霍山石斛微卫星引物的sdspage的检测与方法探讨开题报告书-学位论文.doc

本科学生毕业论文

题目 霍山石斛微卫星引物的SDS-PAGE的检测
与方法探讨
学院 生命科学学院
专业 生物科学
学生姓名 姚宗莉
学号 0810366
指导教师 王晖 职称 副教授
论文字数 5,375

完成日期 2012 年 3 月 15 日

论文题目： 霍山石斛微卫星引物的SDS-PAGE的检测与方法探讨
学生姓名、学院：姚宗莉，生命科学学院

中文摘要：
霍山石斛(Dendrobium huoshanense)为兰科石斛属多年生草本植物，其干燥茎或鲜草可药用。为了筛选和检测石斛属不同种之间微卫星的多态性，采用PCR方法扩增石斛属基因组上的微卫星序列后，经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析。采用银染法对微卫星位点进行多态性检测，该方法具有灵敏度高，污染小，无毒害，条带清晰等突出特点。能有效地控制染色背景，显著提高检测分辨率等。
关键词：霍山石斛；微卫星；PCR;银染；变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

英文题目：Discussion on the Dendrobium huoshanense microsatellite primer detected by SDS-PAGE and methods
学生姓名、学院（英文）：Yao Zongli，College of Life Sciences

英文摘要：
Dendrobium huoshanense of huoshan is one of Orchid Dendrobium perennial herb.It’s dry stems or fresh medicinal.For the screening and detection of Dendrobium is the different between the microsatellite polymorphism by PCR amplification of microsatellite sequences in the Dendrobium in genome analysis by denaturing polyacrylamide gel electrophoresis. Using silver staining method for microsatellite loci were polymorphic detection, dyeing results and agarose gel electrophoresis results were compared, the method has the advantages of high sensitivity, small pollution, no poison, with clear characteristics. Can effectively control the staining background, and significantly improve the detection resolution.
英文关键词：Dendrobium huoshanense；Microsatellite (SSR); PCR; silver staining; SDS-PAGE

安徽师范大学本科生毕业论文（设计）评定意见

指导
教师
评语

百分制成绩： 签名： 年　月　日
评语主要内容包括：学生写作态度、科研作风，论文选题的理论意义和实践价值，论据是否充分、可靠，掌握基础理论、专门知识、研究方法和技能的水平，写作的逻辑性、技巧及其他优缺点。
安徽师范大学本科生毕业论文（设计）评定意见

教
研
室
︵答
辩
组︶
评
定
意
见

成绩：
教研室主任（答辩组组长）签名：　　　　　
年　　月　　日
学

院

意

见

成绩：
院长签章：　　　　　

　　　　　　　　　　　　　　　　年　　月　　日

安徽师范大学本科生毕业论文（设计）开题报告书
题　　目
霍山石斛微卫星引物的SDS-PAGE的检测与方法探讨
学生姓名
姚宗莉
学 号
0810366
指导教师
王晖
学 院
生命科学学院
专 业
生物科学
职　　称
副教授
选题的意义及研究状况：
霍山石斛(Dendrobium huoshanense C.Z Tang et S.J.Cheng)为兰科石斛属多年生草本植物，其干燥茎（又名霍枫斗）或鲜草可药用，具有抑制肝脏细胞中胆固醇合成，而且还具有抑癌活性，有利于防治心血管系统疾病和防癌抗癌作用，是常用的大宗药材。霍山石斛（即米斛），由于其功效奇特，资源稀少，价格昂贵，素有“千金草”、“软黄金”的美誉，目前国内外市场上真正地霍山石斛基本上没有，所存在的均是挂名“霍山石斛”的黄草石斛等常规类药物。目前还没有霍山石斛在分子水平上证明其分类地位的证据，以及在药材的鉴定上提供简单方便可靠的技术手段。目前国内外多数学者对霍山石斛的研究侧重于化学成分含量的测定，未见到有关霍山石斛化学成分的系统研究报道，而且关于霍山石斛的药理研究并不充足。此外，霍山石斛在分子领域的研究还是比较少。中药分子鉴定是近年来发展的从分子水平鉴定中药的方法，能从DNA水平反映中药的遗传特征，具有准确性高、特异性强的特点，不受季节、产地的影响。所以实施本课题具有广阔的市场空间和良好的发展前景。
主要内容、研究方法与思路：
主要内容：本试验采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）对霍山石斛进行分析，旨在为霍山石斛微卫星引物多态性的监测与分析提供依据。因此，对霍山石斛微卫星引物进行SDS-PAGE分析，以期从分子水平说明霍山石斛微卫星的多态性。
研究方法：通过进行大量的实验与参考大量相关文献资料，进行结果总结与分析，得出结论，并进行实验探讨。
思路：首先仔细阅读指导老师提供的文献资料和自己在网上搜索的相关文献，开展变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验，通过大量的实验，得出相关的实验结果，再将所得结果进行数据分析，将分析后的实验结果进行总结分析，并分析实验过程中的影响因素。

