光闸⑯（SHUTTER），使其置于“O”位置；
5、将光路选择杆⑤推进去（ 选择目镜观察光路）；
6、转动物镜转盘⑦，选用合适的物镜，调节粗/细调焦旋钮⑧聚焦观察，根据荧
光强度选择合适的ND滤镜（荧光减光阀）⑱进入光路。（第一个ND100：100%
的荧光强度进入光路；第二个ND6：6%的荧光强度进入光路，第三个ND25:25%
的荧光强度进入光路）。
五、CCD成像
1、cellSens Standard工作站中，,点击右侧摄像控制中的实时观察；
2、将光路选择杆⑤拉出（，CCD成像光路），调节粗/细调焦旋钮进⑧行聚焦；
3、曝光：可先选择自动曝光，参照自动曝光时间，再通过手动调节曝光时间使
图像更清晰；
4、背景校准：进行明场和相差成像时执行白平衡 ，荧光成像时执行黑平
衡，在样品空白背景处画一个小区域，软件自动以该处为背景对整幅
图像进行调整，使所选区域显示为白色或黑色；
5、各成像参数设定完毕后，点击拍照 ，仪器自动成像；
6、右键文档工具栏窗口或在文件处进行保存（TIF或JPG格式）。

六、关机
1、实验完毕，先退出工作站；
2、将透射光光强调节钮③逆时针旋至最低，关闭透射光主开关（TH4）①；
3、确认汞灯开启超过0.5h，方能关闭汞灯高压电源②；
4、用无水乙醇擦拭镜头，并将物镜转盘转至空位，清理载物台及桌面；
5、刻录数据：放入全新光盘，将数据发送至光盘，电脑右下角出现刻录提示，
点击该提示进入，确认待刻录数据，点击“刻录到光盘”----下一步，刻录
完毕，光盘自动退出。
6、关电脑及显示器。
七、图像处理
1、标尺：在工具栏上选择正确的物镜倍数，点击“视图”---标尺，软件自动将
标尺加在图像上，再点击“图像”----印入信息，保存即可。
2、测量：点击“测量”----测量工具，软件左侧显示出测量工具栏，点击选择
所需的测量工具，在图像上画目标区域，右键点击结束测量即可显示结果。测
量结果可导出Excel：点击测量工具栏图标。
3、图像叠加：打开拟叠加的图，“图像”----组合彩色图像----“可用图像”中
选择拟叠加的图----√合并层----确认。
4、图像拼接：按一定顺序 拍摄图像，相邻两张图像的边缘要部分重叠，
所有图像拍摄完毕后，选择视图---工具---画廊---全选拟拼接的图像，选择
运算---图像拼接---设置水平方向图像数量---根据拍摄顺序摆好图像位置
---确定；预览后视情况选择“裁剪边缘”---确定。
八、注意事项
1、汞灯开启后必须至少使用0.5h才能关闭！汞灯关闭后若还需使用，必须等
后才能再次开启！
2、软件上如果没有显示“摄像控制”，通过以下方式调出：视图---工具窗口---
摄像控制。
3、在使用20X和40X物镜时，如不能清晰聚焦，先检查玻片是否清洁，放置是
否正确，再边转动物镜上的校正环，边聚焦，找到最佳校正位置。