抗体医学知识.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第一节 抗体结构与功效,一、抗体概念与分布,1.,抗体,（,Antibody,，,Ab,）是机体,B,细胞在抗原刺激下产生免疫球蛋白。,2.,免疫球蛋白,（,Immunoglobulin,Ig,）,指含有抗体活性或化学结构与抗体相同球蛋白。,区分,：,Ab,都是,Ig,，,Ig,不一定是,Ab,。,抗体医学知识专家讲座,第1页,3.,抗体分布,1,体液抗体,2,亲细胞抗体,(,体液,尤其是血清中,),(,细胞表面,),抗体医学知识专家讲座,第2页,二、抗体基本结构,结合抗原之前,结合抗原之后,T,Y,抗体医学知识专家讲座,第3页,二、抗体基本结构,抗体医学知识专家讲座,第4页,V,区内氨基酸残基组成和排列次序极易改变区为高变区,（,CDR,区）,。,3,个高变区即可组成抗原结合区。,高变区,抗体医学知识专家讲座,第5页,抗体医学知识专家讲座,第6页,三、抗体功效区,Ig,多肽链折叠后由二硫键连接成球状结构为其功效区。,VH-VL,功效区,-,结合抗原；,CH1-CL,功效区,-,遗传标志区,CH2,功效区,-,结合补体；,CH3,功效区,-,结合一些细胞,抗体医学知识专家讲座,第7页,第二节 抗体分类及其生物学功效,抗体类,抗体亚类,抗体型,抗体亚型,k,or,l,一、抗体类别,重链抗原性与分子量,铰链区组成和二硫键数目,轻链抗原性,氢链个别氨基酸,抗体医学知识专家讲座,第8页,抗体类,链,链,链,链,链,抗体医学知识专家讲座,第9页,抗体亚类,抗体医学知识专家讲座,第10页,二、各类抗体特征与功效,1.,IgG,（,1,）单体，血清中含量最高，半衰期最长；,（,2,）,是抗感染主要抗体，发挥抗,细菌,、,抗,毒素,、抗病毒,作用。,（,3,）唯一能经过胎盘抗体，在新生儿抗感染中起作用。,抗体医学知识专家讲座,第11页,J,链,膜型,IgM,单体，存在,B,细胞表面，组成,BCR,。,B,细胞膜,BCR,分泌型,IgM(,巨球蛋白,),五聚体，分子量最大，存在于血流中。免疫应答中最先出现抗体，早期抗感染及早期诊疗指标。,2.,IgM,抗体医学知识专家讲座,第12页,3.,IgA,血清型,IgA-,单体，分布于血清，主要起免疫调整作用,分泌型,IgA(SIgA,）,-,二聚体，分布于外分泌液中，,可经,初乳,传给胎儿。,唾液,眼泪、乳汁,鼻黏膜分泌液,支气管分泌液,生殖道分泌物,前列腺液,小肠黏膜分泌液,SIgA,是抗,黏膜感染,主要抗体,抗体医学知识专家讲座,第13页,4.,IgE,（,1,）单体，最晚产生，主要存在于,肥大细胞和嗜碱性,粒细胞表面，又称,为亲细胞抗体。,（,2,）介导,型超敏反应和抗寄生虫感染。,抗体医学知识专家讲座,第14页,5.,IgD,（,1,）血清,IgD,-,单体,血清中含量极低，功效不清。,（,2,）膜型,IgD,（,mIgD,）,-,单体,表示于成熟,B,细胞表面，与,B,细胞成熟相关。,抗体医学知识专家讲座,第15页,第三节 抗体基因及表示,Ig,基因库,V,基因,D,基因,J,基因,C,基因,基因定位染色体,H,链基因库,（,IGH,）,96,（,65,）,27,9,（,6,）,11,（,9,）,14,链基因库,(,IGK,),90,（,60,）,0,5,1,2,链基因库,(,IGL,),60,（,30,）,0,7,7,（,4,）,22,一、人,Ig,基因库及基因结构,抗体医学知识专家讲座,第16页,抗体医学知识专家讲座,第17页,二、抗体基因重排与表示,抗体医学知识专家讲座,第18页,三、抗体多样性（,10,4,）机理,（,1,）抗体基因库存放大量基因片段；,（,2,）,V-J,和,V-D-J,重排时，基因片段进行随机组合；,（,3,）,VDJ,连接过程中核苷酸可能发生突变、缺失或插入；,（,4,）,L,链,H,链之间随机配对组合；,（,5,）抗原刺激后，,B,细胞中高频基因突变。