第四章 生物利用度.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,人体生物利用度及生物等效性,(BA/BE),中国药科大学药代中心,杨劲,outline,生物利用度的定义,生物利用度研究的意义,生物利用度的历史,生物利用度定义和前提,生物利用度的研究过程,分析方法,实验设计：药品、受试者、采样时间,血浆、全血、血清,药动学参数,等效性检验,生物利用度,(Bioavailability BA),指药物活性成分从制剂中释放吸收进入体循环的相对速度,(,一般以,T,max,、,C,max,表示,),和程度,(,以,AUC,表示,),相对程度,以静脉给药为标准：绝对生物利用度,以其他给药途径为标准：相对生物利用度,药物吸收程度,F,abs,药物释放，跨膜吸收，肠道菌群代谢等,F,G,PGP,和,3A4,酶，各种转运蛋白,F,H,肝脏首过效应，肝脏内的转运蛋白,药物吸收速度的一般表达,为什么不用,Ka,值,呢？求,ka=,吸收解析,由于药物吸收环节众多，并不存在单一指数方程来作为吸收函数,理论值,不可能仅仅通过本身口服后的数据来区分吸收指数项和消除指数项，从而来进行吸收解析。,(Excel,课件,),所以吸收解析的时候最好要同时进行静脉给药实验的原因,能够确切地知道药物的消除相的情况。,当药物静脉给药和口服给药消除情况不一致的时候，哪怕进行静脉注射也无法进行口服药物的吸收解析，例如口服给药存在肠肝循环，首过效应强等等情况下。,生物利用度研究的目的,不同制剂有不同的药时曲线，利用程度和利用速度可能都不一样。本图速度接近，程度差别很大,最小中毒浓度,最小有效浓度,生物利用度研究的目的,不同处方的同一种类药品生物利用度不一样，变异不一样,Ranitidine,雷尼替丁,山梨醇糖浆剂,蔗糖糖浆剂,量,-,效曲线,药物浓度的效应表达效率,(,形状参数,),Repuesta,Clinica,/PD,Log,Dosis,Development,Market,Research,Safety,PK,In vivo,In vitro,NDA,Clinical Trial,IND,Processing,Toxicology,Idea,Pharmaceutical R&D,Preclinical studies,Clinical studies,CHEMISTRY/,PHARMA-COLOGY,IND*,PHASE I,PHASE II,PHASE III,NDA*,PHASE IV,Search for active substances,Toxicology,efficacy studies on various types of animals,Regulatory review,Efficacy studies on healthy volunteers,Clinical studies on a limited scale,Comparative studies on a large number of patients,Regulatory review,Continued comparative studies,*Investigational New Drug,Application for permission to administer a new drug to humans,50150persons,100200patients,5005,000patients,Registration,market introduction,*New Drug Application,Application for permission to market a new drug,KNOWLEDGELEVEL,KNOWLEDGELEVEL,24 yrs.,26 mos.,36 yrs.,13 yrs.,Approximately 10 years from idea to marketable drug,TIME SPAN,Discovery,Development,生物利用度在新药研发中的位置,生物利用度,生物利用度在仿制药品开发中的位置,Generic,#1,Generic,#K,原创药,Innovator product,Generic,#2,Generic,#3,Generic,#4,Generic,#5,?,相关法规的发展,1985,年,新药审批办法,1999,年,新药审批办法,仿制药品审批办法,2002,年,药品注册管理办法,2005,年,5,月,1,日,药品注册管理办法,2007,年,10,月,1,日,药品注册管理办法,相关法规的发展,1985,年,新药审批办法,：,改变剂型但不改变给药途径的新药，,如属国家标准，可仅进行人体生物利用度的研究，免做临床验证。