诺贝尔化学奖.pptx

NO1993年诺贝尔化年诺贝尔化学奖学奖Kary MullisPCR 技术技术EducationGeorgia Institute of Technology,Atlanta,GeorgiaB.S.Chemistry,1966University of California,BerkeleyPh.D.Biochemistry,Advisor John B.Neilands,1972University of Kansas Medical SchoolPostdoctoral fellow,Pediatric Cardiology 1973-5University of California,San FranciscoPostdoctoral fellow,Pharmaceutical Chemistry 1977-9Biography(December 28,1944)EmploymentCetus Corporation,Emeryville,CA 1979-86Xytronyx Corporation,San Diego 1986-8Private Consultant Biotechnology 1987-92Writer 1993-Some significant awardsPreis Biochemische Analytik 1990Gairdner Foundation International Award 1991California Scientist of the Year 1992Robert Koch Prize 1992Japan Prize 1993Nobel Prize,Chemistry 1993p1953DNA双螺旋结构，自此确立了它就是细胞里携带遗传信息的分子。p1956第一个细胞内用来复制DNA所需的聚合酶（polymerase）分离成功。p1971Khorana曾提出：经过DNA变性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因。p1983Mullis对对PCR构想的提出构想的提出发现过程程(Har Gobind Khorana)p1979年，穆里斯进了湾区一家名叫Cetus的私人生物技术公司任职，设法改进寡核苷酸合成的效率。p1983年春天的一个周五晚上，他开车带着女友前往乡间的小屋度周末。在蜿蜒的乡间公路上开着车，一段DNA反复复制的景像，在他的脑海里冒了出来。穆里斯原以为这样简单的想法，应该有人提出过，但搜索文献后却发现没有。p同年8月，穆里斯首次在公司里正式作了有关PCR原理的报告，听者反应冷淡。否定原因：否定原因：1.DNA复制所需的聚合酶是蛋白质，在高温下会失去活性。2.要在千万条DNA当中，以一小段已知序列制成的引物，“钓”出所需的片段，进行复制十分困难。p从1983年9月起，穆里斯陆续进行了一些实验，换过几个DNA模板，也尝试不同的加热、降温周期，结果都不够肯定，顶多只在电泳凝胶上形成一条若有若无的线条。p由于穆里斯本身没有分子生物学的训练，公司派了技术员协助。1984年11月，穆里斯的技术员首次取得可信的结果，证明了PCR的可行。p1985年初，公司决定让技术精湛的日裔技术员才木（Randall Saiki）加入工作。p耐高温DNA聚合酶Taq 的引进，使PCR技术大量应用双螺旋结构被热变性解链为两股单链引物与上述单DNA上互补的序列杂交在一起，形成模板引物复合物。在DNA聚合酶作用下，以dNTP为原料，按照模板链的序列，53的方向合成一条新DNA链PCR技技术原理原理1234522557294时间（min）温度（）适温延伸3高温变性1低温退火2重复13步2530轮目的DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性DNA变性形成2条单链子链延伸DNA加倍DNA的体外定点突变与分析的体外定点突变与分析 PCR技术应用同源重组子的检测同源重组子的检测染色体染色体DNA的引物原位杂交的引物原位杂交DNA洗牌术（洗牌术（Shuffling）(Michael Smith 1932-)定点突变是指通过定点突变是指通过PCR等方法向目等方法向目的的DNA片段中引入所需变化，包括碱基片段中引入所需变化，包括碱基的添加、删除、点突变等。的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、高效的提高定点突变能迅速、高效的提高DNA所所表达的目的蛋白的性状及表征。表达的目的蛋白的性状及表征。法医学法医学 个体识别、亲缘鉴定 方法PCR-SSCP（聚合酶链式（聚合酶链式反应反应-单链构象多态）单链构象多态）是一种简单、快速、经济的用来显示在PCR反应产物中单碱基突变（点突变）的手段。也用于癌基因和抑癌基因突变的筛查检测。