食品添加剂的测定1.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,食品添加剂的测定,第十二章,食品添加剂的测定,第一节,概述,第二节,甜昧剂的测定,第三节,防腐剂的测定,第四节,护色剂的测定,第五节,漂白剂的测定,第六节,着色剂的测定,第七节,抗氧化剂的测定,食品添加剂的测定,第一节,概,述,一、食品添加剂的概念及分类,1,.,食品添加剂的概念,为了改善食品的品质及色、香、味，各类食品添加剂被广泛用于食品加工中。中华人民共和国食品卫生法对食品添加剂的定义是：,“,为改善食品的品质和色、香、味，以及为防腐和加工的需要而加入食品中的化学合成或天然物质。,”,从上述定义可知，添加剂是出于技术目的而有意识加到食品中的物质。显然它不包括食品中的污染物。当前食品添加剂已经进入到粮油、肉禽、果蔬加工等各个领域，也是烹饪行业必备的配料，并已进入家庭的一日三餐。如方便面中含有的,BHA（,丁基羟基茴香醚）、,BHT（,二丁基羟基甲苯）等抗氧化剂，味精、肌苷酸等风味剂，磷酸盐等品质改良剂。酱油中的防腐剂苯甲酸钠、食用色素。饮料中含有酸味剂如柠檬酸、甜味剂如甜菊苷等。为此食品,中添加剂的测定已成为食品分析中的重要内容。,食品添加剂的测定,2,.,食品添加剂的分类,食品添加剂的种类繁多，,我国较为常用的有300,多种。,食品添加剂的分类可按其来源、功能等划分。按来源分为天然食品添加剂和化学合成添加剂。按其功能和用途，可将食品添加剂分为,22,类，它们是：酸度调节剂；抗结剂；消泡剂；抗氧化剂；漂白剂；膨松剂；胶姆糖基础剂；着色剂；护色剂；乳化剂；酶制剂；增味剂；面粉处理剂；被膜剂；水分保持剂；营养强化剂；防腐剂；凝固剂；甜味剂；增稠剂；香料；其他。,食品添加剂的测定,二、食品添加剂的安全使用和管理,对加工食品的要求，首先是无毒、无害、有一定的营养价值，同时也要求一定的色、香、味、形态及结构。为此，在食品生产中，经常使用各种添加剂。作为食品添加剂必须有一定的要求：,（,1,）食品添加剂本身应经过充分的毒理学鉴定程序，证明,在使用限量范围内对人体无害。,（,2,）食品添加剂进入人体后最好能参与人体正常代谢，或在正常解毒过程，排泄过程中排出体外，不在人体内积累、分解或形成对人体有害的物质。,（3）食品添加剂对食品的营养成分不应有破坏作用，也不应影响食品的质量及风味。,食品添加剂的测定,（4）食品添加剂必须有一定的工艺功效，具有保持食品营养，防止腐败变质、增强感观性状、提高产品质量的作用，应在较低限量内产生显著效果。,（5）使用方便、安全、易于贮存、运输与处理。,（6）添加于食品后能被分析鉴定出来。,随着食品工业的迅速发展，正确使用食品添加剂以保证食品质量，保证人民身体健康，以及研制、开发、推广无毒或低毒的食品添加剂就有着更重要的意义。而食品添加剂的检测就起到了监督、保证与促进的作用。,食品添加剂的测定,添加剂作为食品工业的重要组成部分，虽然它只在食品中添加,0.01%0.1%,，却对改善食品的性状、提高食品的档次等发挥着极其重要的作用。食品添加剂的作用可归纳如下。,提高食品的保藏性能，延长保质期，防止微生物引起的腐败和由氧化引起的变质。,保持和提高食品的营养价值，改善食品的感官性状，如食品的色、香、味、形、质地等。,有利于食品的加工操作。,增加食品的品种和方便性。,满足其他特殊要求。如糖尿病人不能吃糖，可使用无营养甜味剂或低热能甜味剂制成无糖食品供应。,食品添加剂的测定,三、食品添加剂检测方法,添加剂的种类多，功能各异，经常测定的项目有：甜味剂、防腐剂、发色剂、漂白剂、着色剂、抗氧化等。测定中须先将上述添加剂从复杂的食品混合物中分离出来，再根据其物理、化学性质选择适当的方法进行测定。常用的方法有紫外分光光度法、薄层层析法、高效液相色谱法等。,食品添加剂的测定,第二节,甜昧剂的测定,甜味剂是指赋予食品以甜味的食品添加剂,一、糖精钠的检测,糖精钠俗称糖精，是广泛使用的一种人工甜味剂，常用食品如酱菜、冰激凌、蜜饯、糕点、饼干、面包等均可以糖精钠作甜味剂以提高其甜度。,糖精钠的测定方法有薄层色谱定性及半定量法、紫外分光光度法、酚磺酞比色法、高效液相色谱法、离子选择性电极法等,食品添加剂的测定,（一）高效液相色谱法,1,测定原理,试样加温除去二氧化碳和乙醇，调节,pH,至近中性，过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。,2,试剂,（,1,）甲醇,经滤膜（,0.5,m,）,过滤。,（,2,）氨水,1+1,。,（,3,）乙酸铵溶液,0.02,mol/L,。