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不同品种龟甲滋阴作用的对比研究
【摘要】 目的对比4种龟甲混淆品和正品龟甲的滋阴作用，为其药用提供一定的科学依据。方法用3 mg甲状腺和 mg利血平/只造小鼠阴虚模型，观察不同龟甲水提物对小鼠体重、自主活动、耐缺氧能力以及脏器指数的影响。结果几种龟甲对阴虚小鼠体重减轻、自主活动减少的趋势都具有一定的抑制作用，能够增强阴虚小鼠的耐缺氧能力，抑制阴虚小鼠甲状腺、 胸腺、肾上腺和脾脏萎缩。结论 几种龟甲混淆品均具有一定的滋阴作用，但其能否作为龟甲代用品还有待进一步研究。
【关键词】 龟甲 滋阴 中华花龟 缅甸陆龟 红耳泥龟 安布闭壳龟
龟甲为龟科动物乌龟Chinemys reevesii(Gray)的干燥腹甲及背甲，始载于《神农本草经》，具有滋阴潜阳，益肾强骨，养血补心之功效，为常用中药材［1，2］。近年来由于生活习惯和疾病谱的变化，龟甲的市场需求量不断增大。而药典种乌龟繁殖能力弱、生长缓慢，加之人们滥捕及生态环境的破坏，已呈衰退之势［3，4］。这种状况就导致了龟甲资源的过度开发,并使得药典种龟甲日趋稀少，市场上龟甲品种极其混乱［5～11］。开发龟甲药用新资源，寻找适宜的代用品已经成为满足龟甲药用需求的重要途径之一。龟甲代用品的研究不仅为龟甲药用提供了丰富的资源，而且有利于龟甲资源的可持续开发和利用。因此，本文选取再生能力强且市场占有量大的缅甸陆龟Testudo elongate (Blyth)，中华花龟Ocadia sinensis (Gray)，安布闭壳龟Cuora amboinensis (Guenther)，红耳泥龟Trachemys scripta elegans的腹甲与药典收载龟甲品种的滋阴作用进行对比研究，探讨这4种龟甲在滋阴作用方面的相似性，为龟甲药用代用品的深入研究打下一定的基础。
　　1 器材
　　药材均购于成都市荷花池中药材市场，经成都中医药大学卢先明教授鉴定。分别为：乌龟Chinemys reevesii (Gray)，中华花龟Ocadia sinensis(Gray) ，红耳泥龟Trachemys scripta elegans，安布闭壳龟Cuora amboinensis (Guenther) ，缅甸陆龟Testudo elongate (Blyth)的干燥腹甲。甲状腺片兖州生宝制药有限公司；利血平泗水希尔康制药有限公司；六味地黄丸北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂 。
　　试剂聚山梨酯80： 上海申宇医药化工有限公司；钠石灰：上海纳辉干燥试剂厂 。

