病毒转基因技术原理-概述.ppt

课程背景课程背景l1980s,1980s,转基因技术随分子克隆技术出现l2003年，我国SFDA批准了全球第一种基因治疗药物“今又生”上市。（State Food and Drug Administration）l2005年，我国SFDA批准了全球第二种基因治疗药物HB101上市。（国家食品药品监督管理局）l2009年12月18日出版的Science杂志将”return of gene therapy”作为年度重大的科学突破之一。l2012年12月欧盟批准地全球第三种基因治疗药物上市。l迄今，多达1900种基因治疗临床试验方案并正在进行临床试验。转基因技术正成为分子医学的一种革命性的技术手段，并已成为治疗许多遗传性和获得性疾病的潜在希望所在。.问题问题l社会公众对健康需求的增加l生命科学和医学研究的推动l对转基因技术的安全和伦理关注持续增加。.课程内容课程内容l分为理论课与实践课l转基因技术概述l病毒转基因技术原理、纯化制备技术和医学应用l生物安全l医学伦理问题l表达外源基因的复制缺陷型重组腺病毒的构建和鉴定DNA病毒RNA病毒杂合病毒.第一章第一章 转基因技术概述转基因技术概述 范雄林范雄林86-27-华中科技大学同济医学院病原生物学系华中科技大学同济医学院病原生物学系研究生高水平课程病毒转基因技术原理.主要内容主要内容l基因转移方式基因转移方式l真核细胞的转基因技术真核细胞的转基因技术l外源基因表达读框的构建原理外源基因表达读框的构建原理 .1.定定 义义l基因转移基因转移（gene transfer）:自然发生自然发生l转基因技术转基因技术(transgene technology):(transgene technology):人工利用人工利用.2.常见的基因转移方式常见的基因转移方式l转化转化(transformation)(transformation)l转导转导(transduction)(transduction)l转染转染 (transfection)(transfection)现象现象定义定义分类分类用途用途.l转化转化 （transformation transformation）u现象:肺炎链球菌的转化试验肺炎链球菌的转化试验u定义:u分类和应用:自然转化自然转化:感受态感受态,宿主菌种类宿主菌种类 人工转化人工转化:低温低温CaCl2CaCl2、电穿孔、电穿孔.小鼠的肺炎链球菌的转化试验小鼠的肺炎链球菌的转化试验.l转导转导(transduction)(transduction)u现象:“U”“U”型管实验型管实验 u定义:u分类和应用:普遍性转导普遍性转导 局限性转导局限性转导.局限性转导局限性转导.l转染转染 (transfection)(transfection)u现象:感染感染(infection)(infection)、病毒感染、病毒感染u定义:广义和狭义广义和狭义u分类和应用:物理化学方法物理化学方法 生物学方法生物学方法(病毒载体病毒载体).野生型病毒的自然感染、病毒载体转染和质粒经化学法介导的转染野生型病毒的自然感染、病毒载体转染和质粒经化学法介导的转染.3.基因转移入真核细胞的方法基因转移入真核细胞的方法l基因转移入真核细胞的影响因素基因转移入真核细胞的影响因素 l外源基因转移入真核细胞的类型外源基因转移入真核细胞的类型和方法和方法 l构建外源基因的基本要素构建外源基因的基本要素.转移入原核细胞的影响因素:u限制限制-修饰系统修饰系统u质粒宿主范围和相容性质粒宿主范围和相容性u同源重组与非同源重组同源重组与非同源重组l基因转移入真核细胞的影响因素基因转移入真核细胞的影响因素 真核与原核细胞具有显著区别;外源基因要进入真核细胞，要突破三大障碍;理想的转基因技术方法.质粒型载体:l物理方法l化学方法l外源基因转移入真核细胞的类型和方法外源基因转移入真核细胞的类型和方法l传统的针头注射l显微注射l粒子轰击l电穿孔l流体动力学l包裹微球l超声l磷酸钙法l脂质体法lDEAE-Dxtran法.常用的物理方法介导基因转移常用的物理方法介导基因转移.l外源基因转移入真核细胞的类型和方法外源基因转移入真核细胞的类型和方法病毒颗粒型载体(病毒介导的转基因技术)u假型病毒载体（复制缺陷性病毒载体）：具有感染性u重组型病毒载体：具有感染性lDNA病毒载体：AdV,AAV,HSV-1,etc.lRNA病毒载体:HIV,etc.l杂合型病毒载体.不同类型转基因技术方法的优缺点比较不同类型转基因技术方法的优缺点比较.l构建外源基因的基本要素构建外源基因的基本要素 u转录控制元件u翻译控制元件u病毒复制包装信号.复习思考题复习思考题l影响外源基因进入真核细胞的因素。l物理、化学和病毒载体转基因技术的优缺点比较。l不同病毒载体转基因技术的优缺点比较。l外源基因表达读框的构建原理。.此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！