,称取,1.54,g,乙酸铵，加水至,1000,mL,溶解，经,0.45,m,滤膜过滤。,食品添加剂的测定,（,4,）糖精钠标准贮备溶液,准确称取,0.0851,g,经,120,烘干,4,h,后的糖精钠（,C,6,H,4,CONNaSO,2,2H,2,O,），,加水溶解定容至,100,mL,。,糖精钠含量,1.0,mg/,mL,，,作为贮备溶液。,（,5,）糖精钠标准使用溶液,吸取糖精钠标准贮备溶液,10,mL,放入,100,mL,容量瓶中，加水至刻度，经,0.45,m,滤膜过滤，该溶液每毫升相当于,0.10,mg,的糖精钠。,3,仪器,高效液相色谱仪，紫外检测器。,食品添加剂的测定,4,分析步骤,（,1,）样品处理,汽水,称取,5.00,10.00,g,，,放入小烧杯中，微温搅拌除去二氧化碳，用氨水（,1+1,）调,pH,约,7,，加水定容至适当的体积，经,0.45,m,滤膜过滤。,果汁类,称取,5.00,10.00,g,，,用氨水（,1+1,）调,pH,约,7,，加水定容至适当的体积，离心沉淀，上清液经,0.45,m,滤膜过滤。,配制酒类,称取,10.00,g,，,放入小烧杯中，水浴加热除去乙醇，用氨水（,1+1,）调,pH,约,7,，加水定容至,20,mL,，,经,0.45,m,滤膜过滤。,食品添加剂的测定,（,2,）高效液相色谱参考条件。,色谱柱,YWG-C,18,4.6mm,250mm,，,10,m,不锈钢柱。,流动相,甲醇,-,乙酸铵溶液（,0.02,mol/L,）（,5+95,）。,流速,l,mL,/min,。,检测器,紫外检测器，,230,nm,波长，,0.2,A,FS,（,3,）,测定,取样品处理液和标准使用液各,10,L,（,或相同体积）注入高效液相色谱仪进行分离，以其标准溶液峰的保留时间为依据进行定性，以其峰面积求出样液中被测物质的含量，供计算。,食品添加剂的测定,5,结果计算,式中,X,样品中糖精钠含量，,g/kg,；,m,1,进样体积中糖精钠的质量，,mg；,V,1,样品稀释总体积，,mL,；,V,2,进样体积，,mL,；,m,2,样品质量，,g。,结果的表述：报告算术平均值的两位有效数。,允许差,相对误差10%。,食品添加剂的测定,第三节,防腐剂的测定,一、苯甲酸的测定,苯甲酸俗称安息香酸，是最常用的防腐剂之一。因对其安全性尚有争议，认为它可能有蓄积中毒现象，故有逐步被山梨酸盐类防腐剂取代的趋势。,苯甲酸（钠）的测定有气相色谱法、紫外分光光度法、高效液相色谱法和滴定法等。,（一）气相色谱法,1,.,测定原理,样品酸化后，用乙醚提取苯甲酸，用附氢火焰离子化检测器的气相色谱仪进行分离测定，与标准系列比较定量。,食品添加剂的测定,2,试剂,乙醚,不含过氧化物。,石油醚,沸程,30,60,。,盐酸,1+,l,。,无水硫酸钠。,氯化钠酸性溶液,40,g/L,，,于氯化钠溶液（,40,g/L,）,中加少量盐酸（,1+1,）酸化。,苯甲酸标准溶液 准确称取苯甲酸0.2000,g，,置于100,mL,容量瓶中，用石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂溶解并稀释至刻度（此溶液每毫升相当于2.0,mg,苯甲酸）。,苯甲酸标准使用液 吸取适量的苯甲酸标准溶液，以石油醚-乙醚（3+1）混合溶剂稀释至每毫升相当于50,g、100,g、150,g、200,g、250,g,苯甲酸。,食品添加剂的测定,3,仪器,气相色谱仪，具有氢火焰离子化检测器。,4,操作方法,（,1,）样品提取,称取,2.50,g,事先混合均匀的样品，置于,25,mL,带塞量筒中，加,0.5,mL,盐酸（,1+1,）酸化，用,15,mL,、,l0mL,乙醚提取两次，每次振摇,lmin,，,静置分层后将上层乙醚提取液吸入另一个,25,mL,带塞量筒中，合并乙醚提取液。用,3,mL,氯化钠酸性溶液（,40,g/L,）,洗涤两次，静置,15,min,，,用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入,25,mL,容量瓶中，用乙醚洗量筒及硫酸钠层，洗液并入容量瓶。加乙醚至刻度，混匀。准确吸取,5,mL,乙醚提取液于,5,mL,带塞刻度试管中，置,40,水浴上挥干，加入,2,mL,石油醚,-,乙醚（,3+1,）混合溶剂溶解残渣，备用。,食品添加剂的测定,（,2,）色谱参考条件,色谱柱,玻璃柱，内径,3,mm,，,长,2,m,，,内装涂以,5,DEGS+1,H,3,PO,4,固定液的,60,80,目,Chromosorb,WAW,。