,抗体医学知识专家讲座,第19页,第四节 人工制备抗体,依据制备原理不一样分：,1,多克隆抗体,2,单克隆抗体,Polyclonal antibody,PcAb,Monoclonal antibody,McAb,抗体医学知识专家讲座,第20页,一、,PcAb,概念,抗原免疫动物后，由多个不一样细胞克隆产生针对多个,不一样表位异质性抗体。,B1,B2,B3,B4,Ag,2,3,4,1,Ab1,Ab2,Ab3,Ab4,抗体医学知识专家讲座,第21页,二、,PcAb,制备,-,采取免疫动物法,免疫原制备,免疫动物（,3,次）,测定抗体水平,动物采血分离血清,-20,冻存,1,2,3,4,1,2,3,1,2,3,4,B,細胞,抗体医学知识专家讲座,第22页,免疫原制备,即将抗原与佐剂进行充分研磨乳化。免疫佐剂是增强机,体反抗原免疫应答物质。惯用有氢氧化铝、蜂胶、,弗氏佐剂等。,抗体医学知识专家讲座,第23页,Rabbit/2kg,BALB/C mouse/20g,Rat/200g,Guinea pig,Sheep,、,Goat,、,Horse,免疫动物选择,抗体医学知识专家讲座,第24页,1.,免疫剂量：,100-200ug/,只,2.,免疫间隔时间,:,第一次和第二次间隔,10-20d,，三次及以后间隔,7-10d,3.,免疫路径,:,皮内、皮下、肌肉、腹腔、,腋窝,淋巴结,免疫程序,抗体医学知识专家讲座,第25页,三、,McAb,概念,由单个,B,细胞克隆产生针对单一抗原表位同质性抗体,。,抗体医学知识专家讲座,第26页,四、单克隆抗体与多克隆抗体特征比较,PcAb,McAb,特异性 专一性,免疫动物取得 淋巴细胞杂交瘤技术取得,产量有限 产量无限,用于普通免疫诊疗 判别诊疗、制备生物导弹治疗,及免疫治疗 肿瘤、抗原结构分析,抗体医学知识专家讲座,第27页,五、,McAb,制备,1975,年,Kohler,和,Milstein,创建了淋巴细胞杂交瘤技术用于生产,McAb,。,原理,:,是,B,细胞是短寿细胞，在体外不能无限制增殖；骨,髓瘤细胞可在体外无限增殖，但不能产生,Ab,。将免疫后含有分,泌抗体能力,B,细胞与骨髓瘤细胞融合形成,B,细胞杂交瘤，,B,细胞,杂交瘤经克隆后成为单细胞克隆，则该克隆既可无限生长又可,分泌,McAb,。,抗体医学知识专家讲座,第28页,抗体医学知识专家讲座,第29页,免疫,BALB/C,小鼠 培养骨髓瘤细胞（,缺乏,TK,，,HGPRT,）,搜集免疫后,B,淋巴细胞 搜集骨髓瘤细胞,PEG,细胞融合,HAT,选择培养基筛选杂交瘤细胞,筛选分泌抗体杂交瘤细胞,单克隆化培养（,有限稀释法,）,取得稳定分泌,McAb,杂交瘤细胞株,McAb,生产（杂交瘤培养上清或诱生腹水）,McAb,纯化及判定,单克隆抗体制备程序,用已知抗原检测,抗体医学知识专家讲座,第30页,抗体医学知识专家讲座,第31页,液体石蜡,抗体医学知识专家讲座,第32页,HAT,培养基选择原理,HAT,选择培养基中含有次黄嘌呤,H,、氨甲喋呤,A,和胸腺嘧啶核苷,T,。,抗体医学知识专家讲座,第33页,1.,名词解释：单克隆抗体，超变区,2.,画出抗体基本结构、功效区和消化片段，并写出各功效区作用。,3.Ig,类是怎样划分,?,各类,Ig,有何功效,?,4.,抗体多样性是怎样形成？,思 考 题,抗体医学知识专家讲座,第34页,