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DB63-T 1709-2018牦牛胚胎快速冷冻保存及解冻技术-(高清版).pdf
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1、ICS 65.020.30 B43 DB63 青海省地方标准 DB 63/T 17092018 牦牛胚胎快速冷冻保存及解冻技术 操作规程 2018-12-26 发布 2019-03-20 实施青海省市场监督管理局 发 布 DB63/T 17092018 I 前 言 本标准依据GB/T 1.12009的规则编写。本标准由青海省农牧业标准化专业技术委员会提出并归口。本标准起草单位:青海省畜牧兽医科学院。本标准主要起草人:徐惊涛、孙永刚、李瑞哲。DB63/T 17092018 1 牦牛胚胎快速冷冻保存及解冻技术操作规程 1 范围 本标准规定了牦牛胚胎快速冷冻和解冻的操作方法。本标准适用于牦牛胚胎生产
2、技术推广应用的规范化操作。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 5458 液氮生物容器 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 GB/T 25881 牛胚胎 GB/T 26938 牛胚胎生产技术规程 NY/T 1572 牛胚胎移植技术规程 DB63/T 1163 牦牛体外受精胚胎生产技术操作规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3.1 牦牛胚胎 yak embryo 通过自然交配、
3、人工授精、体外受精等方式产生的牦牛早期受精卵(受精后6 d8 d)。3.2 胚胎快速冷冻 embryo rapid cryopreservation 经过清洗、胚胎冷冻保护剂平衡后,将胚胎直接置入液氮中保存的一种冷冻方法。3.3 胚胎解冻 thawing of frozen embryo 将冷冻保存的胚胎按照操作程序融化,去除冷冻保护剂,使胚胎恢复活性的过程。4 试剂、耗材、设备和实验室要求 4.1 试剂、耗材和设备 DB63/T 17092018 2 所用的试剂、耗材和设备以及要求见附录A。4.2 实验室要求 冷冻保存液、解冻液及移植液必须在符合GB 19489相关条款的实验室中配制。4.3
4、 器具清洗、消毒 所用器具的清洗、消毒见附录B。5 试剂配制及保存 5.1 试剂配制用水 试剂配制用水按照GB/T 6682中的分级标准采用一级水。5.2 冷冻保存液 5.2.1 基础液(BS)TCM-199中加入20%胎牛血清(FBS)。5.2.2 平衡液(ES)TCM-199中加入7.5%乙二醇(EG)、7.5%二甲基亚砜(DMSO)、20%胎牛血清(FBS)。5.2.3 冷冻液(VS)TCM-199中加入15%乙二醇(EG)、15%二甲基亚砜(DMSO)、0.5 mol/L蔗糖(Su)、20%胎牛血清(FBS)。5.3 胚胎解冻液 5.3.1 解冻液(TS)TCM-199中加入1.0 m
5、ol/L蔗糖(Su)和20%胎牛血清(FBS)。5.3.2 稀释液(DS)TCM-199中加入0.5 mol/L蔗糖(Su)和20%胎牛血清(FBS)。5.4 改进 PBS 液(m-PBS)改进PBS液(m-PBS)配制见附录C。5.5 胚胎移植液(TM)m-PBS中加入4 mg/mL牛血清白蛋白(BSA)和10%胎牛血清(FBS)。5.6 解冻后胚胎培养液 TCM-199液中加入10%胎牛血清(FBS)和100 U/mL青霉素、100 g/mL链霉素。5.7 试剂保存 DB63/T 17092018 3 5.7.1 基础液、平衡液、冷冻液、解冻液、胚胎移植液等试剂在无菌操作台中配制,配制后的
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