宫颈癌筛查与HPV检测.ppt

Click to add title,Click to add text,Second level,Third level,Fourth level,Title,Location,Date,*,Sample&Assay Technologies,For Internal Use Only,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Title,Location,Date,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Title,Location,Date,*,宫颈癌筛查与,HPV,检测,福州省立医院中心实验室,2,目录,宫颈癌筛查背景介绍,国外权威机构对于,HPV,检测用于宫颈癌筛查的推荐,选择合适的高危型,HPV,检测方法,世界范围内，宫颈癌是妇女第二大常见恶性肿瘤；在一些发展中国家，是妇女的头号死因；,世界范围内每年约有,46.6,万宫颈癌新发病例，亚洲,23.5,万占一半，中国估计有近,10,万新发病例，约占世界新发病例总数的,1/5,；,中国每年约有,3,万妇女死于宫颈癌；,我国中西部农村，由于缺乏资金和医疗技术,宫颈癌是妇女主要的卫生问题之一；,我国城市妇女由于缺乏有组织的筛查计划和医学知识也面临宫颈癌严重威胁；,*,乔友林教授,，中国医学科学院肿瘤研究所流行病学研究室主任,中国的宫颈癌防治事业依然任重而道远！,中国宫颈癌防治的机遇与挑战,1995,年：,IARC,专题讨论会：,HPV,感染是宫颈癌的主要病因。,WHO,宣布,HPV,是引起宫颈癌变的首要因素,1800,s,1960,s-80,s,1970,s-80,s,1980,s-90,s,1990,s-,与性行为相关,感染因子,(,单纯疱疹病毒,),提出,HPV,与宫颈癌发病有关的假设,克隆,HPV16,型、发现,HPV,的致病机理,HPV,被确认为子宫颈癌主要病因,楚尔,.,豪森,2008,诺贝尔生理奖获得者,宫颈癌的明确病因,持续性的高危型,HPV,感染,确,定,疾,病,疾,病,病,理,预,防,疾,病,子宫颈癌的预防史,组,织,细,胞,分,子,2003,年,1925,年,1942,年,1996,年,2001,年,2006,年,2012,年,一级预防,二级预防,三级预防,宫颈癌,阴道镜,PAP,LBC,TBS,HC2,care,HPV,Gardasil,HPV,Cervarix,疫苗,2005,年世界卫生组织,(WHO,),和世界癌症机构,(IARC,),：,-,目前有足够的证据表明，将高危型,HPV,检测作为初步筛查可以减,少,宫颈癌的发生率及死亡率。,早在,2005,年就已明确,HPV,检测用于宫颈癌筛查,7,目录,宫颈癌筛查背景检测,国外权威机构对于,HPV,检测用于宫颈癌筛查的推荐,选择合适的高危型,HPV,检测方法,8,国外权威机构对于,HPV,检测用于宫颈癌筛查的推荐,美国,ASCCP,指南,-,美国阴道镜宫颈癌病理协会,欧洲指南,-,欧洲下生殖道感染大会（,EUROGIN,）,WHO,指南,-,世界卫生组织,美国,ASCCP,指南更新历程,-HPV,检测（杂交捕获二代技术）推动,ASCCP,宫颈,癌筛查,指南的更新,2001,美国,ASCCP,指南推荐,采用,HPV DNA,检测用于,ASCUS,妇女的分流管理,2006,年,ASCCP,和,2009 ACOG,指南推荐,HPV DNA,检测,+,液基细胞学联合筛查,（,30,岁以上妇女）,2012/2013,年,ASCCP,发表指南将联合筛查间隔延长至,5,年,美国,NCI,组织的采用,杂交捕获二代技术,进行的著名,ALTS,研究，即,ASCUS/LISIL Triage Study,研究数据发表,来自欧洲,7,项,研究荟萃分析和长达,6,年随访数据显示：联合筛查（,杂交捕获二代技术,）与单独采用细胞学筛查的,CIN,的累积发病风险对比结果,美国,Kaiser,医学中心采用,杂交捕获二代技术,对近,100,万,妇女长达,9,年,的筛查随访研究数据结果,美国,ASCCP,指南对于,HPV,检测用于宫颈癌筛查的推荐,2012,年,ASCCP,、,ACS,、,ASCP,共同发布宫颈癌筛查新指南,，将联合筛查双阴性筛查间隔年限，延长至,5,年,ASCCP,联合,全球,25,家权威机构,，,成立,6,个小组共同回顾分析,1995-2011,年间,1,万多篇文献，并专门筛选了,399,篇文献用来分析评估分子检测在筛查中的应用。