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(高清正版)DB42T1621-2021辣椒炭疽病抗性鉴定技术规程.pdf
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1、 ICS 65.020.20 CCS B05 DB42 湖北省地方标准 DB42/T 16212021 辣椒炭疽病抗性鉴定技术规程 Technical regulation for evaluation of pepper resistance to anthracnose disease 2020-12-30 发布 2021-03-01 实施 湖北省市场监督管理局 发 布 目次 前言.III 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 接种体制备.1 5 室内抗性鉴定.2 6 病情调查.3 7 抗病性评价.3 8 记载表格.3 附录 A(资料性)辣椒炭疽病的分类及症状.4
2、附录 B(资料性)辣椒炭疽病分离物 PCR 检测方法.5 附录 C(资料性)辣椒炭疽病抗性鉴定病情分级标准、评价标准、抗性评价统计表.7 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件的某些内容可能涉及专利,本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖北省农业科学院经济作物研究所提出。本文件由湖北省农业农村厅归口。本文件起草单位:湖北省农业科学院经济作物研究所、湖北省蔬菜办公室、湖北兆至现代农业科技股份有限公司、利川市南坪蔬菜专业合作社。本文件主要起草人:王飞、李宁、尹延旭、姚明华、焦春海、周雄祥、高升华、余楚英、张成、肖明兆
3、、陈勇、张益、陈财。本文件实施应用中的疑问,可咨询湖北省农业农村厅,联系电话:027-87665821,邮箱:。对本文件的有关修改意见建议请反馈至湖北省农业科学院经济作物研究所,联系电话:027-87380819,邮箱:。辣椒炭疽病抗性鉴定技术规程 1 范围 本文件规定了辣椒炭疽病抗性鉴定的接种体制备、抗性鉴定方法、病情调查、抗病性评价以及记载表格的基本要求。本文件适用于湖北省辣椒炭疽病的抗病性鉴定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于
4、本文件。NY/T 2060.1 辣椒抗病性鉴定技术规程 第1部分:辣椒抗疫病鉴定技术规程 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 接种体制备 PDA 培养基 制备PDA培养基1 L,应称取洗净去皮的马铃薯200 g,切成小块,置于锅中加水煮0.5 h左右,在烧杯上用纱布过滤马铃薯残渣,收集滤液置于干净锅中,加入15 g20 g琼脂,加热搅拌溶解后,再加入葡萄糖20 g搅拌均匀,冷却后定容至1L,分装于试管或者锥形瓶中,加塞、包扎后121,灭菌30 min后取出,试管摆斜面或者摇匀,冷却后贮存备用。接种体的分离 采集田间具有典型炭疽病症状的果实,用常规组织分离法从果实病斑上获得分离物
5、(参见附录A)。接种体的鉴定 分离物经肉眼观察培养性状、菌落形态特征初步确认为胶孢炭疽菌后,用分子生物学方法(参见附录B)验证。接种体保存 将鉴定的新鲜胶孢炭疽菌进行3 次单孢分离纯化后,转接于含PDA斜面培养基的5 cm试管中,28 下黑暗培养3 d后,在斜面上加入距试管口1 cm的灭菌矿物油后置于4 保存。生产上的接种体宜每年分离、复壮1 次。接种体复壮 将保存在PDA斜面培养基上的接种体置于28 下黑暗培养3 d,从菌丝边缘用打孔器截取直径0.5 cm的菌丝块接种在表面消毒的感病辣椒果实上,置于温度为28、湿度为90%的环境中光照和黑暗(12 h/12 h)交替培养,等果实发病后进行病原
6、菌分离。接种孢子制备 将复壮分离后获得的病原物接种在PDA培养基上,置于28、湿度为90%的环境中黑暗培养7 d,待菌丝长满平板后,将平板置于28、湿度为90%的环境中光照和黑暗(12 h/12 h)交替培养,待产生分生孢子后,用无菌水清洗分生孢子,用3层灭菌的擦镜纸过滤菌丝,制成浓度为1105 个/mL分生孢子悬浮液。5 室内抗性鉴定 试验设计 取辣椒青熟果(花后35 d40 d)或红熟果(花后45 d50 d),每个鉴定品种或材料设3 次重复,每个重复10 个果实,一半接种分生孢子悬浮液,一半用无菌水做对照。试验环境 应具备人工调节温度、湿度和光照的条件,使接种后具备良好的发病环境。对照材
7、料 感病对照品种:“茄门甜椒”,中国农业科学院蔬菜花卉研究所提供。抗病对照品种:“PBC 932”,亚洲蔬菜中心提供。鉴定材料准备 鉴定材料适时播种、育苗、定植、采摘,按照常规田间管理(不喷施杀菌剂),保持鉴定材料的一致性。鉴定材料的育苗应符合NY/T 2060.1的要求。确保果实形状和成熟度一致、无病虫为害症状,用清水洗净,晾干或置于超净工作台上吹干,放入75%的乙醇溶液中浸泡2 min,用1%次氯酸钠溶液浸泡2 min,用无菌水洗净,置于超净工作台晾干。接种 5.5.1 接种体浓度 接种分生孢子悬浮液1 L,浓度为1105 个/mL。接种无菌水1 L。5.5.2 接种方法 采用微量注射法接
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