,气流速度,载气为氮气，,50,mL,/min,（,氮气和空气、氢气之比按各仪器型号不同选择各自的最佳比例条件）。,温度,进样口,230,；检测器,230,；柱温,170,。,（,3,）测定,进样,2,L,标准系列中各浓度标准使用液于气相色谱仪中，可测得不同浓度苯甲酸的峰高，以浓度为横坐标，相应的峰高值为纵坐标，绘制标准曲线。同时进样,2,L,样品溶液。测得峰高与标准曲线比较定量。,食品添加剂的测定,5,结果计算,式中,X,样品中苯甲酸的含量，,g/kg,；,m,1,测定用样品液中苯甲酸的质量，,g,；,V,1,加入石油醚,-,乙醚（,3+1,）混合溶剂的体积，,mL,；,V,2,测定时进样的体积，,L,；,m,2,样品的质量，,g,；,5,测定时乙醚提取液的体积，,mL,；,25,样品乙醚提取液的总体积，,mL,。,若测定苯甲酸钠的含量，可将上述苯甲酸的含量乘以,1.18,。,食品添加剂的测定,二、山梨酸（钾）的测定,山梨酸俗名花楸酸，化学名称为,2,，,4-,己二烯酸。山梨酸及其钾盐作为酸性防腐剂，在酸性介质中对霉菌、酵母菌、好氧性细菌有良好的抑制作用，可与这些微生物酶系统中的巯基结合使之失活。但对厌氧的芽孢杆菌、乳酸菌无效。山梨酸是一种不饱和脂肪酸，在机体内可参与正常的新陈代谢，是目前被认为最安全的一类食品防腐剂。,山梨酸（钾）的测定方法有气相色谱法、高效液相色谱法、分光光度法等。其中气相色谱法、高效液相色谱法测定山梨酸（钾），其原理、样品制备、所用试剂、仪器及操作都与苯甲酸的测定完全相同，只是将苯甲酸的标准贮备液及标准使用液换为山梨酸（钾）。具体操作见本节苯甲酸的测定。下面介绍分光光度法。,食品添加剂的测定,1,测定原理,提取样品中山梨酸及其盐类，经硫酸,-,重铬酸钾氧化成丙二醛，再与硫代巴比妥酸形成红色化合物，其颜色深浅与丙二醛含量成正比，可于,530,nm,处比色定量。,2,试剂,重铬酸钾,-,硫酸溶液,1/60,mol/L,重铬酸钾与,0.15,mol/L,硫酸以,1:1,混合备用。,硫代巴比妥酸溶液,准确称取,0.5,g,硫代巴比妥酸于,100,mL,容量瓶中，加,20,mL,水，加,10,mL,lmol,/L,氢氧化钠溶液，摇匀溶解后再加,lmol,/L,盐酸，以水定容（临时用配制，,6,h,内使用）。,山梨酸钾标准溶液 准确称取250,mg,山梨酸钾于250,mL,容量瓶中，用蒸馏水溶解并定容（本溶液山梨酸含量为,lmg/mL,，,使用时再稀释为0.1,mg/,mL,）。,食品添加剂的测定,3,仪器,分光光度计；组织捣碎机；,10,mL,比色管。,4,操作方法,（,1,）样品处理,称取,100,g,样品，加,200,mL,水于组织捣碎机中捣成匀浆。称取匀浆,100,g,，,加水,200,mL,继续捣,lmin,，,称取,10,g,于,250,mL,容量瓶中定容，摇匀，过滤备用。,（,2,）标准曲线绘制,吸取,0.0,mL,、,2.0mL,、,4.0mL,、,6.0mL,、,8.0mL,、,10.0mL,山梨酸钾标准溶液于,250,mL,容量瓶中，用水定容。分别吸取,2.0,mL,于相应的,10,mL,比色管中，加,2,mL,重铬酸钾硫酸溶液，于,100,水浴中加热,7,min,，,立即加入,2.0,mL,硫代巴比妥酸，继续加热,10,min,，,立刻用冷水冷却，于,530,nm,处测吸光度，绘制标准曲线。,（,3,）试样测定,吸取式样处理液,2,mL,于,10,mL,比色管中，按标准曲线绘制操作，于,530,nm,处测吸光度，以标准曲线定量。,食品添加剂的测定,5,结果计算,式中,X,1,山梨酸钾含量，,g/kg,；,X,2,山梨酸含量，,g/kg,；,c,试液中含山梨酸钾的浓度，,mg/,mL,；,m,称取匀浆相当于试样质量,g,；,1.34,山梨酸与山梨酸钾之间的换算系数。,食品添加剂的测定,第四节,护色剂的测定,一、亚硝酸盐的测定,盐酸萘乙二胺法,盐酸萘乙二胺法又称格里斯试剂比色法，介绍如下。,1测定原理,样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，再与,N-1-,萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。,2试剂,亚铁氰化钾溶液 称取106.0,g,亚铁氰化钾,K,4,Fe（CN）,6,3H,2,O，,用水溶解，并稀释至1000,mL,。,乙酸锌溶液 称取220.0,g,乙酸锌,Zn（CH,3,COO）,2,2H,2,O，,加30,mL,冰醋酸溶于水，并稀释至1000,mL,。