,1999,年,新药审批办法,：,四类新药应进行生物等效性试验生物利用度比较试验、随机对照的临床研究,1998,年,仿制药品审批办法,：生物利用度,/,生物等效性,2002,年,药品注册管理办法,：,注册分类五：口服固体制剂生物等效性试验,注册分类六：,口服固体制剂生物等效性试验,生物等效性试验规定,(,药品注册管理办,法,2002.12.1),口服固体制剂应当进行生物等效性试验，一般为,18,至,24,例；,难以进行生物等效性试验的口服固体制剂及其他非口服固体制剂，应当进行临床试验,；,速释、缓释、控释制剂应当进行单次和多次给药的人体药代动力学的对比研究和临床试验,；,对于注册分类,6,中的口服固体制剂，可仅进行生物等效性试验，一般为,18,至,24,例；难以进行生物等效性试验的，可仅进行溶出度、释放度比较试验。,分类,6,：已有国家药品标准的原料药或者制剂：仿制药品,法律高度：管理办法,指导原则,药品注册管理办,法,2005.5.1,申请已有国家标准的药品注册，一般不需要进行临床试验；需要进行临床试验的，化学药品一般进行生物等效性试验；,一般不需要进行临床试验，但口服固体制剂应当进行生物等效性试验。,已有国家药品标准的非处方药的生产或者进口；,经国家食品药品监督管理局确定的非处方药改变剂型，但不改变适应症或者功能主治、给药剂量以及给药途径的药品,28,号令,药品注册管理办法,2007,年,10,月,1,日执行,药物的临床试验（包括生物等效性试验），必须经过国家食品药品监督管理局批准，且必须执行,药物临床试验质量管理规范,生物等效性试验，是指用生物利用度研究的方法，以药代动力学参数为指标，比较同一种药物的相同或者不同剂型的制剂，在相同的试验条件下，其活性成份吸收程度和速度有无统计学差异的人体试验。,药物临床试验的受试例数应当符合临床试验的目的和相关统计学的要求，并且不得少于本办法附件规定的最低临床试验病例数。罕见病、特殊病种等情况，要求减少临床试验病例数或者免做临床试验的，应当在申请临床试验时提出，并经国家食品药品监督管理局审查批准。,指导原则和法规的关系,法律,指导原则,生物等效性研究,(,BioEquivalence,BE),等效性研究的方法学,临床治疗效果：直接证明两药的差异的可接受性,血药浓度测定：通过两药释放、吸收的差异的可接受性，推测临床治疗效果差异的可接受性,生物等效性研究：指,药学等效,制剂或可替换药物在相同试验条件下，服用相同剂量，其活性成分,吸收程度,和,速度,的差异无统计学意义,(,推测临床治疗效果差异的可接受性,),测定血药浓度方法学（生物利用度）,替代指标的应用应用条件？,BA,和,BE,的,关系,BE,：,求证,两产品,的生物等效性,(,例如受试者只选男性,),规格、剂型、批次,BA,：,不同的产品可各不相同,剂型的筛选,处方、工艺的评价,新剂型（新给药途径）给药剂量的估计,性别差异,(,受试者选择男女各半,),作用,新药研究阶段,:,比较改变新药处方、工艺后制剂是否能达到预期的生物利用度；确定处方和工艺合理性，,改变剂型，与原剂型比较来确定新剂型的给药剂量，也可通过,BE,研究来证实新剂型与原剂型是否等效,临床试验阶段：,寻找药物无效或者中毒的原因。例如验证同一药物的不同时期产品的一致性，包括早期和晚期的临床试验用药品，临床试验用药品（尤其是用于确定剂量的试验药）和拟上市药品等。,仿制药品，可通过,BE,研究来证明仿制产品与原创药是否生物等效，是否可与原创药替换使用。,上市后阶段：,处方、工艺的评价和生产控制：处方组成成分、比例以及工艺等出现一定程度的变更时，进行,BE,研究，以考察是否生物等效。以提高生物利用度为目的研发的新制剂，需要进行,BA,研究，了解变更前后生物利用度的变化。,三个等效的关系,Pharmaceutical equivalence(,含量，给药途径等,),Bioequivalence,Therapeutic equivalence,Noninferiorite,（非,劣效性研究）,生物等效性是为了替代临床试验。