准备情况（查阅过的文献资料及调研情况，现有仪器、设备情况）：
参考文献：
[1] 张志峰，史洪才，武坚，简子健.微卫星DNA聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）银染法的改良.BIOTECHNOLOGY，2005,15（3）:51-53.
[2] 张军，武耀廷，郭旺珍等.棉花微卫星标记的PAGE/银染快速检测[J].棉花学报,2000,12(5):267-269.
[3] 吕海航，郑国萍,等. 微卫星电泳及银染检测中的常见问题分析及对策[J]. Heilongjiang Animal Science and Veterinary Medicine,2006，(4):65-67.
[4] 艳丽，刘志瑾，魏辅文，李明等.一种筛选微卫星位点的改进方法及其在小熊猫微卫星基因文库构建上的应用.兽类学报，2005,25（4）：339-344.
[5] 曾庆国，陈艺燕等.微卫星位点筛选方法综述.ECOLOGIC SCIENCE,2005,24（4）：368-372.
[6] 肖正东，何定华，何锡山，周志军，陈素传，黄武刚等.中国栗AC/GT微卫星的提取和多态性对安徽省板栗品种的分析.分子植物育种，2005,3（4）：509-514.
[7] 周建林，揭雨成等.红麻微卫星DNA的分离.湖南师范大学自然科学报，2006,29（1）：78-82.
[8] 李明，亓小红等.微卫星标记的基因组学研究进展.Journal of Tianjin Agricultural University，2006,13（1）:47-51.
[9] 霍金龙，张娟，罗古月，潘伟荣，张美，曾养志等.微卫星PAGE银染法及其干胶的简易制备.动物医学进展，2005,26（1）：78-80.

仪器：
PCR仪、凝胶成像系统、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测系统、电泳仪、摇床等
总体安排和进度（包括阶段性工作内容及完成日期）：
1、 确定论文题目并完成开题报告书，与老师进行交流。搜集相关资料与文献。（11月10日至11月15日）
2、 开始实验，对提取的基因组进行检测（11月15日至11月22日）
3、 对检测后的基因组进行筛选，扩增和进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（11月23日至12月21日）
4、 数据分析（12月22日至2月13日）
5、 完成初稿，并交予老师批阅，听取老师的意见进行修改。（2月15日至3月底）
6、 完成底稿，交予老师批阅，并定稿。（4月初至4月中旬）
指导教师意见（研究的意义、创新点、前期基础工作、存在的难点和困难、建议等）：

指导教师签名：　　　　　　　年　　月　　日
学院选题指导组意见：

学院选题指导组组长签名：　　　　 年　　月　　日

安徽师范大学本科毕业论文（设计）指导过程记录表
题　　目
霍山石斛微卫星引物的SDS-PAGE的检测与方法探讨
学生姓名
姚宗莉
学 号
0810366
指导教师
王晖
学 院
生命科学学院
专 业
生物科学
职　　称
副教授
指导内容

记录一

确定论文题目并完成开题报告书，与老师进行交流。搜集相关资料与文献。

时间： 2011 年 10 月 10 日

指导内容

记录二

老师提供有关文献资料，查看相关的文献资料。

时间： 2011 年 10 月 21 日

指导内容

记录三

初进实验室，了解实验室规章制度，熟悉相关实验仪器、试剂的使用方法，并掌握实验流程。

时间：2011 年 11 月 23 日

指导内容

记录四

对检测后的基因组进行筛选，扩增，实验室进行SDS-PAGE电泳实验，取得原始数据。

时间： 2011 年 12 月 1 日

指导内容

记录五

数据处理与分析，查阅相关文献。

时间： 2012 年 1 月 23 日

指导内容

记录六

完成初稿，并交予老师批阅，听取老师的意见进行修改。

时间： 2012 年 3 月 15 日

指导内容

记录七

完成底稿，交予老师批阅，并定稿。

时间： 2012 年 4 月1 日