肠杆菌科细菌介绍.ppt
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1、LOGO肠杆菌科细菌肠杆菌科细菌主讲:戈红雨主讲:戈红雨 2013-1-28 2013-1-28.革兰氏阴性菌(革兰氏阴性菌(Gram-negative)u革兰氏阴性菌泛指革兰氏染色反应呈革兰氏阴性菌泛指革兰氏染色反应呈红色红色的细菌。的细菌。在革兰氏染色实验中,首先添加了结晶紫在革兰氏染色实验中,首先添加了结晶紫(crystal violet),再添入另一种复染染料),再添入另一种复染染料(通常使用番红(通常使用番红(safranin),从而将所有),从而将所有的革兰氏阴性菌染成的革兰氏阴性菌染成红色或粉色红色或粉色。u通过这种测试我们可以区分两种细胞壁结构不同通过这种测试我们可以区分两种细
2、胞壁结构不同的细菌。革兰氏阳性菌在反应后的除色溶液中将的细菌。革兰氏阳性菌在反应后的除色溶液中将呈现龙胆紫的颜色。呈现龙胆紫的颜色。u革兰氏阴性菌细胞壁中革兰氏阴性菌细胞壁中肽聚糖肽聚糖含量低,而含量低,而脂类脂类含含量高。当用乙醇处理时,脂类物质溶解,细胞壁量高。当用乙醇处理时,脂类物质溶解,细胞壁通透性增强,使结晶紫极易被乙醇抽出而通透性增强,使结晶紫极易被乙醇抽出而 脱色;再度染上复染液番红的时候,便呈现红色脱色;再度染上复染液番红的时候,便呈现红色了。了。.u革兰氏阴性菌的病原能力通常与其细胞壁革兰氏阴性菌的病原能力通常与其细胞壁组成相关,具体说来有组成相关,具体说来有脂多糖脂多糖(l
3、ipopolysaccharide,又称为,又称为LPS或者或者内毒素内毒素(endotoxin)层。在人)层。在人体中,体中,LPS可以激发一种固有免疫反应可以激发一种固有免疫反应(innate immune response)这种)这种反应是通过细胞素制造和反应是通过细胞素制造和免疫系统免疫系统活化等活化等来描述其特征的。比如,来描述其特征的。比如,红肿红肿就是细胞素就是细胞素产生并释放导致的。因为脂多糖在革兰氏产生并释放导致的。因为脂多糖在革兰氏阴性菌的细胞墙表皮,所以大多数或旧型阴性菌的细胞墙表皮,所以大多数或旧型抗生素抗生素都不能有效抑制此类细菌。都不能有效抑制此类细菌。.周质周质.
4、u胞质膜胞质膜(Cytoplasmic membrane):存在于细胞质中各膜结合存在于细胞质中各膜结合细胞器中的膜,包括核膜、内质网膜、高尔基体膜、溶酶体膜、线粒细胞器中的膜,包括核膜、内质网膜、高尔基体膜、溶酶体膜、线粒体膜、叶绿体膜、过氧化物酶体膜等。体膜、叶绿体膜、过氧化物酶体膜等。u肽聚糖薄层,比革兰氏阳性菌要薄得多肽聚糖薄层,比革兰氏阳性菌要薄得多 u外层膜外层膜(outer membrane),是在肽聚糖层之外的膜,内含有),是在肽聚糖层之外的膜,内含有脂脂多糖多糖,核糖核糖,O抗原抗原 u外层膜中还有孔蛋白,允许特定的分子通过外层膜中还有孔蛋白,允许特定的分子通过 u周质(周质
5、(periplasmic space):):指肽聚糖层和外层膜之间的空间指肽聚糖层和外层膜之间的空间 uS层直接与外层膜相连,而非肽聚糖层层直接与外层膜相连,而非肽聚糖层 u如果有鞭毛,表毛有四个支撑环而不是两个如果有鞭毛,表毛有四个支撑环而不是两个 u没有没有磷壁酸磷壁酸(teichoic acids)或者)或者脂磷壁酸脂磷壁酸 u多糖骨架上有脂蛋白多糖骨架上有脂蛋白 u大多数革兰氏阴性菌中含有大多数革兰氏阴性菌中含有胞壁质脂蛋白胞壁质脂蛋白(Brauns lipoprotein),),其作用为通过其作用为通过共价键共价键连接外层膜和多糖连接外层膜和多糖.肠杆菌科肠杆菌科u分布:是一大群寄居
