实验一--显微镜的使用及细菌的观察.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,实验室规则,接触到病原菌，一定要坚持无菌操作,进实验室穿上白大衣，离开时反折,严禁饮食，也不要以手抚摸头、面等部位,若发生吸入菌液，割破手指等事故，必须报告老师,接触过菌液的吸管、玻片等器材，投入含有23%来苏儿的容器内,实验完毕，整理桌面,微生物实验要求,做实验后要认真完成实验报告，所得结果必须真实记录,浙江大学实验报告,课程名称：,实验类型：,实验项目名称：,学生姓名：,专业：,学号：,同组学生姓名：,指导老师：,实验地点：,实验日期：,年,月,日,实验目的和要求（必填）,实验内容和原理（必填）,主要仪器设备,操作方法与实验步骤,实验数据记录和处理,实验结果与分析（必填）,讨论、心得,实验一 显微镜的使用及细菌的观察,实验内容,操作：,油镜的使用,细菌材料玻片标本制备,革兰染色法,（,Gram Stain）,示教,细菌的基本形态,链球菌,螺形菌-弧菌（霍乱弧菌）,细菌的特殊结构,鞭毛（变形杆菌）,荚膜（肺炎链球菌）,芽胞（破伤风梭菌）,实验目的,掌握油镜的使用和保护,熟悉细菌的基本形态和特殊结构的镜下特点,掌握无菌操作,掌握革兰染色法,显微镜的使用和保护-原理,油镜与其他物镜的不同是载玻片与物镜之间不是隔一层空气，而是隔一层油质称为油浸系。这种油常选用香柏油,如果玻片与物镜之间的介质为空气，称为干燥系，当光线通过载玻片后，受折射发生散射现象，进入物镜的光线显然减少，这就降低了视野的照明度,香柏油的折射率n1.515，与玻璃n1.52相近。当光线通过载玻片后，可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射,油浸没物镜,介质：空气；香柏油,细菌材料玻片标本制备,涂片-干燥-固定,涂片：,先取一接种环生理盐水放于载玻片的一端，左手持菌液试管，右手持接种环，用接种环从试管培养液中挑取少许,大肠杆菌或葡萄球菌,培养物与盐水混匀，涂成直径约1厘米的涂片，涂片应薄而均匀。,干燥：,涂片最好放置室温中，待其自然干燥。,固定：,手执玻片的一端标本面向上，在火焰外层较快地来回通过三次，约23秒，以玻片反面触及皮肤，以不觉过分地烫为度。待放置冷却后，进行染色。,掌握无菌操作,拔或塞试管帽时，应将试管口通过火焰略加烧灼；,接种环使用前后应在火焰上烧灼灭菌,固定的目的,杀死微生物，固定其细胞结构,保证菌体能牢固地粘附在载玻片上，以免水洗时被水冲掉,改变菌体对染料的通透性，一般死细胞原生质容易着色。,革兰染色法,由丹麦C.Gram于1884年创立，是细菌学中很重要的鉴别染色法，通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰阳性菌（G+）和革兰阴性菌（G-）两大类,细菌细胞壁的结构,革兰染色法原理,G菌,胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易透入。同时乙醇使细胞壁脱水形成一道屏障，阻止结晶紫碘复合物从胞内渗出，故细菌仍保留初染时的,紫色。,G菌,胞壁结构较为疏松，肽聚糖层很薄，外膜含大量脂质，易被乙醇溶解，致使细胞壁通透性变大，使结晶紫-碘复合物被乙醇溶解析出而脱色，故细菌呈复染时的,红色,革兰染色方法,初染：滴加,结晶紫,染液,染1分钟,水洗.,媒染：滴加,卢戈氏碘液,作用1分钟后,水洗.,脱色：加,95%酒精,23滴于涂片上,频频摇晃35秒钟后,斜持玻片,使酒精流去;再滴加酒精,如此反复23次,直至流下的酒精无色或稍呈淡紫色时为止,约半分钟。水洗,复染：滴加,稀释石炭酸复红,染1/21分钟,水洗,待干,油镜检查.,（,紫碘,酒,红,、分分半半）,革兰染色结果-,阳紫,阴红,凡能固定结晶紫与碘的复合物,而不易被酒精脱色,仍保留紫色,称为,革兰阳性菌,.,凡易能被酒精脱色,再经复染成红色的细菌,称为,革兰阴性菌,阳球,阴杆,，脑、淋、白、胞、抗例外,仔细观察（染色性，形态，排列），绘图,革兰染色的意义,鉴别细菌：,鉴别G+,G-,初筛标本,选择用药,致病物质,大多 G+外毒素，G-内毒素,示教-细菌的基本形态,细菌从形态上分，主要有球菌、杆菌、螺形菌三种。,链球菌的示教片,霍乱弧菌的示教片,示教-,细菌的特殊结构,细菌的特殊结构：芽胞、荚膜、鞭毛，另一种菌毛在电镜下才可以见到。,芽胞增强细菌对不良环境的抗性；,荚膜抗吞噬、抗损伤、抗干燥；,鞭毛运动器官，单生、双生、丛生、周生。,仔细观察，绘图。,鞭毛（变形杆菌）,荚膜（肺炎链球菌）,芽胞（破伤风梭菌）,破伤风梭菌,鞭毛（变形杆菌）,思考题,为什么有些细菌为G+，而另一些为G-，影响革兰染色结果的因素有哪些？,