琼脂培养基适用性检查专项方案.doc

R2A琼脂培养基合用性检查方案

文献编号：VP-QC--05

起 草 人：
审 核 人：
批 准 人：
批准日期： 年 月 日

目录

1 概述.........................................................................................................................1
2 验证目及范畴.......................................................................................................1
3 验证小组人员构成及职责........................................................................................1
4 验证根据..................................................................................................................2
5 验证前准备..............................................................................................................2
6 验证明行..............................................................................................................2
7 偏差解决..................................................................................................................5
8 验证数据及评估.......................................................................................................5
9验证报告及评审........................................................................................................5
10 再验证及周期........................................................................................................5
11 验证文献及归档.....................................................................................................5
12 附件.......................................................................................................................5

1 验证目及范畴
《中华人民共和国药典》中规定纯化水微生物限度检查采用培养基为R2A琼脂培养基。为了保证纯化水微生物限度检查精确性和可靠性，需对该R2A琼脂培养基进行合用性检查实验。
2 验证办法
照药典非无菌产品产品微生物限度检查：微生物计数法（通则1105）中“计数培养基合用性检查”胰酪大豆胨琼脂培养基合用性检查办法进行，实验菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌，应符合规定。
3.验证小组人员构成及职责：
3.1验证小组由如下部门人员构成：质量部、QC、生产部。
3.2 验证小组构成及职责列表
构成
职 责
QC
1. 负责起草验证方案起草
2. 负责本方案培训
3. 仪器仪表校验确认
4. 负责验证明行
5. 负责数据收集和整顿
6. 负责数据分析
7. 负责完毕验证报告
质量部
1. 负责验证方案、验证报告审核与批准
2. 负责验证现场监督审查
生产部
1. 负责保障设备、器具完好
2. 负责动力系统保障
4 验证接受原则
4.1 被检固体培养基上菌落平均数与对照培养基上菌落平均数比值应在0.5~2范畴内，且菌落形态大小应与对照培养基上菌落一致；
4.2 被检液体培养基管与对照培养基管比较，实验菌应生长良好。
 5.验证前准备
 5.1验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后（且在验证明行前）对本次验证有关人员进行培训。培训人员记录见附件1。 
5.2将所有平皿和稀释剂都应当严格按照有关灭菌程序消毒，以保证其对实验成果没有影响。 
5.3 确认仪器仪表设施通过确认和校验，并填写确认记录。
5.4 有关文献
序号
有关文献
文献编号
1
DHG型电热恒温鼓风干燥箱操作规程
WI-100
2
BSC-100-II-B2生物安全柜操作和维护保养规程
WI-101
3
WXQI-S-18SI自动手提式灭菌器使用和维护保养规程
WI-103
4
DK型电热恒温水浴锅操作规程
WI-104
5
HWS型恒温恒湿箱操作规程
WI-105
6
JAN电子天平操作及维护保养规程
WI-106
7
PHS-3C型PH计操作及维护保养规程
WI-108
8
SHP-3C型低温生化培养箱操作及维护保养规程
WI-109
9
YJ-875SDB型净化操作台操作及维护保养规程
WI-113
10
《培养基管理规程》
WI-76
6.验证明行
6.1 实验材料
6.1.1培养基
类别
培养基名称
厂家
批号
验证培养基
A2R琼脂培养基

对照培养基
胰酪大豆胨琼脂培养基

6.1.2 仪器设备
DHG型电热恒温鼓风干燥箱、BSC-100-II-B2生物安全柜、WXQI-S-18SI自动手提式灭菌器、DK型电热恒温水浴锅、HWS型恒温恒湿箱（30～35℃）、JAN电子天平、PHS-3C型PH计、SHP-3C型低温生化培养箱（20～25℃）、YJ-875SDB型净化操作台。
6.1.3 稀释剂：
PH无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液
6.1.4 计数用培养基
胰酪大豆胨琼脂培养基
6.1.5 验证用菌株
铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104]
枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]
6.1.6 灭菌前调节PH溶液：
10%碳酸钠溶液或1mol/L氢氧化钠溶液/15%冰醋酸溶液或1mol/L盐酸溶液。
6.2 验证内容
6.2.1 培养基配制灭菌过程
将分装包装好培养基分别放入灭菌器中121℃灭菌15分钟后取出。取1管已灭菌培养基，放冷至25℃测定pH值，应在7.260.2范畴内。
6.2.1.4 外观性状
灭菌后培养基应对其外观性状仔细检查，如发现色泽异常、浑浊、橡胶塞被培养基沾染等，均应挑出弃去。将制备好培养基保存在2～25℃、避光环境中，在存储2周后，培养基外观应色泽正常，澄清透明。
6.2.2菌液制备
接种铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30〜35℃培养18〜24小时。
6.2.3 菌液计数（每种菌液接种2个）
6.2.3.1 分别取上述制备铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌（50～100cfu/ml）各1ml加入无菌培养皿，及时注入不超过45℃胰酪大豆胨琼脂培养基15~20ml，混匀，凝固，置30~35℃培养箱培养48小时，计数每株实验菌平行制备2个平皿。
6.2.4培养基合用性检查
6.2.4.1分别取上述制备铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌各1ml加入培养皿，每种菌液平行做2皿，及时注入不超过45℃胰酪大豆胨琼脂培养基15~20ml，混匀，凝固，置30~35℃培养箱培养48小时；分别计数。同步取相应对照培养基代替被检培养基进行上述实验。
6.2.4.2取每管装量为9ml胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种不大于（50～100cfu/ml）铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌1ml各2支，另1支不接种作为空白对照，置30~35℃培养箱培养48小时，逐日观测结。同步取相应对照培养基代替被检培养基进行上述实验。
6.2.5 成果鉴定：
6.2.5.1被检固体培养基上菌落平均数与对照培养基上菌落平均数比值应在0.5~2范畴内，且菌落形态大小应与对照培养基上菌落一致；
6.2.5.2被检液体培养基管与对照培养基管比较，实验菌应生长良好。
7.偏差解决
验证数据产生任何偏差，应及时进行偏差调查，按照《化验室偏差管理规程》进行解决并如实记录，给出合理偏差解决办法，并上报验证领导小组，记录备案，并且依照解决办法进行相应解决，并对解决过程、成果进行记录与跟踪。
验证小组依照数据分析，做出相应评估与结论，报请验证委员会批准。
8验证数据及评估
验证小组对验证检测数据进行评估，并对成果进行评价
成果评价：