6、在人类和动物肠道中、分布:是一大群寄居在人类和动物肠道中、生物学性状近似的革兰氏阴性杆菌,可随人生物学性状近似的革兰氏阴性杆菌,可随人和动物排泄物广泛分布于土壤、水和腐物中。和动物排泄物广泛分布于土壤、水和腐物中。其中部分为致病菌,如:沙门菌属、志贺菌其中部分为致病菌,如:沙门菌属、志贺菌属等属等;而多数为肠道正常菌群,在一定条件下而多数为肠道正常菌群,在一定条件下可以致病,故称为条件致病菌。可以致病,故称为条件致病菌。u致病:正常菌群致病:正常菌群-条件致病菌条件致病菌-致病菌、引致病菌、引起多器官、多组织的病变。起多器官、多组织的病变。u种类:肠杆菌科、种类众多,种类:肠杆菌科、种类众多,
7、30个菌属、个菌属、120多个菌种多个菌种。.包括埃希菌属埃希菌属志贺菌属志贺菌属沙门菌属沙门菌属耶尔森菌属耶尔森菌属肠杆菌属肠杆菌属变形杆菌属变形杆菌属克雷伯菌属克雷伯菌属摩根菌属摩根菌属枸橼酸菌属枸橼酸菌属肠杆菌属肠杆菌属沙雷菌属沙雷菌属普罗普罗2wei致病菌致病菌肠道正常菌群肠道正常菌群条件致病菌条件致病菌医院感染医院感染.1.形态染色相似形态染色相似 革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌(两端钝圆,无芽胞。多数两端钝圆,无芽胞。多数细菌有周身鞭毛,能运动,个别细菌有荚膜。多数细菌有菌毛。细菌有周身鞭毛,能运动,个别细菌有荚膜。多数细菌有菌毛。本科细菌为需氧和兼性厌氧菌,营养要求不高,在普通培养基上
8、本科细菌为需氧和兼性厌氧菌,营养要求不高,在普通培养基上生长良好,各种细菌菌落大小相似,直径生长良好,各种细菌菌落大小相似,直径23m。)2.培养特性相同培养特性相同 普通培养基上生长良好普通培养基上生长良好 3.生化反应活泼生化反应活泼 发酵葡萄糖,发酵葡萄糖,氧化酶阴性氧化酶阴性,触酶阳性,触酶阳性,还原硝酸盐为亚硝酸盐还原硝酸盐为亚硝酸盐,O/F试验为发酵型试验为发酵型。4.抗原构造复杂抗原构造复杂5.抵抗力弱抵抗力弱 6.易变异易变异返回返回肠杆菌科的共同特性肠杆菌科的共同特性.O-F试验试验氧化型氧化型发酵型发酵型产碱型产碱型.氧化酶试验氧化酶试验阳性:紫红色阳性:紫红色 阴性:无色
9、阴性:无色.硝酸盐还原试验硝酸盐还原试验阳性:红色阳性:红色 阴性:淡黄色阴性:淡黄色.4、抗原构造复杂、抗原构造复杂鞭毛抗原(H)菌体抗原(O)K或Vi抗原.O O抗原抗原v耐热,耐热,100 100 不被破坏。不被破坏。v是肠道杆菌血清学分型和分群的主要抗原、如大肠杆菌是肠道杆菌血清学分型和分群的主要抗原、如大肠杆菌O O157157,霍乱弧菌霍乱弧菌O O139139。vIgMIgM型抗体,凝聚反应型抗体,凝聚反应v0抗原可分三部分抗原可分三部分:多糖侧链多糖侧链,肠杆菌科细菌具有不,肠杆菌科细菌具有不同的糖成分,多糖的排列也不相同,决定了同的糖成分,多糖的排列也不相同,决定了0抗原的特
10、抗原的特异性异性;核心部分核心部分,包括外核心区、骨架和核心糖脂,包括外核心区、骨架和核心糖脂,肠杆菌科的核心部分相同肠杆菌科的核心部分相同;类脂类脂A,与内毒素有关,与内毒素有关,可引起与内毒素血症相同的发热、炎症和血液动力学改可引起与内毒素血症相同的发热、炎症和血液动力学改变的各种临床表现。变的各种临床表现。抗原结构:抗原结构:O抗原、抗原、H抗原、表面抗原抗原、表面抗原.H H抗原:即细菌的鞭毛蛋白;抗原:即细菌的鞭毛蛋白;v不耐热,不耐热,60 3060 30分钟即被破坏;分钟即被破坏;v其特异性取决于多肽链氨基酸的组成、排列顺序和空间构型其特异性取决于多肽链氨基酸的组成、排列顺序和空