后者花费大，时间长，组织繁琐,从统计学上讲，半定量的临床数据的统计效率无法和药代的定量数据相比。所以，临床至少需要,120,对受试者，而等效性试验只需要,20,例受试者,药学等效,生物等效,临床等效,经济性,可靠性,药学等效,性药物,作用部位,吸收,分布,生物利用度,疗效,生物等效性,体循环,BioequivalenceTherapeutic equivalence,的,关系,疗效等效性,非劣效性,实验假设,生物利用度等效,临床等效疗效不良反应,其实有例外：,盐酸小檗碱口服后抑制肠道菌群的转化二糖成单糖的功能，导致血糖降低,胃肠道粘膜保护剂,:,枸橼酸铋钾,(,例外的例外,),生物利用度不能变大,此时生物利用度不是为了疗效，而是为了控制铋吸收后的不良反应,局部用药，只在局部发生作用，发挥疗效不经过血液循环系统,健康人等效,=,病人等效？单剂量等效,=,多剂量等效？,幽门螺旋杆菌,治疗有体外很好的效果，,HP,对于阿莫西林和克拉霉素敏感，但是临床实验表明并没有被完全彻底消灭，其中主要原因是药物在胃中停留的时间相当短，在胃粘液层和表层细胞处没有达到有效浓度！,阿莫西林属于时间依赖性抗生素。,时间依赖型抗生素,时间依赖型，药物浓度超过,MIC,的,45,倍以上杀菌活性不再增加，例如,-,内酰胺类、大环内酯类、克林霉素和万古霉素等,采用生物黏附剂技术后的阿莫西林微丸能有效在胃粘膜上黏附，,1mg/kg,时幽门螺旋杆菌消除率相当于,10mg/kg,普通制剂的消除率，而血药浓度和生物利用度前者远低于后者！,BA/BE,originally indicated the rate and amount of administered drug that reached the blood intact(available at site of action),now expanded to include active metabolites,Regulatory agencies have,not,established a,single set,of BE regulations(design,conduct,interpretation)that are universally acceptable,试验的目的,Determination of intra/,intersubject,variability,Bioequivalence of dosage form proposed for marketing,Dosage form proportionality study,Food effect study,Effect of changes in formulation or manufacturing process,Bioequivalence study required for the purpose of filing an ANDA,生物利用度试验流程,实验方案,伦理委员会,临床批件,建立体内,分析方法,给药,取样测定,浓度时间,数据,数据处理,BAPP,统计结论,生物利用度试验流程,受试者体检,知情同意书,知情同意书要点,全面告知,充分理解,自主选择,BA,和,BE,研究要点,确定试验目标,建立生物样本分析方法,设计试验方案,有效管理试验过程,分析试验数据,明确试验结论,试验过程的管理,GLP GCP,过程管理,人员管理,环境管理,医疗保障,方法学的建立与确证,方法学质控,标准曲线,质控样品,SOP,、,GCP,方法的可靠性,数据的可靠性,结论的可靠性,建立一个准确测定体内药物或代谢产物的分析方法,。生物样本与化学分析不同，这里涉及体内内源性化合物和药物体内代谢物的干扰，故分析方法考证是提供准确的生物利用度数据的基础。,2.,体内样品的特点,(1),血浆药物物浓度低,如血浆中药物浓度很低，通常是,g,级,ng,级,pg,级,fg,级，而每次取血量又有限，因此常规的化学分析方法是不适合的。,(2),干扰因素多,蛋白质，内源性化合物，代谢产物，无机盐。,(3),个体差异大,同一受试者服同一剂量的药物，两次服药后测出的血药浓度可能不一样，这主要是由于个体生理因素影响药物吸收,。检测线性范围大,(4),样本量大,几百上千个样本。