利用流式细胞术分析细胞周期时相.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验 利用流式细胞术分析细胞周期时相,细胞生物学实验,流式细胞术分析细胞周期时相,实验目的,实验原理,仪器、材料与试剂,实验步骤,实验报告及思考题,实 验 目 的,掌握流式细胞仪的工作原理,掌握用流式细胞仪测量细胞群体,DNA,含量分布的方法,了解流式细胞术在细胞生物学研究中的应用,细胞周期时相分析,实 验 原 理,流式细胞仪的工作原理是将待测细胞放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱,。,通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，得到该细胞的光散射和荧光指标，分析出其体积、内部结构、,DNA、RNA、,蛋白质、抗原等物理及化学特征。,细胞内的,DNA,含量随细胞周期进程发生周期性变化，如,G0/G1,期的,DNA,含量为2,C，,而,G2,期的,DNA,含量是4,C。,利用,PI,标记的方法，通过流式细胞仪对细胞内,DNA,的相对含量进行测定，可分析细胞周期各时相的百分比。,细胞周期时相分析,仪器、材料与试剂,仪器：,流式细胞仪，细胞培养设备，离心机，水浴，冰箱,材料：,HeLa,细胞，5,ml,注射器，离心管，封口膜，微量移液器，,Tips,试剂：,70,乙醇,（,保存于4,），,RNase,-A,（,10mg/ml,-20,保存,），,PI,（,650,g/ml，,避光保存于-20,），,PBS(pH 7.4,，,保存于4,),细胞周期时相分析,实 验 步 骤,取对数生长期细胞，倒去培养液，胰酶适度消化细胞，用培养液吹打，800,rpm,离心 15,min,去上清。,PBS,洗2次，加0.5,mL,PBS,吹匀，务必吹散。,用5,mL,注射器将细胞吸起，用力打入5,mL,70%(,预冷)乙醇中，封口膜封口。4固定过夜（可长至2周）,800,rpm 15min,收集固定细胞，,PBS,洗2次,用0.4,mL,PBS,重悬细胞并转至,Tube,中轻轻吹打（防止细胞破碎）,加,RNase,-A,约3,L,至终浓度约为50,g/,mL,，37,水浴消化30,min；,加,PI,约50,L,至终浓度约为65,g/,mL,，,在冰浴中避光染色30,min。,用300目（孔径4050微米）尼龙网过滤，上机检测,样品分析测定及打印,细胞周期时相分析,实 验 报 告 及 思 考 题,实验报告,标明你所测定的样品中各周期时相的百分比？,思考题,流式细胞术在科学研究中的应用,本实验为何要采用对数生长期的细胞？,细胞周期时相分析,