干细胞治疗工作作业流程.doc

干细胞诊疗工作步骤
脐带血临床采集步骤
干细胞是一个未分化细胞，含有自我更新、分化、发育再生多种组织器官和人体潜在功效。
脐带血广泛应用前景备受关注，脐带血本属于废弃物，不过医学技术进步使得它价值得到了空前提升。1989年，法国鲁克罗曼教授用HLA相协议胞脐带血干细胞进行移植，成功地诊疗了一例遗传性疾病— 范可尼贫血症，以后短短时间内，医学界利用脐带血干细胞已成功治愈和改善了多个疾病，包含:血液系统疾病、免疫系统疾病、神经和血管系统疾病、脑部疾病、肿瘤、糖尿病等。现在在儿童干细胞移植方面，因为能够存在1-2个HLA位点不配型，免疫排斥反应小等原因，脐带血干细胞已成为诊疗部分重大疾病有效手段。同时，干细胞深入开发，还可用于抗衰老、器官修复、美容等保健领域。干细胞技术和临床应用飞速发展，给人类健康带来了新期望和保障。不过作为采集脐带血最关键工作人员，我们所需要操作是很简单，不过对于术中操作之外，我们还是会碰到以下问题。处理这些问题，我们才能放心采集，存放，备用。不过真正正当，安全，便捷让脐带血内干细胞移植到有需要患者体内，需要按以下步骤操作：
脐带血采集条件：
以初产妇、年纪在45岁以内或35岁以内经产妇，身体健康者为宜。
脐带血安全步骤
1、传染病检验：孕妇在产前要做好身体检验。这些检验包含:肝功效是否正常，有没有梅毒螺旋体，艾滋病病毒(HIV )、乙型肝炎病毒(HBV )、丙型肝炎病毒(HCV)等病原体检测。假如其中有一样是阳性话，就不要再进行采集了。
2、采集和储存无菌观念：在自然分娩情况下，一定要注意消毒。被厌氧菌和需氧菌污染，检测为阳性时全部不能储存和使用。在脐血被采集后，应该立即保留在2-8℃恒温箱中，并远离辐射源，不要让X射线照到。这么脐带血经科学试验证实，放置二十四小时或在-23℃以下48小时，其中干细胞活性是没有显著影响，但最长不应该超出72小时。
采集步骤
何种方法采集脐带血愈加好些呢？Solves[5]等证实了剖宫产情况下，以下两种采集方法体内采集法对得到脐带血除血细胞比容及血小板外，其它各项没有显著不一样。
体内采集法：产妇施行常规子宫横切术，将胎儿取出后，立即用两把止血钳夹住脐带，将其和胎儿分离，然后用碘酒和70%酒精消毒脐带，做脐静脉穿刺后，脐带血经过重力作用流人内含抗凝剂无菌采集袋，采集完将其放入4℃冰箱中保留。
体外采集法：一样对产妇行子宫横切术，待胎盘自然或人工剥离后，立即将其置于采集区，胎盘取出和进行采集之间时间尽可能缩短，将胎盘放在一个中间有孔可供脐带自然垂下采集台上，对脐带进行严格消毒后行脐静脉穿刺，血液在重力作用下流人采集袋中，将其放人4℃冰箱保留。
脐带血贮存
因为脐血采集、运输、储存和应用实际上有别于通常血液，国际上通行管理法规全部将血液和组织细胞分别管理，而中国现在法规对脐血干细胞库只简单归属血液管理， 严重阻碍了干细胞产业发展。首先，起源不一样，脐带血是产妇和新生儿血循环以外胎盘和脐带中血液，一直是医院产科废弃物，采集对产妇和新生儿无任何风险，然而其采集作为产妇生产过程一部分，只能由产科医护人员进行，不可能由其它人员采集；而其应用关键是其中干细胞，不会发生通常血液公共安全问题。我们所在手术室其实是脐带血采集关键场所，手术室护士和产科医生也将是脐带血采集关键人员，所以对于脐带血采集问题还是需要有必需认识。
1、采集足月妊娠健康产妇脐血，以肝素抗凝（40u/ml），脐血采集量50～100ml，采集后2h内进行分离纯化处理。
2、胎儿分娩后立即抽取脐血,经抗凝,2--8℃冰箱保留。