结论推荐中明确指出：,杂交捕获二代技术（,HC2 HPV,检测,）,是目前全球大规模筛查中应用最为广泛有效的方法，任何,HPV,检测方法（包括,HPV,分型）与,杂交捕获二代技术,相比，其临床性能目前并不明确，有待进一步的研究验证。,2012ASCCP supporting information,ASCCP,指南对于,HPV,检测方法的推荐,M Origoni,et,al.,HPV-DNA testing for cervical cancer precursors:from evidence to clinical practice.,e,cancer 2012,6:258,2012,年欧洲宫颈癌筛查指南推荐,2012,年欧洲指南推荐,高危型,HPV,检测用于宫颈癌初筛,杂交捕获二代技术,被欧洲专家和指南认可是宫颈癌初筛一线首选,欧洲筛查指南：,HPV,检测方法的评估,HPV,检测被,欧洲指南作为,30,岁以上女性宫颈癌初筛的首选，,并推荐了,HPV,检测技术的评估标准,待验,证,HPV,检测的临床灵敏度,CIN2,，,必须,达到杂交捕获二代技术（,HC2,）的,90%,以上,（,30,岁以上妇女），宫颈采样标本要与基于人群的研究，使用,HC2,检测，可以或不联合细胞学,检测。,待验证,HPV,检测的临床特异度,CIN2,，必须,达到,杂交捕获二代技术（,HC2,）的,98%,以上,（,30,岁以上妇女,）。,Guidelines for human papillomavirus DNA test requirements for primary cervical cancer screening in women30 years or older”by Meijers et al.,(2009),2015,年欧洲,EUROGIN,宫颈癌筛查指南推荐,将常见的,HPV,检测技术分为两类：二代杂交捕获法,HC2,及所有,PCR,方法,进行人群为基础的临床实验（其中,CIN2+60,例），重复率大于,87%,所有,HPV,检测技术，性能不低于金标准,杂交捕获二代技术的临床性能的,95%,，方可用于宫颈癌的初筛,2015.2 EUROGIN Meeting,2015,年欧洲,EUROGIN,大会推荐,HPV,检测用于宫颈癌初筛,2015,年欧洲,EUROGIN,大会确定了,HPV,检测,的技术标准,来保证初筛的效果,WHO,指南,对于,HPV,检测用于宫颈癌筛查的,推荐,14,15,WHO guidelines for screening and treatment of precancerous lesions for cervical cancer prevention.World Health Organization 2013,2013,年,WHO,推荐的三种筛查方法：,HPV,检测，细胞学检查，,VIA,检查。,首推高危型,HPV,作为宫颈癌初筛首选方法,推荐高危型,HPV,检测,cut-off,值,1.0 pg/ml,这是杂交捕获二代技术（,HC2,),所特有的判断标准,WHO,指南对于,HPV,检测用于宫颈癌筛查的推荐,16,目录,宫颈癌筛查背景检测,国外权威机构对于,HPV,检测用于宫颈癌筛查的推荐,选择合适的高危型,HPV,检测方法,目前中国,HPV,检测行业现状,截至,2014,年底，共有,27,个厂家超过,60,种,HPV,检测产品,技术种类繁多,进口,/,国产,FDA/CE/CFDA,杂交捕获法,/,膜杂交法,/,荧光定量,PCR,法,临床医生的困惑,那些方法准确性高？,那些结果有临床意义？