11、间构型vIgGIgG型抗体型抗体vH抗原可能与细菌在尿路中的播散有关。多数肠杆菌科细菌表抗原可能与细菌在尿路中的播散有关。多数肠杆菌科细菌表面有菌毛,为一种蛋白成分,与细菌对粘膜表面的粘附能力面有菌毛,为一种蛋白成分,与细菌对粘膜表面的粘附能力有关有关表面抗原表面抗原v不耐热,不耐热,60 3060 30分钟即被破坏;分钟即被破坏;v可阻断可阻断O O抗原与相应抗体的结合。抗原与相应抗体的结合。v荚膜抗原能抑制细菌与荚膜抗原能抑制细菌与0抗血清的凝集,并可促使细菌易于粘抗血清的凝集,并可促使细菌易于粘附于粘膜表面,与细菌的侵袭力有关,如:大肠杆菌的附于粘膜表面,与细菌的侵袭力有关,如:大肠杆菌
12、的Ki抗抗原和伤寒杆菌的原和伤寒杆菌的Vi抗原。抗原。.易变异易变异溶源性转换溶源性转换生化反应性变异生化反应性变异通过通过引起引起耐药性变异耐药性变异毒力性变异毒力性变异转导转导接合接合自发突变自发突变.肠杆菌科与其它革兰阴性杆菌区别肠杆菌科与其它革兰阴性杆菌区别 .临床意义临床意义u致病物质致病物质u所致疾病所致疾病.u菌毛或菌毛样结构菌毛或菌毛样结构u荚膜或微荚膜荚膜或微荚膜u外膜蛋白外膜蛋白u内毒素内毒素u外毒素外毒素致病物质致病物质.所致疾病所致疾病 u肠道感染肠道感染 腹泻、食物中毒、旅行者腹泻、肠热症腹泻、食物中毒、旅行者腹泻、肠热症u肠道外感染肠道外感染 (志贺菌除外)(志贺菌
13、除外)泌尿道感染、肺炎、脑膜炎、伤口化脓、菌血泌尿道感染、肺炎、脑膜炎、伤口化脓、菌血症等症等.治疗治疗u在尚未有病原学报告时,在尚未有病原学报告时,对泌尿道感染和腹膜炎对泌尿道感染和腹膜炎-可按革兰氏阴性可按革兰氏阴性杆菌联合使用抗生素,杆菌联合使用抗生素,对肺炎和败血症者对肺炎和败血症者-需兼顾革兰氏阴性和需兼顾革兰氏阴性和阳性菌。阳性菌。u氨基糖苷类和氟喹诺酮类抗生素有较长的氨基糖苷类和氟喹诺酮类抗生素有较长的抗生素后效应,与内酰胺类连用可增强抗抗生素后效应,与内酰胺类连用可增强抗菌活性,延长抗菌作用时间,有利于感染菌活性,延长抗菌作用时间,有利于感染组织内获得有效的药效浓度。组织内获得
14、有效的药效浓度。.肠肠杆杆菌菌科科vv大肠埃希菌大肠埃希菌大肠埃希菌大肠埃希菌v肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌v沙门氏菌沙门氏菌v痢疾志贺菌痢疾志贺菌v阴沟肠杆菌阴沟肠杆菌.肠杆菌科:肠杆菌科:革兰氏染色阴性、触酶阳性、革兰氏染色阴性、触酶阳性、氧化酶阴性、硝酸盐还原试验阳性。氧化酶阴性、硝酸盐还原试验阳性。定属定属和定种和定种试验:试验:vKIAKIA(K/AHK/AH2 2S S-或或A/AHA/AH2 2S S-)vIMViCIMViC(+-+-)vMIUMIU(-+-(-+-或或+-+-)v多价血清和单价血清的凝集试验,确定血清型。多价血清和单价血清的凝集试验,确定血清型。致病性大肠杆菌:致
15、病性大肠杆菌:vETEC-ETEC-毒素毒素vEIEC-EIEC-侵袭力试验。侵袭力试验。埃希菌属鉴定埃希菌属鉴定.大肠埃希菌大肠埃希菌 大肠埃希菌(大肠埃希菌(E.coli)E.coli)是埃希菌属典型代表。是埃希菌属典型代表。分布:婴儿出生后数小时即进入肠道,并终生伴随,是人体分布:婴儿出生后数小时即进入肠道,并终生伴随,是人体肠道正常菌群的重要构成菌。肠道正常菌群的重要构成菌。A:分解代谢产物,抑制痢疾杆菌等致病菌的生长 B:合成 ViB、ViK等,供人体吸收利用。C:天然抗原,致病:正常菌群致病:正常菌群-肠道外感染肠道外感染 特殊菌株特殊菌株-肠道内感染肠道内感染.u形态特征形态特征