骨髓采集步骤
接收干细胞诊疗病人在术前应加强营养，改善体质。签署知情同意书，干细胞诊疗志愿书，手术同意书，及相关法律文书。对病人进行生命体征观察，有发烧和炎症患者需要待炎症控制后再进行移植诊疗，女性病人避开月经期。全身衰竭，严重肝肾功效损害病人不宜进行自体骨髓干细胞移植诊疗。另外，依据移植路径不一样给病人做好对应术前处理。
1： 术前心理疏导，消除患者担心情绪。
重组人粒细胞刺激因子天天注射一支（皮下注射），打1--2天；病人身体状态好，可不用做动员。
2：术前准备一般骨穿针2个，10ml注射器20个，在采集骨髓前将每个注射器中加入1ml肝素（抗凝），一次性采血袋或准备一个200ml以上容量瓶子，术前消好毒，上盖橡胶盖或软木盖，方便插针头，方便采集骨髓往瓶中注入。术前30min行常规剂量头孢二代抗菌。
3：骨髓采集通常为2——4个点采集，在两个点不能够采集好情况下，采集最大4个点。
4：将采集好骨髓或脐带血用医用纱布包裹，送分离。送病人回病房。
5：将分离好干细胞用生理盐水稀释成4-5ml干细胞悬液备用。
6：术后进行48小时体温监测。
适应症
理论上干细胞能够诊疗一切细胞损伤性疾病。现在已经使用宁夏中联达生物产品应用技术成熟、疗效可靠、安全性高疾病关键有：肝炎肝硬化、溃疡性结肠炎、糖尿病足、闭塞性脉管炎下肢坏死、神经损伤性疾病、老年痴呆症、肌萎缩性脊髓侧索硬化症、帕金森氏病、糖尿病等
禁忌症
一切非细胞损伤性疾病；血液病；肝肾功效严重不足；发烧病人；有严重出血倾向病人；孕妇或哺乳期女性；合并大量腹腔、肺部或其它系统严重感染；心、肺、肾等关键脏器功效不全/衰竭不能配合诊疗；过敏体质等其它严重情况影响诊疗等。

科室运作步骤
选择病例→术前准备（术前相关检验、谈话统计、知情同意书，干细胞起源选择脐带血、骨髓血）→标准收费
①脐带血通知妇产科或厂家
→诊疗前两日通知细胞分离室 ②骨髓血不能在细胞分离室采则通知手术室（术前一日通知）
→ 需介入通知介入科（术前一日通知）或再次通知手术室
诊疗当日；进行骨髓血、脐带血采集→送细胞分离室分离→分离时间3小时左右结束→干细胞送诊疗室（介入科或手术室诊疗）→病人送回病房。
神经系统病变
适应症
脑外伤、脑外伤后遗症
脑梗塞、脑出血
脊髓损伤性截瘫急性期末（一周）
脑发育不全、脑萎缩
老年性痴呆、智力低下、帕金森病
脑瘫、长久昏迷、植物生存状态
肌萎缩侧索硬化症
运动神经元病

诊疗方法
经颈内动脉介入干细胞移植
1、选择符适宜应症患者，排除心、肺、肝、肾等脏器重大疾患。
2、行头部磁共振、血、尿常规，凝血功效，输血四项，乙肝三系，生化全套，胸部DR、心电图等，排除手术禁忌。
3、采取骨髓或脐带血分离纯化(负搜集混正当)搜集干细胞，总数需＞2×106/L。
4、患者转移至介入室，常规经右腹股沟穿刺放置导管鞘，用5F多功效造影管分别行双侧颈内动脉及椎基底动脉造影，排除脑血管畸形等疾病，并经双侧颈内动脉注入充足稀释后干细胞悬液4--5ml，续推2ml生理盐水。
5、术后配合单唾液酸四己神经节苷脂注射液等营养神经诊疗。
6、采取美国功效独立性评测评分对患者术前、术后3个月、6个月进行评定。关键评价 6个方面能力：生活自理能力，括约肌控制能力，活动能力，行动能力，了解交流能力，社会认识能力。
腰穿注射干细胞移植
1、 术前心理疏导，消除患者担心情绪。
2、 患者侧卧，“抱膝凸腰”打开腰椎间隙。
3、 选择L3－4间隙为穿刺点，术野消毒铺巾。
4、 穿刺成功后引出脑脊液2-3ml。
5、 取干细胞浓度〉2×106/L提取液4ml缓慢推注至蛛网膜下腔，续推2ml生理盐水。
6、 留针3～5min观查病人，正常后拔针，无菌纱布覆盖穿刺点，术后去枕平卧6小时。

立体定向移植
采取立体定向技术定位病变部位，在局麻状态下，颅骨钻孔，插入穿刺针，应用微量泵将事先准备干细胞缓慢注入靶点。

脑室引流管注入

静脉滴注
用生理盐水稀释至100ml一小时内缓慢静脉滴入

肝病科
适应症：
肝炎后肝硬化失代偿期 酒精性肝硬化失代偿期
原发性胆汁淤积性肝硬化 丙肝后肝硬化失代偿期
不明原因性肝硬化失代偿期 本身免疫性肝病
药品性肝病 急性重型肝炎
慢性重型肝炎 肝炎后肝硬化合并肝癌
重症肝炎合并肝癌

