五分类血球仪的应用介绍与进展.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,血细胞分析仪的介绍,血细胞分析仪,50,年的发展历史,1590,年荷兰人米德尔堡和詹森设计制造了最原始的显微镜（图,1,）,，,1610,年伽利略使用望远镜观察小的物体并将其放大，后来被列文霍克改进成为原始的显微镜。,1658,年意大利人马尔皮基应用最原始的显微镜首先观察到了红细胞，他是第一个见到红细胞的人，开始进行红细胞计数则是,200,年后的事情了。而设计并生产出第一台血细胞计数仪则又过了近,100,年。,自从发明了显微镜以后，人们从微观世界中了解和观察到了血液的组成，并根据他们的特点分别将它们称为红细胞和白细胞和血小板。在以后的研究中，人们发现许多疾病的发生和发展与血液中的细胞数量之间存在一定的关系。依据对疾病诊断的需求，人们开始寻求对血液中细胞的数量进行计数。,1852,年就有人开始设计对红细胞的计数办法，,1855,年发明了用于计数血细胞的计数板，,目前仍然使用的改良,Neubauer,计数板就是应用最为广泛和持续时间最为长久的经典一种，虽然各种类型的血细胞计数仪已在广泛使用，但血细胞计数板法仍然是最为可靠和最为经典的计数技术，它不仅适用于血细胞计数，,还可用于其他细胞、动物血细胞、微小粒子及需要在显微镜下计数的各种样品，因此计数板仍然是检验工作者应该掌握的基本技能，是不应该忘记和放弃的手段。,最初的血细胞计数仪是一种单参数测定仪器，只能对血液中的红细胞和白细胞进行计数，并且需人工切换。最早生产的血球计数仪为,Coulter,型,1958,年以,Coulter,命名的专门从事颗粒性测量计数的仪器公司，库尔特电子（,Coulterlectronics,）公司成立。,此后，欧洲、日本也开始了血液细胞计数仪的开发和研制,我国在,60,年代中期也开始了这种仪器的开发和生产。例如日本,Sysmex,公司,1962,年就生产了可进行红细胞和白细胞计数的,CC-1001,型血球计数仪，我国,1965,年在上海也生产了简单的血细胞计数仪，,1975,年北京医疗仪器厂也开始模仿设计自己的简单的红白细胞计数仪。到目前为止已经有许多国家开始生产各种类型的血细胞分析仪，经过半个多世纪的发展，这种仪器已经有了非常明显的进步。以前因为只能进行细胞计数，因此我们一般将这类仪器叫做血细胞计数仪（,Blood Cell Counter,）,由于技术的进步目前这类仪器可以提供除了血细胞计数以外的更多参数的联合测定和分析，因此我们一般将这类仪器统称为血液细胞分析仪,(Hematology Analyzer),。,血细胞分析仪的技术进步,1,、稀释技术的进步,2、分析参数的增加,3、血小板计数功能的增加,4,、自动取样技术,5,、仪器的清洗技术,6,、小孔管技术的改进,其他计数原理的血细胞分析仪,1.激光法：应用单束激光照射到经过鞘流技术处理的排列成一列的单个细胞上，根据细胞阻断激光束的频率以及,PMT,收集到的激光折射信号，对细胞的数量、体积进行分析的仪器。,从三分群到五分类,三分群：,小细胞,单个核细胞,粒细胞,五分类：,淋巴细胞,单核细胞,中性粒细胞,嗜酸细胞,嗜碱细胞,白细胞三分群法原理,各种单纯电阻法血细胞分析仪的白细胞三分群法原理是根据白细胞体积分布直方图进行分析和计算得到的。经过特殊溶血剂处理的白细胞，可将特定的细胞群进行处理，使得绝大多数淋巴细胞体积缩小，使得中性粒细胞体积适当增大。因此在白细胞分布直方图上出现两个明显的细胞分布峰。左侧体积较小的一群细胞称为淋巴细胞群（,LYM,），右侧体积较大的称为粒细胞群（,GRAN,），位于两者之间的称为中间细胞群（,MID,），中间细胞群一般指含有嗜酸粒细胞，嗜碱粒细胞和单核细胞的细胞群。,五分类VCS技术,运用V、C、S三种探针,在流式通道的某一位点,对通过的单列白细胞，进行逐个的、同时的、三重的检测，以及三维分析,以确定其亚群性质。,V-低频波，分析细胞体积；,C-高频波，分析细胞核型；,S-激光，分析细胞的颗粒特性。