,食品添加剂的测定,饱和硼砂溶液,称取,5.0,g,硼酸钠（,Na,2,B,4,O,7,10H,2,O,），,溶于,100,mL,热水中，冷却后备用。,对氨基苯磺酸溶液,4,g/L,。,称取,0.4,g,对氨基苯磺酸，溶于,100,mL,20,盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。,盐酸萘乙二胺溶液,2,g/L,。,称取,0.2,g,盐酸萘乙二胺，溶解于,100,mL,水中，混匀后，置棕色瓶中，避光保存。,亚硝酸钠标准溶液,准确称取,0.100 0,g,于硅胶干燥器中干燥,24,h,的亚硝酸钠，加水溶解移入,500,mL,容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液每毫升相当于,200,g,的亚硝酸钠。,亚硝酸钠标准使用液,临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液,5.00,mL,，,置于,200,mL,容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于,5.0,g,的亚硝酸钠。,食品添加剂的测定,3,仪器,小型绞肉机；分光光度计。,4,操作方法,（,1,）样品处理,称取,5.0,g,经绞碎混匀的样品，置于,50,mL,烧杯中，加,12.5,mL,饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以,70,左右的水约,300,mL,将试样洗入,500,mL,容量瓶中，于沸水浴中加热,15,min,，,取出后冷却至室温，然后一面转动，一面加入,5,mL,亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入,5,mL,乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置,0.5,h,，,除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液,30,mL,，,滤液备用。,食品添加剂的测定,（,2,）测定,吸取,40.0,mL,上述滤液于,50,mL,带塞比色管中，另吸取,0.00,mL,、,0.20mL,、,0.40 mL,、,0.60 mL,、,0.80mL,、,1.00mL,、,1.50mL,、,2.00mL,、,2.50mL,亚硝酸钠标准使用液（相当于,0,g,、,1,g,、,2,g,、,3,g,、,4,g,、,5,g,、,7.5,g,、,10,g,、,12.5,g,亚硝酸钠），分别置于,50,mL,带塞比色管中。于标准管与试样管中分别加入,2,mL,对氨基苯磺酸溶液（,4,g/L,），,混匀，静置,35,min,后各加入,lmL,盐酸萘乙二胺溶液（,2,g/L,），,加水至刻度，混匀，静置,15,min,。,用,2,cm,比色杯，以零管调节零点，于波长,538,nm,处测吸光度，绘制标准曲线比较，同时做试剂空白。,食品添加剂的测定,5,结果计算,式中,X,样品中亚硝酸盐的含量，,mg/kg,；,m,样品质量，,g,；,测定用样液中亚硝酸盐的质量，,g,；,V,1,样品处理液总体积，,mL,；,V,2,测定用样液体积，,mL,。,食品添加剂的测定,二、硝酸盐的测定,镉柱法,1,测定原理,样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，溶液通过镉柱，使其中的硝酸根离子还原成亚硝酸根离子，在弱酸性条件下，亚硝酸根与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成红色染料，测得亚硝酸盐总量，用总量减去亚硝酸盐含量即得硝酸盐含量。,2,试剂,氨缓冲溶液（,pH,9.6,9.7,）,量取,20,mL,盐酸，加,50,mL,水，混匀后加,50,mL,氨水，再加水稀释至,1000,mL,，,混匀。,食品添加剂的测定,稀氨缓冲液,量取,50,mL,氨缓冲溶液，加水稀释至,500,mL,，,混匀。,盐酸,0.1,mol/L,。,硝酸钠标准溶液,准确称取,0.123 2,g,于,110,120,干燥恒重的硝酸钠，加水溶解，移入,500,mL,容量瓶中，并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于,200,g,亚硝酸钠。,硝酸钠标准使用液,临用时吸取硝酸钠标准溶液,2.50,mL,，,置于,100,mL,容量瓶中，加水稀释至刻度。此溶液每毫升相当于,5,g,亚硝酸钠。