诊疗方法
肝固有动脉介入：在DSA下经股动脉穿刺插管,置管于肝固有动脉进行造影,观察肝内血管情况及有没有占位性病变。将待用细胞悬液10-15ml于10-15分钟内经肝固有动脉或左右肝动脉缓慢注入;术毕拔管,穿刺点加压包扎后返回病房,穿刺侧下肢制动6h。

内分泌科
适应症：
Ⅰ型糖尿病
Ⅱ型糖尿病
糖尿病足

诊疗方法
Ⅰ型糖尿病
采取环磷酰胺+ 兔抗胸腺细胞球蛋白方案预处理，两日将分离好干细胞稀释至100ml静脉回输或在DSA引导下经股动脉穿刺插管置管于胰背动脉将干细胞悬液10ml缓慢注入。
Ⅱ型糖尿病
在DSA引导下经股动脉穿刺插管置管于胰背动脉将干细胞悬液10ml缓慢注入。
Ⅰ型、Ⅱ型观察诊疗前后胰岛素注射剂量、HbA1c、平胰岛功效、等改变。
糖尿病足
将分离好干细胞用生理盐水稀释至60ml／腿干细胞悬液备用。
消毒、铺巾，双下肢贴皮肤保护膜。将干细胞悬液注射到患者缺血下肢。从上向下次序注射，每个点注射约1ml，注射深度在1.5—2cm之间，相邻最大间距离为1—1.5cm。注射完成后，注射点用无菌敷料包扎。

血管外科
闭塞性脉管炎
诊疗方法：将分离好干细胞用生理盐水稀释至60ml／腿干细胞悬液备用。
消毒、铺巾，双下肢贴皮肤保护膜。将干细胞悬液注射到患者缺血下肢。从上向下次序注射，每个点注射约1ml，注射深度在1.5—2cm之间，相邻最大间距离为1—1.5cm。注射完成后，注射点用无菌敷料包扎。

骨科
股骨头坏死
干细胞诊疗方法：
方法一：用脐带血或在局麻下穿刺髂骨，取出自体骨髓150 mL，取得干细胞悬液约10～20 mL，于取得干细胞后1～2 h内先行股骨头髓芯减压，然后再行动脉灌注，灌注完成后选择旋股内侧动脉注射入部分干细胞悬液后拔除导管及鞘管，随即用特制刮勺伸入环锯内搔刮坏死区后，再将剩下干细胞悬液注射入环锯内，由环锯内填入大粗隆处正常松质骨及少许明胶海绵（或生物胶）以预防干细胞漏出，拔除环锯，皮肤缝合。
方法二：在DSA引导下行股动脉穿刺，将导管超选插入旋股内动脉、旋股外动脉及闭孔动脉，将取得干细胞悬液10ml～20ml缓慢注入动脉内。
术后采取髋关节Harris评分及影像学(关键为MRI)情况评定疗效合
骨不连
诊疗方法：x线透视下将1枚骨穿针正确穿入骨不连部位，并用针尖轻轻剥离骨不连部位瘢痕组织及硬化骨质；用注射器抽取已制备并稀释好干细胞加压注入骨不连部位髓腔内、骨折断端之间纤维瘢痕中及其表面；每例不少于3个注射点，每点注射6～ 10ml，确保干细胞在骨不连处均匀分布，局部稍加压包扎。注射量依据骨折部位而定，肱骨及胫骨中上段注射20 ml，胫骨下段骨折注射20～30 ml。术后依据内固定坚固程度，辅助使用外固定4～6周。注射1个月后复查x线片，如有硬化边缘清楚，无新生骨形成，无骨小梁经过骨折缝隙，骨不连间隙无显著缩小，患处压痛减轻不显著者，再次注射1次。可数次注射，每次注射间隔均为1个月左右。

消化内科
适应症：
溃疡性结肠炎
诊疗方法：首先确定溃疡面位置，溃疡面在肠系膜上动脉以上，在DSA经股动脉插管至肠系膜上动脉，缓慢将干细胞悬液注入。溃疡面在肠系膜上动脉以下，经股动脉插管至肠系膜下动脉，缓慢将干细胞悬液注入。
克罗恩病
诊疗方法：大剂量化疗两日，第三日将取得干细胞悬液用生理盐水稀释至100ml，采取大号针头经静脉回输干细胞。