,为什么是血浆,血浆、全血、血清、尿液等,反应药效是首要考虑因素,环孢素,A,，,K,+,等检测就不一样,微生物法检测的是血清,一个容易忽略的问题,检测的是血浆中总的药量,游离型药物,药物效应,药物,-,血浆蛋白结合,弱酸：白蛋白,弱碱：,酸性糖蛋白,药物的血浆蛋白结合率,-,个体差异,原因：不明确,后果：药效,，,，,ADRs,3.,基本要求及其考证,灵敏度,(Sensitivity),检测限,(LOD),定量限,(LOQ),精密度,(Precision),准确度,(Accuracy),特异性,(Specificity),选择性,样品的稳定性，冻融实验，,QC,样品,标准曲线线性范围,重现性,耐用性稳定性,灵敏度：检测限和定量,限,用,定量限,(Low Limit of,Quantitation,，,LLOQ),表示。,LLOQ,是标准曲线上的最低浓度，它是通过准确度，精密度和变异性求出的，一般用,ng,/ml,或,g/ml,表示。,要求,a.LLOQ,能检出,Cmax,的,1/10,1/20,浓度,b.,能测出,3,5,个生物半衰期的药物浓度,定量限的确定,规定,预期,精度的检测和定量限,制备空白加样的样品，,进样,5,次，,计算每个浓度,%RSD,精度对浓度作图,在预期精度的浓度,=,定量限,20%,检测限,LOD,Limit of Determination,S/N3,精密度,(Precision)(,重复性和重现性,),精密度用批间、批内变异系数（,RSD,）,来表示，,RSD,S/X100%,选在标准曲线范围内的高、中、低三个浓度进行试验，其中一个为,LOQ,或接近,LOQ,，,一个为中间浓度，另一个为标准曲线的上限附近。,每一浓度至少重复,5,次以上，连续,3,天,要求：,RSD15,，在,LOQ,附近可放宽到,20,。,高中低浓度,低浓度,also selective,色谱,分辨率,峰形,不同柱,不同条件,(temp.,mobile phase),不同检测器,光谱方法,(offline,on-line),如,:HPLC/CE,中的,DAD,介质效应,由于样品中存在的干扰物质，对影响造成的直接和间接影响,质谱检测，重点考察介质效应，防止离子淬灭效应,准确度,(Accuracy),测试结果和真值的一致程度,在真实浓度的,80120%,范围内，,RSD20,可用回收率表示。为保证方法学的准确性，要求在标准曲线范围内至少选高、中、低三个浓度，重复,5,次，回收率要大于,70,，达不到要求应说明原因。一般,RSD15%,在低浓度时,RSD20,。,标准曲线,a.,应覆盖整个待测样本的浓度范围，不得外推；,b.,应由,5,8,个浓度水平组成；,c.,不一定是直线，可以是二项式回归；尽量简单,c.,直线回归截矩不应明显偏离原点,d.,相关系数要求：色谱法大于,0.99,，生物法大于,0.98,；,标准曲线的,权重,宽范围直线回归，要权重回归，要么没有做实验，要么更改了数据,(,低浓度准确性要求,),！,稳定性（,stability,）,样品的稳定性试验,常温放置试验,冰箱冷冻放置试验,样品反复冻融试验,贮备液的稳定性试验,样品提取后流动相稳定性试验！,稳定的程度和标准依据试验要求,而定,重现性,分析方法相同的情况下，间隔一段短时间后测定结果的分散程度,不同实验室间测定结果的分散程度,耐用性（,durability,）,(SFDA,没有要求,),尽管有些分析方法在文献中已有阐述，但因仪器试剂以及操作条件不同，常常不能重复文献的方法，故任一新试验均应在自己的工作实验室内重新论证一下方法的可靠性。,这要求药代动力学实验室除需有训练有素的科研人员外，还应有较完善分析方法质量控制标准，并且实验室管理应符合,GLP,要求。,影响耐用性的因素,不同室温和湿度,不同经验的操作者,不同性能的仪器,试剂的不同供应商,不同批号的柱子,标准方法可以改变多少,-HPLC,pH of mobile phase:0.2units,Concentration of salts in buffer:10%,Ratio of components in mobile phase:for min or component 30%,rel,or 2%absolute whatever is larger,but max10%,Wave length of UV is detector:3nm,Column length:70%,Column inner diameter:50%,Particle size:can be reduce dup to 50%,Flow rate:50%,Column temperature:20DegC,标准样品,在生物介质中加入已知量的分析物配制的样品，用于建立标准曲线，计算质控样品和未知样品中分析的浓度,质控样品,即,QC,样品，在生物介质中加入已知量的分析物配制的样品，用于监测生物分析方法的重现性和评价每一分析批中未知样品分析结果的完整性和正确性,标准样品和质控样品必须分两次配制！