抗原抗体及其结合反应.ppt

抗原抗体及其结合反应 教 学 目 的l掌握：抗原抗体结合力、抗原抗体结合反应特点l熟悉：影响抗原抗体结合反应的因素第一节 抗原l一、抗原的特性l免疫原性、免疫反应性l特异性l二、用于免疫测定的抗原分类l天然、合成多肽、基因重组第二节 抗体l一、抗体的特性l特异性、多样性、免疫原性l二、用于免疫测定的抗体分类l多克隆、单克隆、基因工程l三、抗体产生的规律l初次应答、再次应答第三节 抗原抗体结合反应的原理抗原抗体反应:指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。抗原表位与抗体高变区间的结构互补抗原表位与抗体高变区的紧密接触抗原抗体之间的结合力亲水胶体转化为疏水胶体物质基础一、抗原抗体结合力静电引力范德华引力氢键疏水作用力抗原抗体结合力示意图.静电引力（electrostatic forces）抗原和抗体分子带有相反电荷的氨基和羧基基团之间相互吸引的力。又称为库伦引力2.范德华引力（Vonder Waals forces）抗原和抗体相互接近时，由于分子的极化作用而出现的引力。范德华引力静电引力3.氢键结合力供氢体上的氢原子与受氢体原子间的引力供氢体：羧基、氨基和羟基 受氢体：羧基氧、羧基碳和肽键氢键具有高度的方向性4.疏水作用力（疏水键）两个疏水基团在水溶液中相接触时，由于对水分子排斥而趋向聚集力。二、抗原抗体的亲和力和亲合力抗原抗体亲和力示意图抗原抗体亲合力示意图抗原抗体亲合力示意图三、液相中抗原抗体的结合反应抗原抗体复合物 (疏水胶体)可见反应电解质 抗原 (亲水胶体)抗体四、固相表面抗原抗体的结合反应1.抗原抗体结合反应时间2.反应体积3.解离速度4.固相化抗原或抗体的构象第四节 抗原抗体结合反应的特点特异性 可逆性比例性 阶段性 亲水胶体转化为疏水胶体示意图亲水胶体疏水胶体可见反应一、特异性抗原抗体反应特异性示意图特异性示意图特异性示意图交叉反应（交叉反应（cross reactionscross reactions）抗原抗体交叉反应示意图抗原抗体交叉反应示意图二、可逆性可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性影响因素：抗体对相应抗原的亲合力 环境因素对复合物的影响【Ag】+【Ab】【Ag-Ab】解离后抗原抗体仍保持原有特性。一定条件：低pH、高浓度盐等。Ab1比例性：抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系最适比：沉淀物最多时的抗原抗体的浓度比或量比等价带:抗原与抗体分子比例合适范围前 带：抗体过量后 带：抗原过量三、比例性 抗原抗体反应比例性示意图抗原抗体反应比例性示意图四、阶 段 性第一阶段：特异性结合阶段第二阶段：反应可见阶段第五节 影响抗原抗体结合反应的因素抗原抗体本身因素反应基质因素 实验环境因素一、抗原抗体本身因素抗原:理化性状、表位种类和数目抗体:来源、特异性、亲和性、效价来源R型Ab：等价带宽，易出现可见反应。H型Ab：等价带窄，易出现前带或后带McAb:不宜用于凝集和沉淀反应。浓度：是相对Ag而言，比例要合适，故实验前需滴定，以求最适Ag与Ab比例。特异性与亲和力：关键因素，选择特异性与亲 和力高的Ab。二、反应基质因素非特异性因素，如蛋白、盐、药物等三、实验环境因素电解质:0.85%生理盐水或缓冲液酸碱度:pH 68温 度:37最适(一）电解质作用：中和胶体表面电荷，破坏水化层，使Ag-Ab聚集。常用：0.85%NaCl溶液，缓冲液、Ca2+、Mg2+等。（二）酸碱度 抗原抗体反应中一般以pH6-8为宜，有补体参与的反应最适pH为7.2-7.4 酸凝集：当pH为3左右时，接近细菌Ag的等电点，可出现非特异性凝集。（三）温度 最适温度为37或室温18-25为宜。若温度高于56，可导致已结合了的抗原抗体复合物解离，甚至分子变性。抗原抗体反应类型反应类型实验技术结果判断凝集反应直接凝集试验观察凝集现象间接凝集试验同上抗球蛋白试验同上沉淀反应液相沉淀试验观察沉淀，检测浊度免疫电泳技术观察扫描沉淀峰、沉淀弧补体参与的反应补体溶血试验观察测定溶血现象补体结合试验同上反应类型实验技术结果判断中和反应病毒中和试验检测病毒感染性毒素中和试验检测外毒素毒性标记免疫反应荧光免疫技术检测荧光现象放射免疫技术检测放射性强度酶免疫技术检测酶底物显色发光免疫技术检测发光强度金免疫技术检测金颗粒沉淀标记免疫技术 用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光物质等标记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过检测标记物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析思 考 题1抗原抗体结合反应的原理？2抗原抗体的结合力有哪些？3抗原抗体结合反应的特点？小 结1.抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发 生的特异性结合反应。2.抗原抗体之间的结合力涉及静电引力、范德 华引力、氢键和疏水作用力。3.抗原抗体反应的特点是特异性、可逆性、比 例性和阶段性。