心内科
适应症：
心肌梗死
扩张型心肌病
心力衰竭

诊疗方法：
①在进行灌注前给病人做6分钟步行测试并统计数据，统计病人EF值及脑钠值。
②将分离好干细胞稀释成10ml干细胞悬液备用
③在手术室备除颤器。
④由股动脉插管到冠状动脉前降支，分别将干细胞缓慢（10min以上）注射到前降支远端、中端、近端。
⑤诊疗前后常规使用其它诊疗心肌病药品。

肾内科
适应症：
慢性肾脏病
狼疮性肾炎
IGA肾病
诊疗方法：在DSA引导下经股动脉插管至双肾动脉，将取得干细胞悬液20ml缓慢注入，每肾10ml。术后监测患者生命体征。

泌尿外科、妇产科

适应病种：
压力性尿失禁
勃起功效障碍

使用方法：
①压力性尿失禁：尿道粘膜下和括约肌注射法：将干细胞悬液稀释至10—15ml，在超声波三维显示下，用10mm针将干细胞悬液经尿道周围注射至尿道黏膜下及周围尿道括约肌内，深度至膀胱颈为止，行四个方位尿道粘膜下和括约肌点状注射，每点0.5-1ml。整个植入手术约２０分钟，注射干细胞诊疗女性患者疗效较男性好,有效率分别为90%和72%。通常在接收注射3~4周后有充足显效,且疗效似乎是长久。
②勃起功效障碍：阴茎海绵体注射法、在腰麻下将干细胞悬液稀释至6ml，用注射器抽取在阴茎神经根部周围及阴茎海绵体四个方位行12个点状注射法，每点0.5ml。

肿瘤科、血液科

适应病种：
肿瘤放、化疗后支持诊疗，增强造血系统、免疫系统修复；
肝癌介入栓塞合并干细胞诊疗；

移植路径：
1、静脉滴注：在大剂量化疗方案两以后将脐带血干细胞悬液稀释到100ml生理盐水中用大号针头缓慢输入。
2、肝癌介入栓塞合并干细胞诊疗；在DSA下经股动脉穿刺插管, 行肝癌介入栓塞后将待用细胞悬液10-15ml于10-15分钟内经肝固有动脉或左右肝动脉缓慢注入;术毕拔管,穿刺点加压包扎后返回病房,穿刺侧下肢制动6h。

风湿免疫科
适应症：
系统性红斑狼疮
类风湿性关节炎
多发性硬化
系统性硬化症
诊疗方法；患者进入层流病房，两日大剂量化疗，第三日将取得干细胞悬液用生理盐水稀释至100ml，采取大号针头经静脉回输干细胞。

呼吸科

适应症：
肺动脉高压
肺纤维化

移植路径：
上肢静脉输入法：用生理盐水将干细胞悬液稀释至100ml缓慢输入。
右心导管介入注射法：对PAH常进行右心导管检验测压，诊疗时可采取直接插管进入肺动脉缓慢注射干细胞悬液各10ml，该路径干细胞在血循环时间最短，细胞直接进入肺动脉末梢血管网，能确保有效细胞水平和活性，更有利于细胞定植和分化发育，是诊疗PAH最好路径。

眼科

适应病种：
黄斑变性病 遗传性视网膜病 小儿先天性视神经发育不全，视神经萎缩，眼底黄斑老年

移植路径：
1、静脉点滴。方法简单，不过收效慢，细胞抵达病灶部位数量少;
2、蛛网膜下腔注射。可使细胞快速抵达脑脊液，发挥功效，效果显著，两周左右改善病情；
3、玻璃体腔注射，收效快。
4，前三种方法联合使用，可在短期内达成很好效果
美容科
适应病种：
延年益壮和老年病
去疤痕
诊疗亚健康

移植路径：
1、 静脉滴注：将脐带血干细胞悬液稀释到100ml生理盐水中用大号针头缓慢输入。
使用后阶段性效果
    10天左右：改善睡眠深度，提升睡眠质量
    30天左右：脸色红润有光泽，皮肤细腻有弹性，精力充沛
    90天左右：精神焕发，抗疲惫能力显着增强，机体器官代谢旺盛，全身散发自然清香，从内到外全部有年轻10岁感觉，远离疾病困扰，恢复傲人体型。
    适用人群：干细胞疗法适用对本身皮肤质量有更高要求人士，在延缓衰老，增强机能、提升肌肤呼吸能力上有特殊疗效，几乎能达成使肌肤返老还童地步。
2、局部注射法：用细小针头将干细胞悬液注射到受术者皱纹、凹陷性疤痕部位，每点0.5-1ml。