实验一-革兰染色法.ppt
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1、1微生物实验课注意事项微生物实验课注意事项禁止禁止不穿白大衣进入实验室;禁止禁止在实验室内吃东西、吸烟;不得高声喧哗,随 处走动;严禁严禁用酒精灯点燃酒精灯;严禁严禁把实验室内任何物品带出室外;病原材料病原材料污染桌面、地板等或误吸入口,应立即报告教师进行处理;爱护实验仪器设备,损坏仪器要赔偿损坏仪器要赔偿;实验完毕,废弃物放入指定地点,桌面理清洁,洗手后方可离室。值日同学负责打扫实验室值日同学负责打扫实验室,并关好水电、门窗方可离开。.2实验一 革兰染色法1.1.掌握油镜的使用掌握油镜的使用掌握油镜的使用掌握油镜的使用2.2.熟悉革兰氏染色法原理、熟悉革兰氏染色法原理、熟悉革兰氏染色法原理、
2、熟悉革兰氏染色法原理、步骤、结果、意义步骤、结果、意义步骤、结果、意义步骤、结果、意义3.3.掌握细菌的基本形态和特殊结构掌握细菌的基本形态和特殊结构掌握细菌的基本形态和特殊结构掌握细菌的基本形态和特殊结构实验目的要求实验目的要求.3细菌染色的方法细菌染色的方法单染法单染法:采用一种染料染色采用一种染料染色,只能观察细菌的形态只能观察细菌的形态和排列特征,不能观察细菌的染色特性和进行鉴和排列特征,不能观察细菌的染色特性和进行鉴别。别。复染法(鉴别染色)复染法(鉴别染色):采用两种或两种以上的不同采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色,使染料进行先后染色,使不同种类不同种类的细菌、同种细的细菌
3、、同种细菌的菌的不同结构不同结构,分别,分别染上不同染上不同的颜色,以便鉴别的颜色,以便鉴别细菌。细菌。.4革兰染色法革兰染色法该染色法是丹麦细菌学家革兰于该染色法是丹麦细菌学家革兰于该染色法是丹麦细菌学家革兰于该染色法是丹麦细菌学家革兰于1884188418841884年创建的年创建的年创建的年创建的,至至至至今仍广泛应用用于细菌分类和鉴别今仍广泛应用用于细菌分类和鉴别今仍广泛应用用于细菌分类和鉴别今仍广泛应用用于细菌分类和鉴别.5革兰染色法的原理革兰染色法的原理渗透学说:与肽聚糖的结构有关渗透学说:与肽聚糖的结构有关渗透学说:与肽聚糖的结构有关渗透学说:与肽聚糖的结构有关 革兰阳性菌细胞壁
4、主要由致密的肽聚糖网状结构组成,壁厚、类革兰阳性菌细胞壁主要由致密的肽聚糖网状结构组成,壁厚、类革兰阳性菌细胞壁主要由致密的肽聚糖网状结构组成,壁厚、类革兰阳性菌细胞壁主要由致密的肽聚糖网状结构组成,壁厚、类脂质含量低,酒精不易渗透,反而形成一道屏障,阻止染料向细脂质含量低,酒精不易渗透,反而形成一道屏障,阻止染料向细脂质含量低,酒精不易渗透,反而形成一道屏障,阻止染料向细脂质含量低,酒精不易渗透,反而形成一道屏障,阻止染料向细胞外渗出。胞外渗出。胞外渗出。胞外渗出。革兰阴性菌细胞壁肽聚糖层较薄、交联度低,脂类含量高,酒精革兰阴性菌细胞壁肽聚糖层较薄、交联度低,脂类含量高,酒精革兰阴性菌细胞壁
5、肽聚糖层较薄、交联度低,脂类含量高,酒精革兰阴性菌细胞壁肽聚糖层较薄、交联度低,脂类含量高,酒精易渗透进入细胞内,将染料脱出。易渗透进入细胞内,将染料脱出。易渗透进入细胞内,将染料脱出。易渗透进入细胞内,将染料脱出。化学学说:与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关化学学说:与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关化学学说:与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关化学学说:与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关 革兰阳性菌细胞质中的核糖核酸镁盐与结晶紫革兰阳性菌细胞质中的核糖核酸镁盐与结晶紫革兰阳性菌细胞质中的核糖核酸镁盐与结晶紫革兰阳性菌细胞质中的核糖核酸镁盐与结晶紫-碘结合形成更大碘结合形成更大碘结合形成更大碘结合形成更大的复
6、合物,不易被酒精脱出。的复合物,不易被酒精脱出。的复合物,不易被酒精脱出。的复合物,不易被酒精脱出。等电点学说:与细菌所带电荷有关等电点学说:与细菌所带电荷有关等电点学说:与细菌所带电荷有关等电点学说:与细菌所带电荷有关 革兰阳性菌等电点低(革兰阳性菌等电点低(革兰阳性菌等电点低(革兰阳性菌等电点低(pIpI)为)为)为)为2323,在中性或碱性环境中所,在中性或碱性环境中所,在中性或碱性环境中所,在中性或碱性环境中所 带负带负带负带负电荷多;革兰阴性菌电荷多;革兰阴性菌电荷多;革兰阴性菌电荷多;革兰阴性菌pIpI为为为为4545,所带负电荷少,影响结合染色的,所带负电荷少,影响结合染色的,所
7、带负电荷少,影响结合染色的,所带负电荷少,影响结合染色的多少多少多少多少.6实验材料与方法实验材料与方法材料材料材料材料:菌种:菌种:菌种:菌种:葡萄球菌和大肠埃希菌混合物(葡萄球菌和大肠埃希菌混合物(葡萄球菌和大肠埃希菌混合物(葡萄球菌和大肠埃希菌混合物(18-24h18-24h)牙垢牙垢牙垢牙垢 试剂:试剂:试剂:试剂:结晶紫染液、碘液结晶紫染液、碘液结晶紫染液、碘液结晶紫染液、碘液 95%95%酒精、稀释苯酚复红液酒精、稀释苯酚复红液酒精、稀释苯酚复红液酒精、稀释苯酚复红液其他:其他:其他:其他:玻片、接种环、酒精灯玻片、接种环、酒精灯玻片、接种环、酒精灯玻片、接种环、酒精灯 无菌生理盐
8、水、显微镜等无菌生理盐水、显微镜等无菌生理盐水、显微镜等无菌生理盐水、显微镜等.7染染色色标标本本检检查查基基本本程程序序涂片涂片涂片涂片干燥干燥干燥干燥固定固定固定固定染色染色染色染色镜检镜检镜检镜检.8初染初染1min结晶紫结晶紫媒染媒染1min碘液碘液脱色脱色15-20s复染复染1min复红复红/苯酚苯酚95%乙醇乙醇G+G-革兰氏染色步骤与现象革兰氏染色步骤与现象注意:每一步染色后水冲,甩干水每一步染色后水冲,甩干水.9(1)(1)(1)(1)先用低倍镜观察,再用高倍镜观察,找出适当的视野。先用低倍镜观察,再用高倍镜观察,找出适当的视野。先用低倍镜观察,再用高倍镜观察,找出适当的视野。
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