第十一章--抗生素类药物的分析.ppt

单击以编辑母版标题样式,单击以编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第十一章,抗生素类药物的分析,Analysis of Antibiotics Drug,第一节 概述,抗生素的定义,抗生素是指在低微浓度下即可对某些生物的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称。,抗生素是细菌、放线菌和真菌等微生物的代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑制或杀灭作用。,抗生素的来源,1.生物合成（发酵）,2.化学合成或半合成,特点：,1.化学纯度较低,2.活性组分易发生变异,3.稳定性差,含量测定方法,（一）生物学方法,测定抗生素抑菌或杀菌的能力,优点,1、与临床效果一致,2、灵敏度高,3、干扰物质少,缺点,1、操作繁琐,2、培养时间长,2、测定误差大,（二）化学及物理化学方法,以理化方法测定主药含量,优点,1.准确度高,2.简单、快速,1.不一定代表生物效价,缺点,2.易受杂质干扰,抗生素活性表示方法,效价单位,即指每毫升或每毫克中含有某种抗生素的有效成分的多少。用或g表示,例如 1mg青霉素钠为1670,1mg庆大霉素为590,抗生素的分类,（按结构与性质）：,内酰胺类、氨基糖苷类、,四环素类、大环内酯类、,氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类,林可霉素类、其他抗生素类,头孢菌素类,与有机碱,(普鲁卡因),成盐,难溶于水,普鲁卡因,青霉素,（三）共轭体系,头孢菌素类,母核有共轭体系,青霉素类,母核无明显UV,多数有苯环取代基,UV,青霉素钠UV7-20,（四）内酰胺环,水溶液,不稳定,干燥纯净,稳定,不稳定性因素,四元环张力大,酰胺键易水解,（某些金属离子）,（温度）,某些氧化剂,（二）呈色反应,1.羟肟酸铁反应,-内酰胺类,NaOH,呈色,Fe,3+,/3,H,+,2、,与H,2,SO,4,-HNO,3,反应,头孢菌素类,（三）沉淀反应,1.遇酸,在过量HCl或,有机溶剂中溶解,2.有机胺盐反应,（1）重氮化-偶合反应,重氮化-偶合反应,芳伯氨基,三、,含量测定,（水解）,碘量法,（一）,1.,原理,水解产物,定量过量,剩余,-内酰胺类,ChP,反应分两步进行：,1.水解反应 (按化学计算量进行),2.氧化-还原反应 (无固定的量关系，受温度、PH值和时间等因素影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定),酸碱滴定法,（三）,1、,原理,（钠盐）,-内酰胺类,ChP,（水解）,可见-紫外分光光度法,（三）,2、,酸水解法（铜盐法）,（1）原理,稳定剂,JP,青霉素族,3、,羟肟酸比色法,USP JP,Fe,3+,/3,H,+,红色,-内酰胺类,NaOH,HPLC法,（四）,ChP 头孢菌素类,内标法校正因子,外标法,特点,快速、高效、灵敏,专属性强、重现性好,一法多用（鉴别、检查、含测）,第三节 氨基糖苷类抗生素,链霉素 双氢链霉素,新霉素 卡那霉素,庆大霉素 巴龙霉素,链霉素,链霉胍,+,链霉糖,+,N-甲基-L-葡萄糖胺,苷元,糖,链霉双糖胺,庆大霉素,糖,苷元,绛红糖胺 +脱氧链霉胺 +加洛糖胺,糖,庆大霉素C复合物,庆大霉素C,1,R=H,R,1,、R,2,=CH,3,庆大霉素C,2,R=R,2,=H,R,1,=CH,3,庆大霉素C,1a,R、R,1,、R,2,=H,庆大霉素C,2a,R=CH,3,R,1,=R,2,=H,庆大霉素C,2b,R=R,1,=H,R,2,=CH,3,一、,结构与性质,碱性水溶性抗生素,多与硫酸成盐,链霉素 3个,庆大霉素 5个,碱性中心,溶解度与碱性,（一）,旋光性：,（二）,链霉素 pH57.5,庆大霉素 