16、u培养特性培养特性u生化反应生化反应u抗原结构抗原结构细菌特性细菌特性.G G 小杆菌,有鞭毛、菌毛、多数菌株有多糖微荚膜。小杆菌,有鞭毛、菌毛、多数菌株有多糖微荚膜。发酵多种糖类,产酸并产气,大部分菌株迅速发酵乳糖,但引起发酵多种糖类,产酸并产气,大部分菌株迅速发酵乳糖,但引起肠内感染的菌株(致病性大肠杆菌)不发酵或缓慢发酵乳糖;在肠内感染的菌株(致病性大肠杆菌)不发酵或缓慢发酵乳糖;在肠道鉴别培养基上呈现有色菌落;肠道鉴别培养基上呈现有色菌落;IMViCIMViC,脲酶试验阴性、脲酶试验阴性、硫化氢试验阴性。硫化氢试验阴性。三种抗原,血清型表示式三种抗原,血清型表示式-O-O:K K:H
17、H O O111111:K K5858:H H2 2生物学性状生物学性状.大肠埃希菌革兰染色大肠埃希菌革兰染色大肠埃希菌电镜图大肠埃希菌电镜图.大肠埃希菌菌落特征(血平板)大肠埃希菌菌落特征(血平板)大肠埃希菌菌落特征(大肠埃希菌菌落特征(MAC).大肠埃希菌大肠埃希菌KIA(AA)MIU()().大肠埃希菌大肠埃希菌IMViC试验()试验()右侧为对照()右侧为对照().大肠埃希菌抗原结构大肠埃希菌抗原结构.标本标本 肠外感染:尿液;脓液;血液肠外感染:尿液;脓液;血液 肠道感染:粪便肠道感染:粪便 分离培养分离培养 计数培养计数培养 纯培养纯培养形态学检查形态学检查 生化反应生化反应 毒素
18、检测毒素检测 血清学试验血清学试验 报告结果报告结果 大肠埃希菌检验程序大肠埃希菌检验程序.在环境和食品卫生学上,常被用作粪便污染的检测指标在环境和食品卫生学上,常被用作粪便污染的检测指标 3 3个大肠菌群个大肠菌群/1L饮水饮水 100100个个细菌总数细菌总数/1ml饮水饮水卫生学指标卫生学指标大肠菌群指数大肠菌群指数每每1000ml水中大肠菌群数水中大肠菌群数我国的卫生标准:我国的卫生标准:细菌总数细菌总数每每1ml或或1g样品中细菌总数样品中细菌总数.在分子生物学和基因工程实验中在分子生物学和基因工程实验中重要的实验材料和研究对象重要的实验材料和研究对象也是重要的实验材料和研究对象也是
19、重要的实验材料和研究对象.致病物质致病物质u侵袭力侵袭力 菌毛、菌毛、K抗原抗原u内毒素内毒素u肠毒素肠毒素 耐热肠毒素(耐热肠毒素(ST)不耐热肠毒素(不耐热肠毒素(LT).肠道外感染肠道外感染-机会性感染以化脓感染最为常见:泌尿系统机会性感染以化脓感染最为常见:泌尿系统感染、伤口感染、腹膜炎、阑尾炎、胆囊炎。感染、伤口感染、腹膜炎、阑尾炎、胆囊炎。在婴儿、老年人:败血症、脑膜炎。在婴儿、老年人:败血症、脑膜炎。肠道内感染肠道内感染-腹泻腹泻v肠产毒性大肠杆菌(肠产毒性大肠杆菌(enterotoxigenic E.coli ETEC)enterotoxigenic E.coli ETEC)v
20、肠侵袭性大肠杆菌(肠侵袭性大肠杆菌(enteroinvasiveenteroinvasive E.coli EIEC)E.coli EIEC)v肠致病性大肠杆菌肠致病性大肠杆菌(enteropathogenicenteropathogenic E.coli EPEC)E.coli EPEC)v肠出血性大肠杆菌(肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagicenterohemorrhagic E.coli EHEC)E.coli EHEC)v肠集聚型大肠杆菌(肠集聚型大肠杆菌(enteroaggregativeenteroaggregative E.coli E.coli EAggECEA
