实验六--微生物的显微直接计数.ppt

*,*,*,实验六微生物的显微直接计数,1.了解血球计数板的计数原理，掌握,血球计数板的计数方法。,2.观察酵母菌的形态，学习区分酵母,菌死活细胞的方法。,一、目的要求,（一）血球计数板计数原理,血球计数板是一块特制的载玻片，有四条竖槽和一条横槽。横槽两边的平台上各有一个有九个大方格的方格网，中间大方格为计数室：边长为，深为0.1mm，容积为0.1mm,3,(10,-4,ml)。,计数室有两种规格：一是分为16个中方格，每中方格中有25个小方格；另一种是分为25个中方格，每中方格有16个小方格。两种都共有400个小方格。,二、基本原理,4-2,计数板结构,血球计数板高度0.1mm,计菌器高度0.02mm,（二）区分酵母菌死活细胞基本原理,美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型是无色。,用美蓝对酵母菌的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变成无色的还原型。,具有还原能力的酵母活细胞是无色的或淡蓝色，,而死细胞或代谢作用的衰老细胞则呈蓝色。,酵母菌悬液、血球计数板、显微镜、,盖玻片、美蓝染液等。,三、器材,1.酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别,(1),在载玻片上加半滴美蓝染液，在染液上,滴一滴菌液。取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下盖在菌液上。,(2,),将标本片放,3,分钟,后，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母菌的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。,四、操作步骤,（1）稀释,将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。,（,2）镜检计数室,在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后用电吹风吹干后 才能进行计数。,2.酵母菌液的计数,（3）加样品,在血球计数板上盖上盖玻片,用滴管将摇匀的酵母菌液由盖玻片边的小槽滴一小滴,菌液会自动进入计数室，静置,5分钟,。,（4）显微镜计数,将血球计数板置于载物台上，先用低倍镜找到计数室的位置，再换高倍镜计数。每计数室计5个中格（四角和中间）。计数原则：计上不计下，计左不计右。芽体占母细胞一半时算一个。,位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。,出芽菌计数,压线菌计数,（5）清洗血球计数板,使用完毕后，将血球计数板在水龙头上用水柱冲洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其化沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为,止,。,五、实验报告,各个中格中菌数,A,B,菌数/mL,二室平均值,1,2,3,4,5,第一室,第二室,注：A 表示五个中方格中的总菌数；B 表示菌液稀释倍数。,1.将结果记录于下表中。,2.酵母菌死活细胞的比例？,1、用此法计数的结果是活菌体还是死、,活菌体的总和？,2、为什么用两种不同规格的计数板测同,一样品时，其结果一样？,六、思考题,