pH212,稳定,UV,（三）,稳定性,（四）,链霉素水解产物反应,（五）,链霉素在230nm 有吸收,庆大霉素、奈替米星 无吸收,二、,鉴别,茚三酮反应,（一）,羟基胺结构,（,二）Molisch试验 糖的性质,氨基糖苷类,（,羟甲基糠醛）,N-甲基葡萄糖胺反应,（三）,（Elson-Morgan反应）,麦芽酚反应,（四）,链霉糖特有反应,H,+,分子重排,链霉胍特有反应,坂口反应,（五）,（四）,反应,H,+,UV法,（五）,IR法,（六）,庆大霉素无UV吸收,色谱法：TLC HPLC,（七）,三、,检查,链霉素杂质,（一）,链霉素B（甘露糖链霉素）,方法,TLC,中的对照品法,（,BP）,1.来源 反应中间体,（二）硫酸奈替米星 检查 有关物质,ChP 采用 TLC法 对照品法,对照品：1.奈替米星标准品 1.5mg/ml,2.奈替米星标准品 3 mg/ml,3.西梭米星标准品 1.44 mg/ml,结果判断：,供试品溶液如显杂质斑点，其颜 色与标准品溶液（3）所显主斑点相比较，不得更深（1%），其他杂质与标准品溶液（1）所显主斑点相比较，均不得更深（1%），如有一点超过，应不深于标准品溶液（2）的主斑点（2%）,对微生物的活性无明显差异,毒副作用和耐药性不同,发酵菌种不同,工艺差别,C组分比例,不一致,规定控制各组分的相对百分含量,ChP,USP,BP,JP,庆大霉素C组分的测定,（二）,三、,含量测定,链霉素、庆大霉素,微生物检定法,本法系利用抗生素在琼脂培养,基内的扩散作用量反应平行线原理,的设计，比较标准品与供试品两者,对接种的试验菌产生抑菌圈的大小,，以测定供试品效价的一种方法。,四、血清中庆大霉素的HPLC法,血浆样品的预处理,离子对色谱法的目的：,除去氨基酸、肽、胺的干扰,选用OPA为荧光衍生化试剂,采用柱后衍生化法,第四节 四环素类抗生素,A,B,C,D,一、,结构与性质,两性,（一）,1.,与酸、碱均能成盐,2.,强酸或强碱中溶解度,酚羟基、烯醇型羟基,弱酸性,二甲胺基,弱碱性,临床上常用其盐酸盐 具有吸湿性,旋光性,（二）,与金属离子生成有色配位化合物,Ca,2+,Mg,2+,Fe,3+,Al,3+,UV和荧光性质,（三）,与金属离子络合,（四）,pH3 7.5,荧光,不稳定性,（四）,1.,差向异构化,淡黄黑,蓝色荧光,2.,降解反应,（1）,酸性下降解,（2）,碱性下降解,（荧光）,二、,鉴别试验,H,2,SO,4,反应,（一）,FeCl,3,反应,（二）,Cl,-,反应,（三）,1mol/L盐酸-甲醇（1100）,0.01mg/ml,UV法,（四）,荧光法,（五）,UV,绿色荧光,H,+,UV,TLC法,（六）,正相分配薄层 色谱,HPLC法,（七）,EDTA 克服痕量金属造成的,拖尾现象,三、,检查,4-差向四环素（ETC）,脱水四环素（ATC）,差向脱水四环素（EATC）,盐酸金霉素（CTC）,有关物质,（一）,TLC法（1995版）,HPLC法（2000版）,标准品对照法,盐酸四环素,四环素有关物质TLC图,I.供试液(5 mg/ml),ETC,(0.2 mg/ml),ATC,(0.025 mg/ml),IV.EATC(0.025 mg/ml),CTC,(0.1 mg/ml),VI.混合液,4,0.5,0.5,2,杂质吸收度,（二）,杂质吸收度,四、,含量测定,ChP、USP,HPLC法（外标法）,系统适用性试验,1.防护柱,2.有关物质的混合溶液 （ETC、EATC、TC、CTC、ATC）之间的分离度符合要求,JP 比色法（标准曲线法）,原理,1.熟悉抗生素类药物分析的特点及其,常规检验项目。了解抗生素类药物,的分析现状，熟悉生物学法与物理,化学法测定效价的原理及优缺点。,2.掌握,内酰胺类抗生素的结构、,性质、鉴别及含量测定。,第十一章 复习内容,3.掌握氨基糖苷类抗生素的结构、性 质及鉴别，了解其检查及含量测定,4.掌握四环素类抗生素的结构及性质，了解其鉴别、检查及含量测定,5.了解抗生素类药物的质量考察方法,