21、ggEC)致病性致病性.引起腹泻的大肠埃希菌引起腹泻的大肠埃希菌 菌株菌株 作用作用 部位部位 疾病与症状疾病与症状 致病机制致病机制 ETEC6、8、15、25、27、78、148、159 小肠小肠 旅行者腹泻旅行者腹泻,婴幼儿腹泻,婴幼儿腹泻,水样便,恶心,呕吐,腹水样便,恶心,呕吐,腹痛,低热痛,低热 LT 和(或)和(或)ST 肠毒素,大肠毒素,大量分泌液体和电解质量分泌液体和电解质 EIEC28ac、29、112ac124、136、143。大肠大肠 水样便,少量血便水样便,少量血便,腹痛,腹痛,发热发热 质粒介导侵袭和破坏结肠粘质粒介导侵袭和破坏结肠粘膜上皮细胞膜上皮细胞 EPEC2
22、、55、86、111、114、119、125-128、142、158小肠小肠 婴儿腹泻婴儿腹泻,水样便,恶心,水样便,恶心,呕吐,发热呕吐,发热 粘附和破坏上皮细胞粘附和破坏上皮细胞 EHEC157、26、111大肠大肠 水样便,大量出血,剧烈水样便,大量出血,剧烈腹痛,低热或无,可并发腹痛,低热或无,可并发HUS、血小板减少性紫癜、血小板减少性紫癜 SLT-I或或 SLT-II,中断蛋白质,中断蛋白质合成合成 EAggEC42、44、3、86 小肠小肠 婴儿婴儿持续性持续性腹泻腹泻,呕吐,呕吐,脱水,低热脱水,低热 集聚性粘附上皮细胞,阻止集聚性粘附上皮细胞,阻止液体吸收液体吸收.ETECE
23、TEC 粘粘 定居因子(定居因子(colonization factorcolonization factor)附附 又称粘附素(又称粘附素(adhesinadhesin)是细菌的特殊菌毛是细菌的特殊菌毛 CFA/CFA CFA/CFA (colonization factor antigencolonization factor antigen,)小肠粘膜小肠粘膜以免被肠蠕动、肠分泌液所清除以免被肠蠕动、肠分泌液所清除 释释 放放 肠毒素肠毒素 由细菌的质粒由细菌的质粒DNADNA编码编码 不耐热肠毒素(不耐热肠毒素(heat labile enterotoxinheat labile en
24、terotoxin,LTLT)65306530分钟失去活性分钟失去活性 耐热肠毒素(耐热肠毒素(heat stable enterotoxinheat stable enterotoxin,STST)100100加热加热2020分钟仍不被破坏分钟仍不被破坏1.肠产毒性大肠杆菌(ETEC).不耐热肠毒素(不耐热肠毒素(LTLT)B B亚单位亚单位 受体:肠粘膜上皮细胞膜受体:肠粘膜上皮细胞膜 表面的表面的GMGM1 1神经节苷脂神经节苷脂 A A亚单位(毒性活性部分)亚单位(毒性活性部分)穿越细胞膜穿越细胞膜 活化活化 腺苷环化酶腺苷环化酶 ATP cAMP ATP cAMP 水、电解质紊乱水、
25、电解质紊乱 腹泻腹泻.LT 检测(检测(CHO细胞培养)细胞培养).临床症状:轻度腹泻临床症状:轻度腹泻/严重的霍乱样症状严重的霍乱样症状 是婴幼儿和旅游者腹泻的重要病原菌是婴幼儿和旅游者腹泻的重要病原菌 耐热肠毒素(耐热肠毒素(STST)鸟苷环化酶鸟苷环化酶 GTP cGMPGTP cGMP水、电解质紊乱水、电解质紊乱 腹泻腹泻 .ST检测(乳鼠灌胃试验)检测(乳鼠灌胃试验).2、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)无外毒素无外毒素-肠毒素,但有强的侵袭力(类似痢疾杆菌)肠毒素,但有强的侵袭力(类似痢疾杆菌)定位于结肠定位于结肠 侵入肠粘膜上皮细胞,生长繁殖,产生内毒素。侵入肠粘膜上皮细胞,生长繁殖
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