仪器分析实验薄层色谱4.6.ppt

单击此处编辑母版标题样式,2011年4月1日,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,色谱法用途与分类,薄层色谱法,薄层色谱基本原理,薄层色谱基本,特点,薄层色谱法的主要类型和,吸附色谱,原理,吸附薄层色谱的吸附剂,展开剂,的选择,比移值(Rf值),的求取,实验二,硅胶粘合薄层的活度测定,2011年4月1日,色谱法是,分离纯化,和,鉴定,有机物的重要方法之一,。,色谱法可分为,柱色谱、纸色谱、薄层色谱、气相色谱,及,高效液相色谱,等类型。,2011年4月1日,薄层色谱法,(thin layer chromatography,；,TLC),固定相（吸附剂或载体）涂布成一均匀薄层，点样，（密闭的容器中）展开，斑点显色，（与对照物质）比较进行定性定量。,2011年4月1日,薄层色谱基本原理,薄层色谱（,Thin Layer Chromatography,）常用,TLC,表示，它是将固定相均匀地涂在薄板（如玻璃板）上，,依靠毛细作用力或重力，使流动相通过固定相的一种色谱。,2011年4月1日,特点：,快，需十至几十分钟，同时展开多个试样。,试样预处理简单，对试样限制少。,载样量比较大，适用于制备。,仪器简单，操作方便。,分离能力较强。,灵敏度较高。,2011年4月1日,薄层色谱法的主要类型和吸附色谱原理,吸附薄层色谱法,原理：组分在薄层板上吸附、解吸附、再吸附、再解吸附的过程。,吸附系数不等实现分离。,一般极性强的组分,K,大，,R,f,（,比移值）,小；极性弱的组分,K,小，,R,f,值大。,分配薄层色谱法,吸附薄层色谱的吸附剂,吸附剂,硅胶,：,多孔性微粒，表面带有硅醇基，呈弱酸性。,原理：,硅醇基,(,吸附中心,),与,极性基团形成氢键（吸附性）。,组分与硅醇基形,成,氢键,（,被吸附）的能力不同而分离。,应用：,酸性和中性物质的分离，如有机酸酚类、醛类等,硅胶活度与含水量的关系：,含水量高，活性级,数,高，活度低。,活化：,加热至10,5,左右，除去吸附水提高活度。（注意温度不可过高）,2011年4月1日,吸附薄层色谱的,展开剂,(流动相),洗脱能力,极性强的溶剂洗脱能力强,常用溶剂的极性强弱顺序：,水酸吡啶甲醇乙醇正丙醇丙酮乙酸乙酯乙醚氯仿二氯甲烷甲苯,苯,三氯乙烷四氯化碳环己烷,石油醚。,吸附薄层色谱的,展开剂（混合剂）,先用单一溶剂展开，,若,R,f,值太小,，则加入一定量,极性强,的溶剂，（如乙醇、丙酮等），,如果,Rf值太大,，则加入适量,极性弱,的溶剂(如环己烷、石油醚等)，以降低极性。,定性参数,1,比移值,(,R,f,值,),溶质移动距离与流动相移动距离之比。,R,f,=,L,/,L,0,L,为原点（,origin,）至斑点中心的距离，,L,0,为原点至溶剂前沿（,solvent front,）的距离,与组分及色谱条件有关,实验二,硅胶粘合薄层的活度测定,一、,实验目的,1掌握粘合薄层的制备方法。,2了解粘合薄层活度测定方法。,二、,实验原理,硅胶粘合薄层活度的测定方法，目前一般都采用,Stahl,（斯塔尔）,活度测定法，以二甲黄、苏丹红G、靛酚蓝各40mg，溶于100ml挥发性溶剂中，滴加于薄层上，用,石油,醚,展开,10cm，应不移动，如改用苯展开则应分成三个斑点，其Rf值分别为：二甲黄0.58，苏丹红019,（？）,，靛酚蓝008,，,展开时间约为3040分钟，经本法测定合格的硅胶薄层其活度与柱色谱法所定活度的一级相当。,2011年4月1日,三、仪器及试剂,1,色谱缸,2,二甲黄、苏丹红、靛酚蓝,3,硅胶,(,色谱用,),、羧甲基纤维素钠。,2011年4月1日,四、操作步骤,1粘合薄层板的铺制：,称取羧甲基纤维素钠(CMCNa),075g，加入100m,l,水中加热使溶解，放冷，放置后,取14ml,再分次加入硅胶5g，调成糊状,后,倒在清洁的玻璃板上，可幌动或转动玻板，使其均匀流布于整块玻板上，而获得均匀的液层。将玻璃平放晾干，然后于110活化,40分钟,，置干燥器中贮存备用。,2011年4月1日,2点样：,取羧甲基维纤素硅胶板一块(7515cm)在距板一端lcm处，用铅笔轻轻划一直线作为起始线，在起始线中点用铅笔作一标记(o)，用内径约lmm的平口毛细管点加混合溶液，其直径应为23mm,。,2011年4月1日,3.,展开,将点好的样晾干或吹干后,将板置于盛有展开剂石油醚(沸点6090)的色谱缸中，,浸入深度为0.5cm,，,待展开剂前沿离起始线约10cm处，混合物应不移动，取出硅胶板，待石油醚挥发后，再按同法以苯为展开剂，展开时间约为3040分钟，取出薄层板立即划出前沿线，待苯挥散，观察斑点的位置，,2011年4月1日,4,计算比移值（R,f,）,：,干燥后记录原点至主斑点,中,心，和原点至展开剂前沿的距离。测量Rf值，判断其活度。,斑点中心至原点的距离,Rf,溶剂前沿至原点的距离,注意：,因为同一物质在相同的实验条件下才具有相同的Rf值，所以在测定时，采用标准物质进行对照。,2011年4月1日,五、注意事项,1活化后薄层板应贮于干燥器中，以免吸收湿气而降低活性。2点样量不宜太多，否则会拖尾分离不好。3展开剂苯中含水量的多少会影响Rf值，故须用于燥的苯和器皿。4展开剂不要加得过多，起始线切勿浸入展开剂中,2011年4月1日,六、,思考题,1.薄层色谱的铺板要领是什么？,2,涂层的均匀度对实验有何影响？,2011年4月1日,薄层色谱操作方法要求,制板,均匀,点样,集中,展开,(,多种方式,),预饱和,显色,2011年4月1日,五十年代中期，斯塔尔（,Stahl,）发展了一种新型的色谱分析技术,薄层色谱法。他在研究植物细胞组成的过程中，探索了高灵敏度的微量分离方法，详细地研究了以往的微量色谱技术，并将依斯迈洛夫提出的色谱方法中的仪器、吸附剂以及操作条件等标准化，使这一方法进一步发展成为一种新的色谱分析技术。斯塔尔称这种方法为“薄层色谱法”（简称,TLC,）。,2011年4月1日,展开剂,选择原则：,根据被分离物质的极性,Stahl,简图：极性物质,活度低（活性级大）的吸附剂,-,极性展开剂,2011年4月1日,