,亚硝酸钠标准使用液,见亚硝酸盐测定（盐酸萘乙二胺法）。,食品添加剂的测定,3,仪器,镉柱。,（,1,）海绵状镉的制备,投入足够的锌皮或锌棒于,500,mL,硫酸镉溶液（,200,g/L,）,中，经,34,h,，,当其中的镉全部被锌置换后，用玻璃棒轻轻刮下，取出残余锌棒，使镉沉底，倾去上层清液，以水用倾泻法多次洗涤。然后移入组织捣碎机中，加,500,mL,水，捣碎约,2,s,，,用水将金属细粒洗至标准筛上，取,20,40,目之间的部分。,（,2,）镉柱的装填,如图,6-1,所示。用水装满镉柱玻璃管，并装入,2,cm,高的玻璃棉作垫，将玻璃棉压向柱底时，应将其中所包含的空气全部排出，在轻轻敲击下加入海绵状镉至,8,10,cm,高，上面用,lcm,高的玻璃棉覆盖，上置一贮液漏斗，末端要穿过橡皮塞与镉柱玻璃管紧密连接。,食品添加剂的测定,图,6-1,镉柱装填示意图,1-,贮液漏斗，内径,35,mm,，,外径,37,mm,；,2-,进液毛细管，内径,0.4,mm,，,外径,6,mm,；,3-,橡皮塞；,4-,镉柱玻璃管，内径,12,mm,，,外径,16,mm,；,5,，,7-,玻璃棉；,6-,海绵状镉；,8-,出液毛细管，内径,2,mm,，,外径,8,mm,食品添加剂的测定,如无上述镉柱玻璃管时，可以,25,mL,酸式滴定管代用。,当镉柱填装好后，先用,25,mL,盐酸（,0.1,mol/L,）,洗涤，再以水洗两次，每次,25,mL,，,镉柱不用时用水封盖，随时都要保持水平面在镉层之上，不得使镉层中夹有气泡。,镉柱每次使用完毕后，应先以,25,mL,盐酸（,0.1,mol/L,）,洗涤，再以水洗两次，每次,25,mL,，,最后用水封盖镉柱。,（,3,）镉柱还原效率的测定,吸取,20,mL,硝酸钠标准使用液，加入,5,mL,稀氨缓冲液，混匀后，吸取,20,mL,于,50,mL,烧杯中，加,5,mL,氨缓冲溶液，混合后注入贮液漏斗中，使流经镉柱还原，以原烧杯收集流出液，当贮液漏斗中的溶液流完后，再加,5,mL,水置换柱内留存的溶液。,食品添加剂的测定,将全部收集液如前再经镉柱还原一次，第二次流出液收集于,100,mL,容量瓶中，继以水流经镉柱洗涤三次，每次,20,mL,，,洗液一并收集于同一容量瓶中，加水至刻度，混匀。,取,10.0,mL,还原后的溶液（相当,10,g,亚硝酸钠）于,50,mL,比色管中，加入,2,mL,对氨基苯磺酸溶液（,4,g/L,），,混匀，静置,3,5,min,后各加入,lmL,盐酸萘乙二胺溶液（,2,g/L,），,加水至刻度，混匀，静置,15,min,。,用,2,cm,比色杯，以零管调节零点，于波长,538,nm,处测吸光度，绘制标准曲线比较，同时做试剂空白。根据标准曲线计算测得结果，与加入量一致，还原效率应大于,98,为符合要求。,食品添加剂的测定,（,4,）计算式；,式中,X,还原效率；,m,测得亚硝酸盐的质量，,g,；,10,测定用溶液相当亚硝酸盐的质量，,g,。,4,操作方法,（1）试样处理 见亚硝酸盐测定（盐酸萘乙二胺法）。,（2）测定 先以25,mL,稀氨缓冲液冲洗镉柱，流速控制在35,mL,/min（,以滴定管代替的可控制在23,mL,/min）。,食品添加剂的测定,吸取,20,mL,处理过的样液于,50,mL,烧杯中，加,5,mL,氨缓冲溶液，混合后注入贮液漏斗，使流经镉柱还原，以原烧杯收集流出液，当贮液漏斗中的样液流完后，再加,5,mL,水置换柱内留存的样液。,将全部收集液如前再经镉柱还原一次，第二次流出液收集于,100,mL,容量瓶中，继以水流经镉柱洗涤三次，每次,20,mL,，,洗液一并收集于同一容量瓶中，加水至刻度，混匀。,食品添加剂的测定,亚硝酸钠总量的测定：吸取,1020,mL,还原后的样液于,50,mL,比色管中。另吸取,0.00,mL,、,0.20mL,、,0.30mL,、,0.40mL,、,0.60mL,、,0.80mL,、,1.00mL,、,1.50mL,、,2.00mL,、,2.50mL,亚硝酸钠标准使用液（相当于,0,g,、,1,g,、,2,g,、,3,g,、,4,g,、,5,g,、,7.5,g,、,10,g,、,12.5,g,亚硝酸钠），分别置于,50,mL,带塞比色管中。于标准管与试样管中分别加入,2,mL,对氨基苯磺酸溶液（,4,g/L,），,混匀，静置,35,min,后各加入,lmL,盐酸萘乙二胺溶液（,2,g/L,），,加水至刻度，混匀，静置,15,min,。,用,2,cm,比色杯，以零管调节零点，于波长,538,nm,处测吸光度，绘制标准曲线比较，同时做试剂空白。