最好不同人配制,4,、分析常用方法,(1),色谱法：,HPLC,，,GC,，,HPTLC,，,GC-MS,，,LC-MS,联用，,特点：分离和定量同步进行，特异性好，灵敏度高。,“没有必要的科研仪器与设备，就根本谈不上科学的发展。”,中科院自然科学史研究所研究员阎康年,科学文化评论上,色谱,/,质谱联用技术的相对适用范围,方法的建立,1,、借鉴别人的方法,查阅文献,J Chromatography B,荷兰,Rapid Communications in Mass Spectrometry,加拿大,J Pharmaceutical and biomedical Analysis,美国,Biomedical,chrogaography,（？）,药学学报 药物分析杂志 中国临床药理学杂志 中国药科大学学报 中国临床药理学与治疗学杂志,2,根据药物的化学结构,分子的极性，酸碱性，稳定性,优先考虑色谱,检测器,质谱 紫外 荧光 电化学,样品的稳定性,-20,大部分药物,-80,阿莫西林，阿司匹（,pH,）,等,加稳定剂：卡托普利等,立即测试：维生素,C,等,(2,个月可以做空白血浆，所以人体需要每天补充,),样品预处理,液液,提取,液固提取,沉淀蛋白,在线提取,色谱条件选择,色谱柱,流动相组成,pH,值和,缓冲盐,流速,内标选择,色谱行为接近,检测器响应相近,提取回收率相近,质谱条件,准分子离子,碱性化合物,(-NH,2,),(M+H),+,酸性化合物,(-CO,2,H,-OH),(M-H),-,各种条件和参数进一步优化,选择性、灵敏度、线性关系、重现性,实际样品的预试验,其他因素,血浆蛋白结合,生物样品测试的安全防护,(,艾滋病毒，乙肝病毒,-,手套,),挥干有机溶剂：苯禁用,(2),光谱法，同位素法，免疫学方法,同位素法虽然灵敏度高，但由于特异性较差，不作首选。采用该法应考虑：,a.,放射化学及化学纯度；,b.,标记物的稳定性；,c.,代谢产物的干扰。,可结合,HPLC,和,TLC,法联合应用。,免疫学方法如放免和酶免法，均可能存在药物代谢产物的交叉干扰，且试剂盒较难制备，所以不作首选。,环孢素,A,的检测采用,TDX(,偏振荧光免疫方法,),：,HPLC,和,TDX,差好几倍,(3),微生物学方法,(,抗生素,),原形,有活性,无活性,有活性,无活性,代谢物,分析方法的质量保证体系,标准曲线和,QC,分别配置，,QC,不,低于未知浓度的,5%,，且均匀分布在未知浓度检测全过程，最多允许,1/3,不同浓度的质控样品超限。,独立的质量保证人员,未知浓度样品的考核，一般同一受试者地样品在同一批内完成,建立一般性和,特殊性,的标准操作规程,包括测试原始图和数据，包括,QC,样品,质量检查报告,(,内部文件，虽然方法不完美,，,但不影响方法的通过,),实验药品的选择,受试样品,(1),体外释放度，稳定性和含量合格；,(2),安全性符合要求；,(3),必须有主管部门的批文；,(4),受试制剂应为中试放大产品，经稳定性检查合格，报送生产的同批制剂。,临床批件样稿,国家药品食品监督管理局下属药品注册司颁发原始编号，受理号，批件号两年内实验必须开始，否则批件失效,参比制剂,进行相对生物利用度研究时，首先应考虑选择国内已,上市,的相同剂型的市场,主导,制剂或被仿制的制剂作为标准参比制剂。只有在国内外没有相应制剂时，才考虑选用其它类型的不改变给药途径制剂为参比制剂。,(,好的处方特征,),FDA,参比制剂目录,:orange book,FDA,建议使用该报告中的药品进行等效评估,,www.fda.gov/cder/orange/default.htm,日本“薬品品質再評価”工程,1998,年起对已经上市的药物进行评价，出版再评价的药品目录（主要是难溶性药物，约,860,个）,主要手段是提高体外溶出标准，后期进行生物利用度试验比较,医療用医薬品品質情報集,：只有上榜药品才有资格作为参比制剂,日本厚生省医薬安全局審査管理課,受试者条件,（,1,）,性别：男性。