　　仪器
　　zz6小鼠自主活动测试仪:成都泰昌科技有限公司；YP601N电子秤：上海精密科学仪器有限公司；BS200S电子天平：北京塞多利斯天平有限公司。
　　动物昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，由成都中医药大学实验动物中心提供,合格证号：川实动管第7号。
　　供试品溶液的制备各种龟甲砂烫醋淬， 用水煎煮两次，浓缩为1 mg/ml的龟甲水提液，即为供试品溶液。 甲状腺片，利血平均用3%吐温溶液配至所需浓度，冷藏备用。六味地黄丸，用水配为 g/ml的水溶液，即为阳性对照药。
　　2 方法
　　造模方法
　　参照文献［5，12～17］，用3 mg甲状腺片和 mg利血平溶液/20 g给小鼠造模，第9天造模成功。空白组给等量的3%吐温溶液，治疗组在造模同时，按下述分组方法给予龟甲水提液，1次/d，共8次。
　　动物分组方法
　　昆明种小鼠80只，雌雄各半，按体重随机分成8个组，即正常对照组、模型组、阳性药对照组-1·d-1，乌龟甲组 g·-1·d-1，红耳泥龟龟甲组 g·-1·d-1，安布闭壳龟组 g ·-1·d-1，缅甸陆龟组 g ·-1·d-1，中华花龟甲组 ·-1·d-1。
　　实验方法
　　实验动物于每日上午造模，下午给予治疗药物，观察其症状和体重等的变化。于第9日观察龟甲药物对阴虚小鼠动物模型自主活动、耐缺氧能力的影响，并取其甲状腺软骨、胸腺、肾上腺、脾脏等组织，精密称重，计算其脏器指数。数据用统计软件进行分析。
　　3 结果
　　龟甲水提液对阴虚小鼠症状及体重的影响
　　动物症状、体重和存活率的观察结果：阴虚组表现躁动不安、喜饮，以后转为精神萎靡、双目不张、行动迟缓、体重迅速下降、第7日开始死亡，阴虚治疗组各种阴虚症状减轻，消瘦并不十分明显，大部分动物外貌行为比较正常。
　　每日小鼠秤重，计算给药后小鼠体重增加量，用数理统计软件分析。结果见表1。表1 龟甲水提液对阴虚小鼠体重的影响(略)
结果显示：阴虚造模成功后小鼠体重明显减轻。给予龟甲药物以后，与模型组比较，各种龟甲均能使阴虚小鼠体重下降的趋势得到改善，其中安布闭壳龟甲和红耳泥龟甲与乌龟龟甲作用相似。
　　龟甲水提液对阴虚小鼠自主活动的影响按上述方法造模和给药，于给药10～20 min后将小鼠置于zz-6小鼠自主活动测试仪内，记录4 min内小鼠的活动次数。结果见表2。表2 龟甲水提液对阴虚小鼠自主活动的影响(略)
结果显示：与空白组比较，阴虚小鼠自主活动明显减少；与模型组比较，除中华花龟甲作用不明显外，其它龟甲对小鼠自主活动减少的趋势都有明显改善，且作用与龟甲相似。
　　龟甲水提液对阴虚小鼠耐缺氧能力的影响
　　按上述方法造模和给药，于给药30 min后，分别将小鼠置于装有15 g钠石灰的250 ml密闭广口瓶中，立即计时。以呼吸停止为指标，观察小鼠因缺氧至死亡的时间。结果见表3。表3 龟甲水提液对阴虚小鼠耐缺氧能力的影响

结果显示：与空白组比较，阴虚模型小鼠的耐缺氧能力明显减弱。与模型组比较，除缅甸陆龟甲作用不明显外，其余龟甲对阴虚小鼠的耐缺氧能力都有明显的提高，其中红耳泥龟甲增强阴虚小鼠耐缺氧能力的作用最强，与乌龟龟甲类似。
　　龟甲水提液对阴虚小鼠脏器指数的影响按上述方法造模和给药，实验结束后，解剖取出小鼠的甲状腺、胸腺、脾脏、肾上腺，用电子天平精密称其湿重，按下式计算其脏器指数。
脏器指数=(脏器重量/体重)×1 000
实验数据用进行统计学处理。结果见表4。表4 龟甲水提液对阴虚小鼠脏器指数的影响(略)

　　结果显示：与空白组比较，阴虚小鼠的甲状腺、胸腺、脾脏和肾上腺明显萎缩。与模型组比较，各种龟甲水提液对阴虚小鼠甲状腺、胸腺、脾脏萎缩有一定的抑制作用，其中红耳泥龟甲对胸腺的作用不明显，安布闭壳龟甲对脾脏的作用不明显，中华花龟甲、缅甸陆龟甲对肾上腺作用不明显。
　　4 讨论
近年来，随着人们生活水平的提高和生活方式的改变，龟甲的市场需求量越来越大。然而，由于滥捕滥猎等各方面原因，龟甲的资源已呈衰退之势［18，19］。因此，开展龟甲代用品研究是解决龟甲资源问题的重要途径。本实验结果表明：不同品种的几种龟甲对阴虚小鼠体重减轻和自主活动减少、甲状腺、胸腺、脾脏、肾上腺萎缩都具有一定的抑制作用，并能增强阴虚小鼠耐缺氧能力，但其能否作为龟甲的代用品有待进一步的系统研究。
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