评价人： 日期：
9.验证报告及评审
9.1 验证小组根据本方案实行验证，编写验证报告。
9.2 验证小组组织专业人员对验证报告进行评审。
9.3 QA对验证报告给出结论，验证合格发放验证合格证。
10.再验证及周期
10.1纯化水微生物限度检查用A2R琼脂培养基合用性检查验证，其再验证周期普通为三年，以证明确认培养基可靠性。
10.2当药典中纯化水微生物限度检查法发生变更时，需进行再验证；
10.2 当所用到检查设备浮现故障进行重大维修，特别是核心部件维修；仪器性能发生了明显偏移，已不能再满足检查产品质量规定期，均需要对该检查办法进行重新确认，以证明变更对已经确认效果无影响。
11.验证文献归档
验证结束，所有验证文献（验证方案、验证报告、验证记录、验证合格证等）归档质量部。
12.附件
12.1 验证小组构成及职责
12.2 验证前确认记录
13.5 验证成果评估记录
13.6 验证合格证

验证前确认记录
一、验证前仪器仪表确认
序号
名称
编号
上次校验时间
与否在有效期内
1

2

3

4

5

确认人： 日期：

实验材料表

一、计数用培养基
胰酪大豆胨琼脂培养基：批号： 来源：

三、验证用菌种
菌种类型
菌种代数
批号
来源
铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104]

枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]

四、灭菌前调节pH溶液
溶液名称
配制批号
配制日期
有效期至
配制人
10%碳酸钠溶液

1mol/l氢氧化钠溶液

15%冰醋酸溶液

1mol/l盐酸溶液

检查人： 日期： 复核人： 日期：

附表2
培养基pH值
培养基名称
配制批号
灭菌前pH值
灭菌后pH值
鉴定成果

检查人： 日期： 复核人： 日期：

附表3
外观性状
培养基名称
批号
灭菌后外观检查
保存2周后外观检查
成果鉴定
日期：
日期：

检查人： 日期： 复核人： 日期：

表4
培养基无菌性检查表

培养基名称
管数
培养时间（天）
培养温度
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14

1

2

3

4

5

结论

检查人/日期： 复核人/日期：
注：“+”为生长，“- ”为不生长。
附表7
菌种计数表

计数培养基
培养温度（℃）
培养时间（h）
菌种
类型
稀释
级数
菌落数（cfu/ml）
平皿1
平皿2
平均值
胰酪大豆胨琼脂培养基

枯草芽孢杆菌

铜绿假单胞菌

成果
评价

查人/日期： 复核人/日期：

菌落计数成果（cfu∕ml）
实验次数
10-5稀释
10-6稀释
10-7稀释
1
2
3
1
2
3
1
2
3
金黄色葡萄球菌

枯草芽孢杆菌

杭州沸创医疗科技有限公司
★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★
验证合格证书

验证方案名称： 无菌检查用培养基合用性检查验证方案
验证方案编号： VP-QC--02
验证报告名称： 无菌检查用培养基合用性检查验证报告(NO. )
验证报告编号： VR-QC--02

严格按照本方案规定项目进行了验证，验证合格，批准容许投入使用。

有 效 期：

批准人：
年 月 日
★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★★
备注：
1.严格按批准方案进行，当验证条件发生变更时应报质量部审核，并经批准后再进行重新验证。
2.当中华人民共和国药典中无菌检查办法发生变更时，应重新进行验证。