,（,2,）,年龄,:,一般,18,40,周岁，同一批受试者年龄不宜相差,10,岁以上。,（,3,）,体重：正常受试者的体重一般不应低于,50kg,。,按体质指数,(Body Mass Index,BMI),体重（,kg,）,身高,2,（,m2,）,计算，一般应在标准体重范围内。同一批受试者体重（,kg,）,不宜悬殊过大。,（,4,）,受试者应经过全面体检，身体健康，无心、肝、肾、消化道、神经系统、精神异常及代谢异常等病史；体格检查示血压、心率、心电图、呼吸状况、肝、肾功能和血象无异常，避免药物体内过程受到疾病干扰。,（,5,）,为避免其他药物干扰，试验前两周内及试验期间禁服任何其他药物。,（,6,）,实验期间禁烟、酒及含咖啡因的饮料，或某些可能影响代谢的果汁等，以免干扰药物体内代谢。,（,7,）,受试者应无烟、酒嗜好。,（,8,）,精神状态：良好。,（,9,）,对本试验研究药物无过敏史者。,（,10,）,知情同意，志愿受试。获得知情同意书过程符合,GCP,规定。,比较药物制剂在人体内吸收速度和程度，受试者的选择应当尽量使个体间和体体内差异减到最小，降低试验的偶然变异，有助于突出制剂间的差异。,生理因素对药动学参数的影响,体重、年龄、肾功能对一级药动学参数的影响,体重对分布容积的影响公式,其中,P,为分配系数（脂溶性）；,p,为蛋白结合率；,BW,为体重,(,以,g,计算,),性别差异,治疗周期性偏头痛的药物,佐米曲普坦,在男性与女性之间服用,2.5mg,或,5mg,佐米曲普坦的药动力学参数有明显差异。女性的平均,Cmax,和,AUC,值比男性高。在,10mg,较高剂量时差异更显著：,6,个健康女性得数值（,25.2ug/L,和,173.8,ug/L.h,）,几乎是,6,位健康男性（,16ug/L,和,88.9,ug/L.h,）,的,2,倍。,H,1,受体拮抗剂地洛他定，普萘洛尔，苯二氮卓类药物，维拉帕米，阿斯匹林，对乙酰氨基酚，利多卡因，氨茶碱，利福平等均有性别差异的报道。,报道结果均为和男性相比，女性达峰浓度增加，,AUC,增加。,可能是女性对药物的消除能力低于男性。,遗传因素,代谢酶的多态性,口服酒石酸美多心安,200mg,弱异喹胍代谢者,(PM),浓度明显高于强异喹胍代谢者,(EM),代谢酶,CYP2D6,酶的,缺陷造成,PM,CYP2C9(,代表药物：美芬妥因，苯二氮卓类，奥美拉唑,),CYP2D6(,最多，代表药物：异喹胍，普萘洛尔，奋乃静、阿米替林、阿米夫胺，右美沙芬等,),CYP2E1(,毒理方面重要酶系，底物大多为致癌前体物和毒物前体物，药物包括氯唑沙宗，乙醇，对乙酰氨基酚,),CYP3A4(,阿普唑仑，西立伐他丁，环孢霉素，红霉素，三唑仑，硝苯地平,),病理因素对药动学参数的影响,疾病往往是引起药物不同效应的主要原因。对许多药物来说，造成药物效应的差异的主要原因是药动学参数的差异,肝脏疾病对药动学参数的影响,1,、肝硬化病人病情严重程度和氧化代谢酶和某些结合性酶活性的下降存在一定的相关关系，清除率下降。,2,、肝硬化，白蛋白的合成减少，使药物的白蛋白结合率下降，导致,分布容积,增加，导致低清除率药物消除增加。,3,、高抽提比的药物,(,肝脏代谢该药物能力强,),，肝硬化能导致生物利用度升高。,4,、阻塞型黄疸药物消除减慢，尤其以胆道排泄为主要消除途径的药物。,肾,功能不全对药动学参数的影响,肾功能减退病人的药物尿排泄通常会下降，下降程度取决于肾功能减退的程度。,清除率降低,特别是人工肾病,人,比较药物制剂在人体内吸收速度和程度，受试者的选择应当尽量使个体间差异减到最小，降低试验的偶然变异，有助于突出制剂间的差异。,伦理学要求和试验要求发生矛盾怎么办？,赫尔辛基宣言,DECLARATION OF HELSINKI,52nd WMA General Assembly,Edinburgh,Scotland,October 2000,Note of Clarification on Paragraph 29 added by the WMA General Assembly,Washington 2002,Note of Clarification on Paragraph 30 added by the WMA General Assembly,Tokyo 2004,2000,年赫尔辛基宣言相关要点,每一项涉及人体的生物医学研究，必须仔细评估对受试者可能预见到的,危险,性，并与可能预见的受试者和其他人的,受益,比较,后方可进行。