,食品添加剂的测定,5,结果计算,式中,X,试样中硝酸盐的含量，,mg/kg,；,m,试样的质量，,g,；,m,1,经镉粉还原后测得亚硝酸钠的质量，,g,m,2,直接测得亚硝酸盐的质量，,g,；,1.232,亚硝酸钠换算成硝酸钠的系数；,V,1,测总亚硝酸钠的试样处理液总体积，,mL,；,V,2,测总亚硝酸钠的测定用样液体积，,mL,；,V,3,经镉柱还原后样液总体积，,mL,；,V,4,经镉柱还原后样液的测定用样液体积，,mL,；,V,5,直接测亚硝酸钠的试样处理液总体积，,mL,；,V,6,直接测亚硝酸钠的试样处理液的测定用样液体积，,mL,。,食品添加剂的测定,第五节,漂白剂的测定,一、概述,二、亚硫酸盐和二氧化硫的测定,测定二氧化硫和亚硫酸盐的方法有盐酸副玫瑰苯胺光度法、中和滴定法、蒸馏法、高效液相色谱法和极谱法等。,（一）盐酸副玫瑰苯胺光度法,1,测定原理,亚硫酸盐与四氯汞钠反应生成稳定的络合物，再与甲醛及盐酸副玫瑰苯胺作用生成紫红色配合物，与标准系列比较定量。,食品添加剂的测定,氨基磺酸铵溶液：,12,g/L,。,称取,1.2,g,氨基磺酸铵于,50,mL,烧杯中，用水转入,100,mL,容量瓶中，定容。,甲醛溶液：,2,g/L,。,吸取,0.55,mL,无聚合沉淀的甲醛（,36,），加水定容至,100,mL,，,混匀。,淀粉指示液：称取,1,g,可溶性淀粉，用少许水调成糊状，缓缓倾入,100,mL,沸水中，随加随搅拌，煮沸，放冷备用。该指示液临时现配。,亚铁氰化钾溶液：称取,10.6,g,亚铁氰化钾,K,4,Fe,（,CN,）,6,3H,2,O,，,加水溶解并稀释至,100,mL,。,食品添加剂的测定,乙酸锌溶液：称取,22,g,乙酸锌,Zn,（,CH,3,COO,）,2,2H,2,O,溶于少量水中，加入,3,mL,冰乙酸，加水稀释至,100,mL,。,盐酸副玫瑰苯胺溶液：称取,0.1,g,盐酸副玫瑰苯胺（,C,19,H,18,N,2,Cl,.,4H,2,O,）,于研钵中，加少量水研磨使溶解并稀释至,100,mL,，,取出,20,mL,，,置于,100,mL,容量瓶中，加盐酸（,1+1,），充分摇匀后使溶液由红变黄，如不变黄再滴加少量盐酸至出现黄色，再加水稀释至刻度，混匀备用（如无盐酸副玫瑰苯胺可用盐酸品红代替）。,食品添加剂的测定,盐酸副玫瑰苯胺精制方法：称取,20,g,盐酸副玫瑰苯胺于,400,水中，用,50,mL,盐酸（,1+5,）酸化，徐徐搅拌，加,45,g,活性炭，加热煮沸,2,min,。,将混合物倒入大漏斗中，过滤（用保温漏斗趁热过滤）。滤液放置过夜，出现结晶，然后再用布氏漏斗抽滤，将结晶再悬浮于,1000,mL,乙醚,-,乙醇（,10:1,）的混合液中，振摇,3,5,min,，,以布氏漏斗抽滤，再用乙醚反复洗涤至醚层不带色为止，于硫酸干燥器中干燥，研细后贮于棕色瓶中保存。,碘溶液：,c,（,1/2I,2,）,0.100mol/L,。,称取,12.7,g,碘用水定容至,100,mL,，,混匀。,硫代硫酸钠标准溶液：,0.1000,mol/L,。,食品添加剂的测定,二氧化硫标准溶液。,（,1,）配制,称取,0.5,g,亚硫酸氢钠，溶于,200,mL,四氯汞钠吸收液中，放置过夜，上清液用定量滤纸过滤备用。,（,2,）标定,吸取,10.0,mL,亚硫酸氢钠,-,四氯汞钠溶液于,250,mL,碘量瓶中，加,100,mL,水，准确加入,20.00,mL,碘溶液（,0.05,mol/L,）、,5mL,冰醋酸，摇匀，放置于暗处,2,min,后迅速以,0.100 0,mol/L,硫代硫酸钠标准溶液滴定至淡黄色，加,0.5,mL,淀粉指示液，继续滴定至无色。另取,100,mL,水，准确加入,0.05,mol/L,碘溶液,20.0,mL,、,5mL,冰醋酸，按同一方法做试剂空白试验。,食品添加剂的测定,按下式计算二氧化硫标准溶液浓度：,式中,X,二氧化硫标准溶液浓度，,mg/,mL,；,V,1,测定用亚硫酸氢钠,-,四氯汞钠溶液消耗硫代硫酸钠标准溶液体积，,mL,；,V,2,试剂空白消耗硫代硫酸钠标准溶液体积，,mL,；,c,硫代硫酸钠标准溶液的摩尔浓度，,mol/L,；,32,.,03,lmL,硫代硫酸钠（,0.1000,mol/L,）,标准溶液相当的二氧化硫的质量，,mg/,mmol,。,二氧化硫使用液：临用前将二氧化硫标准溶液以四氯汞钠吸收液稀释成每毫升当于,2,g,二氧化硫。,氢氧化钠溶液：,20,g/L,。,硫酸：,1+71,。,食品添加剂的测定,3,仪器,分光光度计。,4,操作方法,（,1,）样品处理。