,接近原态的,WBC分析,接近原态的白细胞,进入流式通道,VCS检测,八千多个白细胞逐个、直接、同时地在流式通道内接受VCS三重检测，得到各自的三维座标值,V,C,S,十余种异常细胞的报警提示,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,细胞化学技术：核酸荧光染色,区别于酸碱染色、酶染色、糖原染色,核酸染色物质（荧光物质）,Polymethine（聚次甲基）,Oxazine(,口,恶嗪）,不同的细胞亚群、不同的成熟阶段，其核酸的含量，核酸的结构，DNA/RNA的比例不同，表现不同的着色性。,与半导体激光有很好的适配性，633nm激发荧光,核酸染色和信号分析,激光束,(=633nm),侧向荧光：,DNA/RNA,信息,侧向散射光：,细胞内结构信息,前向散射光：,细胞体积信息,采用阻抗、激光散射和荧光染色技术,直流电阻抗法（,DC,）用于测量细胞体积大小。激光散射产生的前向散射光、侧向散射光和侧向荧光可用于探测测白细胞体积大小、细胞内含物的情况,(,细胞核以及颗粒情况,),，侧向荧光则可以反应细胞内托样核糖核酸（,DNA,）和核糖核酸（,RNA,）的含量，特有的嗜酸性粒细胞检测溶血剂,Strmatolyzer-EO,可将除了嗜酸细胞以外的所有细胞溶解或萎缩，含有完整嗜酸细胞的液体通过小孔可以按照电阻法计数技术进行计数。在嗜碱细胞通道中，使用特殊溶血剂,Strmatolyzer-BA,可将除了嗜碱细胞以外的所有细胞溶解或萎缩，含有完整嗜碱细胞的液体通过小孔可以按照电阻法计数技术进行计数。,网织红细胞散点图,IRF：未成熟网织红细胞比率,有效监控红细胞生成动力学,骨髓抑制,红细胞生成恢复期,血疗效的观察,体积,荧光,ABX Pentra 系列五分类血细胞分析仪,ABX Pentra 系列全自动五分类血细胞分析仪，采用了白细胞计数通道，双鞘流检测通道(LMNE 散点图)和白细胞/嗜碱细胞（WBC/BAOS）通道同时进行检测来完成白细胞五分类的全面分析。LMNE 检测通道采用三种技术原理同时进行白细胞的分类：1、双鞘流原理（DHSS）2、细胞化学染色（Cytochemistry）结合吸光法原理3、鞘流阻抗技术（Focused Flow Impendance）。白细胞/嗜碱细胞检测通道：采用生物溶解技术，阻抗技术，域值界标技术进行白细胞计数及嗜碱细胞的检测。,其它白细胞分类的原理,1.,激光散射和细胞化学染色技术,：,仪器在白细胞分类上采用了白细胞过氧化酶测定通道和嗜碱粒细胞测定通道。根据细胞化学染色的特性进行白细胞分类。早期的原始粒细胞为阴性，原始粒细胞以下各阶段都含有过氧化物酶，并随着细胞的成熟而增强。不同的粒细胞过氧化物酶含量不同，嗜酸性粒细胞具有最强的过氧化物酶，中性粒细胞含有较强的过氧化物酶，嗜碱粒细胞不含此酶。单核细胞除早期原始阶段外，均含有较弱的过氧化物酶。淋巴细胞不含过氧化物酶。根据激光法散射光强度进行的细胞体积的测量同时也获得了细胞大小的信息，在白细胞过氧化物酶散点图上，,X,轴表现过氧化物酶强度，过氧化物酶强阳性细胞位于右端；,Y,轴表现散射光强度信号，位于上方的表示散射光信号强，细胞体积大。除了嗜碱细胞外每个类型的细胞根据它们的特点被记录于特定的位置，在设定的门的范围内形成分类,。,其它白细胞分类的原理,2.,多角度偏振光散射法应用于白细胞五分类（,MAPSS,技术）：,该技术的基本原理是标本在水动力聚焦系统的作用下进入检测部，在激光束的照射下，细胞在多个角度都产生散射光。仪器特别设置了四个角度来收集散射光的信号。,0,度为前角光散射，,用于粗略判断细胞体积大小；,10,度为狭角散射，,用于检测细胞结构及其内部复杂性的指标；,90,度为垂直光散射，用于对细胞内部颗粒及细胞核分叶情况的分析；,90,度偏振光散射，基于颗粒可以将垂直角度的激光消偏振的特性，将嗜酸性细胞从中性粒细胞和其他细胞中分离出来。根据散射光的角度和位置，仪器内部的四个检测器可以接收到相应的信号，由仪器内部的微处理器进行分析处理，不同的细胞将被安置在散点图上的相应位置，根据计算将结果白细胞分类结果得到,血细胞分析仪的发展近况和展望,1,、血常规检验多参数化,2,、多功能合成扩展,3,、检测速度的提高,4,、方法的改进和进展,5,、应用的方便性,thank you!,