,关注受试者的利益,，必须总是超过科学与社会的利益。,对涉及人体的试验，学术上的或社会的利益,绝不应该优先于受试者的健康,安慰剂的使用,(,抗生素不得使用安慰剂,),伦理要求和实验要求,基于伦理考虑，雌激素类的药物应选择健康女性受试者。,如待测药物存在已知的不良反应，例如抗肿瘤药物中的烷化剂，可能带来安全性担忧，也可考虑选择患者作为受试者。,有强烈的首剂效应的药物也应选择病人。首剂效应系指首剂药物引起强烈效应的现象。,氯氮平具有耐受性。慢慢加大剂量，病人能够承受其治疗剂量，但是首剂即给予治疗剂量，病人会发生严重的不良反应,。,FDA,建议病人治疗，一开始采用,25 mg,片剂的一半,12.5 mg,，,一天一次或两次，然后剂量每天增加,25-50 mg,，,如果耐受良好，,2,周后才可以采用治疗,300 to 400 mg,每天。如果病人,300 and 600 mg,每天依然有良好的耐受性，可以持续增加剂量到,600 and 900 mg,每天，以获得最优疗效。最大给药剂量不得超过,900 mg,每天。,在,1996,年的指导原则中，,FDA,建议氯氮平采用,25 mg,片剂的一半的剂量，以健康受试者为试验对象进行生物等效性实验。,however,the safety concerns associated with the use of,clozapine,in healthy subjects are significant,and it is recommended that this practice not be continued.2005,年初,FDA,对以前的指导原则进行了修订，规定,对涉及人体的试验，学术上的或社会的利益绝不应该优先于受试者的健康。,赫尔辛基宣言,，是由于在纳粹时代残忍地进行人体医学试验（如用俘虏做活体高空试验、冷冻试验和克隆人试验等）而促成诞生的，长期以来一直被看作是临床研究伦理道德规范的基石。最新的宣言中规定：每一项涉及人体的生物医学研究，必须仔细评估对受试者可能预见到的危险性，并与可能预见的受试者和其他人的受益比较后方可进行。关注受试者的利益，必须总是超过科学与社会的利益。,试验设计方案,双,交叉实验设计,(,最常用,),三交叉实验设计,(,食物影响等,),平行实验设计,(,长半衰期药物，特殊情况,),）,重复的交叉实验设计,双交叉实验设计,RANDOMIZ,A,T,I,ON,1824Subjects,Sequence 1,Sequence 2,PERIOD,Reference,Test,Test,Reference,I,II,WAS,H,OUT,randomized two-period,two-sequence,two-formulation,cross-over,design,平行实验设计,将受试者随机（注意体重，年龄均一性）等分成两组，一组先服用受试制剂，后服用标准参比制剂；另一组先服用标准参比制剂，后服用受试制剂。,即在同一受试者中于不同时期服用受试制剂和标准参比制剂,(crossover design),生物利用度和生物等效性研究的数据的特征是个体差异大，对每位受试者都连续接受两次或更多次的处理，相当于自身对照，可以将制剂因素对药物吸收的影响与其他因素区分开来，减少了不同试验周期和个体间差异对试验结果的影响。,洗脱期和后遗效应,两个周期至少要间隔药物,7-10,个半衰期，通常间隔离,1-2,周洗脱期,washing period,。,设定清洗期是为了消除两制剂的互相干扰，避免上个周期内的处理影响到随后一周期的处理中,:,后遗,(Carryover),效应,。清洗期一般不应短于,7,个消除半衰期。,后遗效应,清洗期不够长，第一轮服药在血液中的残留对第二轮产生干扰。存在不等性残留效应，第二轮数据就无效了,Advantage of cross over design,Variability advantage due to correlation between observations from the same individual,个体内变异,差异无显著性意义,等效,T0.8R(p0.05)&T1.2R (p,正态,体重,对数转换等效性检验,双单侧,t,检验,90%,置信区间,Possible BE Results(90%CI),T/R(%),80%,125%,t,检验和例数的关系,当两组,比较,t,检验例数相等，变异相等：,则例数,n,越多，,s,不变，,T,值越,大，,P,越小,临床观察,药物制剂的人体生物利用度研究和生物等效性评价属于临床研究范畴，因此人体实验必须在符合,GCP,要求的临床医院进行。