,水溶性固体,样品如白砂糖等，可称取约,10.00,g,均匀样品（样品量可视二氧化硫含量而定），以少量水溶解，置于,l00mL,容量瓶中，加入,4,mL,氢氧化钠溶液（,20,g/L,），,5min,后加入,4,mL,硫酸（,1+71,），然后加入,20,mL,四氯汞钠吸收液，以水稀释至刻度。,其他固体样品,如饼干、粉丝等，可称取,5.010.0,g,研磨均匀的样品，以少量水湿润并移入,l00mL,容量瓶中，然后加入,20,mL,四氯汞钠吸收液浸泡,4,h,以上，若上层溶液不澄清可加入亚铁氰化钾溶液及乙酸锌溶液各,2.5,mL,，,最后用水稀释至,l00mL,刻度，过滤后备用。,食品添加剂的测定,液体样品,如葡萄酒等，可直接吸取,5.0,10.0,mL,样品，置于,100,mL,容量瓶中，以少量水稀释，加,20,mL,四氯汞钠吸收液摇匀，最后加水至刻度混匀，必要时过滤备用。,（,2,）测定,吸取,0.5,5.0,mL,上述样品处理液于,25,mL,带塞比色管中。另吸取,0.00,mL,、,0.20mL,、,0.40mL,、,0.60mL,、,0.80mL,、,1.00mL,、,1.50 mL,、,2.00mL,二氧化硫标准使用液（相当于,0.0,g,、,0.4,g,、,0.8,g,、,1.2,g,、,1.6,g,、,2.0,g,、,3.0,g,、,4.0,g,二氧化硫）分别置于,25,mL,带塞比色管中。于样品及标准管中各加入四氯汞钠吸收液至,10,mL,，,然后再加入,lmL,氨基磺酸铵溶液（,12,g/L,）、,1mL,甲醛溶液（,2,g/L,）,及,lmL,盐酸副玫瑰苯胺溶液摇匀，放置,20,min,。,用,1,cm,比色杯，以零管调节零点，于波长,550,nm,处测吸光度，绘制标准曲线比较。,食品添加剂的测定,5,结果计算,式中,X,样品中二氧化硫的含量，,g/kg,；,A,l,测定用样液中二氧化硫的含量，,g,；,m,1,样品质量，,g,；,V,测定用样液的体积，,mL,。,（,二）蒸馏法,1测定原理,在密闭容器中对样品进行酸化并加热蒸馏，释放出其中的二氧化硫，释放物用乙酸铅溶液吸收。吸收后用浓盐酸酸化，再以碘标准溶液滴定，由消耗的碘标准溶液的量计算样品中二氧化硫含量。,食品添加剂的测定,2,试剂,盐酸：,1+1,。浓盐酸用水稀释,1,倍。,乙酸铅溶液：,20,g/L,。,称取,2,g,乙酸铅，溶于少量水中并稀释至,100,mL,。,碘标准溶液。,淀粉指示液：,10,g/L,。,称取,1,g,可溶性淀粉，用少许水调成糊状，缓缓倾入,100,mL,沸水中，随加随搅拌，煮沸,2,min,，,放冷，备用。此溶液应临用时配制。,3,仪器,全玻璃蒸馏器；碘量瓶；酸式滴定管。,食品添加剂的测定,4,操作方法,（,1,）样品处理,固体样品用刀切或剪刀剪成碎末后混匀，称取约,5.00,g,均匀样品（样品量可视含量高低而定）。液体样品可直接吸取,5.0,10.0,mL,样品，置于,500,mL,圆底蒸馏烧瓶中。,（,2,）测定,蒸馏,将称好的样品置入圆底烧瓶中，加入,250,mL,水，装入冷凝装置，冷凝管下端应插入碘量瓶中的,25,mL,乙酸铅（,20,g/L,）,吸收液中，然后，在蒸馏瓶中加入,10,mL,盐酸（,1+1,），立即盖塞加热蒸馏。当蒸馏液约,200,mL,时，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏,1,min,。,用少量蒸馏水冲洗插入乙酸铅溶液中的装置部分。在检测样品的同时要做空白试验。,食品添加剂的测定,滴定,在取下的碘量瓶中依次加入,10,mL,浓盐酸、,lmL,淀粉指示液（,10,g/L,）。,摇匀之后用碘标准滴定溶液（,0.005,mol/L,）,滴定至变蓝且在,30,s,内不退色为止。,5,结果计算,式中,X,样品中二氧化硫总含量，,g/kg,；,V,1,滴定样品所用碘标准滴定溶液（,0.01,mol/L,）,的体积，,mL,；,V,2,滴定试剂空白所用碘标准滴定溶液（,0.01,mol/L,）,的体积，,mL,；,m,样品质量，,g,；,0.032,lmL,碘标准溶液,c,（,1/2I,2,）,1.0mol/L,相当的二氧化硫的质量，,g/mmol,；,0.01,碘标准溶液浓度，,mol/L,。,食品添加剂的测定,第六节,着色剂的测定,一、概述,二、食用合成着色剂的测定,（一）高效液相色谱法,1、原理,食品中人工合成着色剂用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性，与峰面积比较进行定量。,2试剂,正己烷,盐酸,乙酸,甲醇：经滤膜（0.5,m）,过滤。