急性毒性试验设计.ppt
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1、急性毒性急性毒性试验设计试验设计组员组员:程旺、高思杰、后若:程旺、高思杰、后若兰兰 高阳、高阳、陈刚陈刚1.一、急性毒性一、急性毒性 急急性性毒毒性性指指人人或或动动物物一一次次或或24 h之之内内多多次次接接触触外外源源化化学学物物后后,在在短短期期内内所所发发生生的的毒毒性性效效应应,包包括括致致死死效效应应。2.一一次次:指指瞬瞬间间给给实实验验动动物物染染毒毒,如如经经口、口、经经静脉注射染毒。静脉注射染毒。24 h之之内内多多次次:指指外外源源化化学学物物毒毒性性过过低,需低,需给给予予动动物物较较大大剂剂量。量。3.急急性性毒毒性性效效应应出出现现的的快快慢慢和和毒毒性性反反应应
2、的的强强度度与与外外源源化化学学物物的的性性质质和和染染毒毒剂剂量量的的大大小小有关。有关。如:丙如:丙烯腈烯腈,过过氧化二碳酸二氧化二碳酸二环环己己酯酯4.丙丙烯腈经烯腈经口急性毒性口急性毒性试验设计试验设计5.实验目的n评评价价丙丙烯烯腈腈的的毒毒性性作作用用,求求出出半半数数致致死死量量LD50,并根据并根据LD50进进行急性毒性分行急性毒性分级级,n掌掌握握实实验验动动物物随随机机分分组组的的方方法法和和经经口口灌灌胃的技胃的技术术。n观观察察丙丙烯烯腈腈急急性性中中毒毒症症状状;为为后后续续试试验验提供依据;提供依据;为为毒理学机制研究提供毒理学机制研究提供线线索。索。6.器材与器材
3、与试剂试剂n1、实验动物 ICR小鼠(健康成年小鼠)n2、实验器材 灌胃针、注射器、吸管、容量瓶、烧杯、滴管、电子天平、动物体重秤、外科剪刀、镊子 n3、实验试剂 丙烯腈、苦味酸酒精饱和液、伊红染液7.实验实验方法方法n1、实验动物的选择n2、剂量设计及随机化分组n3、受试物的配制n4、染毒途径的选择n5、毒性反应的观察与LD50的计算n6、急性毒性的评价8.1、物种和品系、物种和品系 对对外源化学物毒性反外源化学物毒性反应应与人近似易于与人近似易于饲饲养管理养管理 方便方便实验实验 操作易于操作易于获获得得 繁殖生育力繁殖生育力强强 数量数量较较大能大能够够保障保障 品系品系纯纯化,价格低廉
4、。化,价格低廉。一、实验动实验动物物选择选择9.2、实验动实验动物的年物的年龄龄与体重与体重 动动 物物 大鼠大鼠 小鼠小鼠 豚鼠豚鼠 兔兔 犬犬 猫猫成年年成年年龄龄(周)(周)3 2 2 34 34 34 体重(克)体重(克)150 15 250 1.5kg 715kg 1kg寿命(年)寿命(年)23 23 68 49 1520 101210.n动动物数量物数量:动动物物6组组,1-5组为组为实验组实验组,6组为组为蒸蒸馏馏水水对对照照组组n性性别别:雌雄各半雌雄各半n年年龄龄:成年:成年动动物物n生理与健康状况:生理与健康状况:未未产产未孕者、健康未孕者、健康动动物物n实验动实验动物的物
5、的预检预检n实验动实验动物的物的给药给药前禁食前禁食处处理理。3、实验动实验动物的一般要求物的一般要求11.健康健康动动物物标标志志发发育正常、体育正常、体态态丰丰满满、外、外观观无畸形;无畸形;被毛被毛浓浓密、密、贴顺贴顺有光有光泽泽、不蓬乱;、不蓬乱;胸胸阔宽阔阔宽阔、脊柱不弓不弯;、脊柱不弓不弯;眼睛明亮;眼睛明亮;表皮无表皮无溃疡溃疡、无、无结结痂(注意尾巴);痂(注意尾巴);各天然孔干各天然孔干净净、无分泌物;、无分泌物;行行动动灵活、反灵活、反应应敏捷敏捷。12.实验实验动动物的物的标记标记染色法染色法 编编号方法:小鼠号方法:小鼠头头部部为为1 1号,号,顺时顺时针编针编号,用苦
6、味酸号,用苦味酸编编个位数,用伊个位数,用伊红编红编十位数十位数。13.14.染色法染色法优优点:点:简单简单方便,不痛苦,无方便,不痛苦,无损伤损伤。缺点:缺点:时间较长时时间较长时,染色,染色剂剂易褪色;易褪色;标记标记容易模糊不清。容易模糊不清。15.剂量选择及分组n剂剂量量选择选择 广泛广泛查阅查阅文献文献资资料,估料,估计计毒性中毒性中值值预试预试,求出待,求出待测测化学物化学物0%100%或或 10%90%的大致致死的大致致死剂剂量范量范围围设计设计正式正式试验试验的的剂剂量和分量和分组组 16.预实验预实验:总总的原的原则则是先用少量是先用少量动动物,以物,以较较大的大的剂剂量量
7、间间距染毒,求出粗略的致死距染毒,求出粗略的致死剂剂量范量范围围,即确定受即确定受试动试动物全部致死的最小物全部致死的最小剂剂量量(b)和全部不致死的最大)和全部不致死的最大剂剂量(量(a),),即求出待即求出待测测化学物化学物0%100%的大致的大致致死致死剂剂量范量范围围,然后在,然后在这这个个剂剂量范量范围围内内按几何按几何级级数的数的间间距距设计设计57个个剂剂量量组组,组间剂组间剂量呈等比量呈等比级级数(数(r),其比),其比值为值为1.21.5。进进行正式行正式实验实验。17.通通过预试过预试,找出受,找出受试试化学物引起化学物引起动动物死亡物死亡的大致的大致剂剂量范量范围围,以此
8、,以此为为依据依据设计设计正式正式试验试验的的剂剂量和量和分分组组。按下式按下式设计剂设计剂量量组组:式中:式中:rr相相邻邻两两组剂组剂量的比量的比值值,一般,一般为为1.21.21.51.5,bb最低全致死最低全致死剂剂量量,量量,aa最高不致死最高不致死剂剂量,量,nn设计设计的的组组数。数。分分组组恰当与否也是确保恰当与否也是确保实验结实验结果准确的条件之果准确的条件之一。因一。因为组为组数数过过多,需要消耗多,需要消耗较较多的多的动动物,物,还还可可能出能出现较现较大大剂剂量量组动组动物死亡率低于物死亡率低于较较小小剂剂量量组组;组组数数过过少,不能少,不能较较精确求出精确求出LD5
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