,受试者于服药后至少在观察室中停留一段时间（长短取决于药物性质）,并临床医生的监护之下，随时观察和记录受试者的耐受性和药物不良反应发生情况。,一旦出现严重的不良反应,应采取相应的急救措施和治疗。,一个生物利用度报告的例子,报告的书写内容以及数据处理,实验目的，实验设计，分析方法的建立和确证，受试者资料，服药方案和采样时间安排，服药后的临床观测结果，生物样品处理程序，原始测定浓度的全部数据，数据统计分析，等效分析结果，结论和相应的讨论。,还有摘要，参考文献，实验单位和参加实验人员姓名,多剂量给药稳态生物利用度研究,研究的目的：,确定制剂多次给药达到稳态时的血药浓度波动程度,(,有没有超出临床要求范围,),在单次给药生物利用度研究的基础上进一步考察生物利用度,多剂量研究应用范围,(1),单剂量给药后，原药或代谢产物浓度很低，不能用相应的分析方法准确测量；,(2),内源性药物，单剂量给药，体内浓度的升高和服药前体内本底浓度相比提高有限，不能简单扣除本底。,(3),缓、控释制剂。,(4),非线性药物，浓度的升高和剂量不成比例，多次给药有蓄积倾向。,多剂量给药时间点的采血方案,参比制剂为普通制剂或者缓释制剂,连续服药必须达到稳态,(steady state,ss,),多次给药后体内药量有累积趋势，直至达到动态平衡,-,稳态水平,(,Css,),确定达到稳态的方式：最少连续测定三次以上的谷浓度，谷浓度有稳定趋势,取血时间点：基本参照一次给药时的采样时间点采样,其峰值,(,Cmax,),应低于中毒浓度,谷值,(,Cmin,),应高于有效浓度,才能产生安全可靠的持续药效。,Css,在设计多剂量给药方案中具有重要意义，其决定了长期用药时药效的高低及毒副作用的大小。,理论和公式回顾,一房室模型血管外途径多次给药,当给药次数,n,足够大时，,及,趋于零,平均坪值血药浓度,稳态水平分数,（KaK),达,峰时间,稳态,最大血,药,浓度,C,ss(max,),稳态最小血药浓度,C,ss(min,),DF=(,C,max,-C,min,)/C,av,=,(,C,max,-C,min,)*,/,AUC,ss,=(,C,max,-C,min,)*,/(F*X,0,/k/v),DF,只和,给药频率有关！,单次给药的药峰时间,重复给药的药峰时间,理论上多剂量达稳态时间和单剂量比有所提前,达稳态时间需要,4-5,个半衰期，达稳态后给药量等于消除量,(,平衡,),同一药物，,tid,和,sid,，,t,1/2,=10h,每天用药量恒定时，坪浓度的高低限之间的波动,(DF),与给药次数有关,稳态浓度特点,坪浓度,(,Css,),的高低与日用药总量成正比,峰浓度与每日用药量成正比,每天用药量恒定时，坪浓度的高低限之间的波动,(DF),与给药次数有关,增加给药剂量不能缩短达到稳态时间,理论上多剂量达稳态时间和单剂量比有所提前,达稳态时间需要,4-5,个半衰期，达稳态后给药量等于消除量,(,平衡,),一个实际的例子,二甲双胍缓释片和普通片的比较,(t,1/2,3h),单剂量给药,1000mg/,次,多剂量给药：普通片,500mg,一天二次,缓释片,1000mg,一天一次,单剂量给药和多剂量给药的比较,1000mg,1000mg,单剂量,多剂量,达稳过程的监测稳态后给药间隔的全程监测,至少三次谷浓度，趋于稳定，认为达到稳态,两种采血方案的争论,监测两次普通制剂，监测周期内药量相等,监测一次普通制剂，,监测周期内药量不相等,缓控释制剂和多剂量给药主要药代动力学参数,指导原则规定：,谷浓度、峰浓度数据和平均血药浓度 达峰浓度时间 稳态,AUC,ss,值，,DF,非,指导原则规定：,AUC,波动百分率；血药浓度维持时间；半峰浓度维持时间；治疗维持时间；延迟商,抗菌药物的特殊评价参数,时间依赖型,浓度依赖型,波动度,Degree of Fluctuation DF,DF=(,C,max,-C,min,)/C,av,C,av,=,AUC,ss,/,缺点：,C,ss,，,max,很难精确获得，或者当检测限高于,C,ss,，,min,，,C,ss,，,min,以,0,计算，所得的,DF,就不能真实反应药物浓度的波动情况,AUC,波动百分率,