,聚酰胺粉（尼龙6）：过200目筛。,乙酸铵溶液：0.02,mol/L。,称取1.54,g,乙酸铵，加水至1000,mL,溶解，经滤膜（0.45,m）,过滤。,食品添加剂的测定,氨水：取,2,mL,氨水，加水至,100,mL,混匀。,氨水,-,乙酸铵溶液：,0.02,mol/L,。,取氨水,0.5,mL,加乙酸铵溶液（,0.02,mol/L,）,至,1000,mL,混匀。,甲醇,-,甲酸溶液：,6+4,。取甲醇,60,mL,，,甲酸,40,mL,混匀。,柠檬酸溶液：取,20,g,柠檬酸（,C,6,H,8,O,7,H,2,O,）,加水至,100,mL,，,溶解混匀。,无水乙醇,-,氨水,-,水溶液：,7+2+1,。取无水乙醇,70,mL,、,氨水,20,mL,、,水,10,mL,混匀。,三正辛胺正丁醇溶液：,5,。取三正辛胺,5,mL,，,加正丁醇至,100,mL,混匀。,饱和硫酸钠溶液。,硫酸钠溶液：,2,g/L,。,pH,6,的水：水加柠檬酸溶液调,pH,6,。,食品添加剂的测定,合成着色剂标准溶液：准确称取按其纯度折算为,100,质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、新红、赤藓红、亮蓝、靛蓝各,0.100,g,，,置于,100,mL,容量瓶中，加,pH,6,的水到刻度，配成水溶液（,1.00,mg/,mL,）。,合成着色剂标准使用液：临用时上述溶液加水稀释,20,倍，经,0.45,m,滤膜过滤。配成每毫升相当,50.0,g,的合成着色剂。,3,仪器,高效液相色谱仪，带紫外检测器，,254,nm,波长。,食品添加剂的测定,4,操作方法,（,1,）样品处理。,橘子汁、果味水、果子露汽水等,称取,20.0,40.0,g,放入,100,mL,烧杯中。含二氧化碳样品加热驱除二氧化碳。,配制酒类,称取,20.0,40.0,g,放入,100,mL,烧杯中，加入小碎瓷片数片，加热驱除乙醇。,硬糖、蜜饯类、淀粉软糖等,称取,5.00,10.00,g,，,粉碎样品，放入,100,mL,小烧杯中，加水,30,mL,，,温热溶解，若样品溶液,pH,较高，用柠檬酸溶液调,pH,至,6,左右。,巧克力豆及着色糖衣制品 称取5.0010.00,g，,放入100,mL,小烧杯中，用水反复洗涤色素，至巧克力豆无色素为止，合并色素漂洗液为样品溶液。,食品添加剂的测定,（,2,）色素提取。,聚酰胺吸附法,样品溶液加柠檬酸溶液调,pH,6,，,加热至,60,，将,1,g,聚酰胺粉加少许水调成粥状，倒入样品溶液中，搅拌片刻，以,G3,垂融漏斗抽滤，用,60,pH,4,的水洗涤,3,5,次，然后用甲醇,-,甲酸混合溶液洗涤,3,5,次（含赤藓红的样品用,b,.,法处理），再用水洗至中性，用乙醇,-,氨水,-,水混合溶液解吸,3,5,次，每次,5,mL,，,收集解吸液，加乙酸中和，蒸发至近干，加水溶解，定容至,5,mL,。,经膜（,0.45,m,）,过滤，取,10,L,进高效液相色谱仪。,食品添加剂的测定,液,-,液分配法（适用于含赤藓红的样品）,将制备好的样品溶液放入分液漏斗中，加,2,mL,盐酸、三正辛胺正丁醇溶液（,5%,）,1020,mL,。,振摇提取，分取有机相，重复提取，直到有机相无色，合并有机相，用饱和硫酸钠溶液洗两次，每次,10,mL,，,分取有机相，放蒸发皿中，水浴加热浓缩至,10,mL,，,转移至分液漏斗中，加,60,mL,正己烷，混匀，加氨水提取,2,3,次，每次,5,mL,，,合并氨水溶液层（含水溶性酸性色素），用正己烷洗两次，氨水层加乙酸调成中性，水浴加热蒸发至近干，加水定容至,5,mL,。,经滤膜（,0.45,m,）,过滤，取,10,mL,进高效液相色谱仪。,食品添加剂的测定,（,3,）高效液相色谱参考条件。,柱：,YWG-C18 10,m,不锈钢柱,4.6,mm,（,内径）,250,mm,。,流动相：甲醇,-0.02,mol/L,乙酸铵溶液（,pH,4,）。,梯度洗脱：甲醇,20%,35%,，,3%/,min,；,35%,98%,，,9%/min,；,98%,继续,6,min,。,流速：,lmL,/min,。,紫外检测器：,254,nm,波长。,（,4,）测定,取相同体积样液和合成着色剂标准使用液分别注入高效液相色谱仪，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。,食品添加剂的测定,5,结果计算,式中,X,样品中着色剂的含量，,g/kg,；,样液中着色剂的质量，,g,；,V,2,进样体积，,mL,；,V,1,样品稀