,18,CvCx Cases/100,000,0,5,10,15,20,25,15-19,20-24,25-29,30-34,35-39,40-44,45-49,50-54,55-59,60-64,65,Age(years),HPV Prevalence(%),0,2,4,6,8,10,12,14,16,18,20,HPV,Cervical Cancer,Sources:NCI SEER Data,1990-94;Melkert et al.,1993.Int J Canc 53:919.,HPV,感染和宫颈癌的发生率,感染,HPV,病毒不代表患宫颈癌,设定检测阈值非常重要,19,还没有发生细胞学改变的患者，病毒感染量较低就不会进展为,CIN,病变，病毒感染量较高则有发生,CIN,病变的风险；,已经发生细胞学改变的患者，病毒感染量较低则转归的几率较高，病毒感染量较高则进展的几率较高；,CIN,病变,进展为高级病变,无,CIN,病变,CIN,转归,WHO guidelines for screening and treatment of precancerous lesions for cervical cancer prevention.World Health Organization 2013,WHO,宫颈,癌,筛查指南推荐,HPV,检测阳性,判断,值,1.0pg/ml,当,Cutoff,值在,1.0pg/ml,时，无论是自体采样还是医生直接采样，临床性能都是最优的,HC2,设定临床阳性判断值即：,cut off1.0pg/ml,，相当于病毒载量为,5000,拷贝,/,检测,J.L.BELINSON*,Y.L.QIAO,et al Shanxi Province cervical cancer screening study II:Self-sampling for high-risk human papillomavirus compared to direct sampling for human papillomavirus and liquid based cervical cytology.,Int J Gynecol Cancer 2003,13,819826,为何,WHO,宫颈,癌,筛查指南推荐此阳性判断标准,-,准确性好,该临床阳性判断值多次重复试验一致性、临床敏感性最佳,10000,0.1,1,10,100,1000,0.1,1,10,100,1000,RLU/PC(Observed),Panel A,Panel B,RLU/PC(Expected),为何,WHO,宫颈,癌,筛查指南推荐此阳性判断标准,-,重复性好,各,HPV,检测结果判断阈值,23,HPV,检测,检测技术,分析敏感度,Cobas4800,实时定量,PCR,80-2400,拷贝,Cervista,酶切信号放大,625-1250,拷贝,Abbott Molecular,实时定量,PCR,500-5000,拷贝,HC2,或,careHPV,杂交捕获,5000,拷贝,亚能,PCR+,斑点杂交,3000,拷贝,凯普,PCR+,斑点杂交,3000,拷贝,几种,HPV,检测的探针设计,HC2 HPV,检测,“全长鸡尾酒”探针技术,Cobas HPV&Abbott HPV(12+2 Real-time PCR),“寡核苷酸探针”技术,8000bp,，基于全长，涵盖,HPV DNA,所有区域,14,种不同型别探针混合,准确，不漏诊,约,200bp,，仅基于,L1,片断，,非全长,仅,3,种探针混合,病毒基因缺失、突变会造成漏诊,约,100-150bp,，仅基于,L1,片断，,非全长,仅,1,种通用探针,病毒基因缺失、突变会造成漏诊,其他国产,PCR,方法,“寡核苷酸探针”技术,HPV16,HPV18,HPV31,HPV33,HPV35,HPV39,HPV45,HPV51,HPV52,HPV56,HPV58,HPV59,HPV68,HPV66,HPV,病毒基因组为环状双链,DNA,，含有,8000,个碱基对。,HPV 16,HPV 18,12,种,HR,通用探针,1,3,种,HR,通用探针,“由于,L1,开放编码框架在整合过程中发生缺失，使用,L1,引物会导致,23%,的假阴性结果,”,Capone et al,Clin Cancer Research 2000,6:4171-4175,“使用共同的,L1,引物，扩增后结果显示，在,56,份样本中有,23,例的,L1,片段缺失,”,Karlsen et al,JCM 1996,34(9):2095-2100(Invasive cervical carcinoma population),“在,PCR,检测系统中，应该使用多种共同引物和型别特异性引物,”,Karlsen et al,JCM 1996,34(9):2095-2100(Invasive cervical carcinoma population),恶性进展和与宿主细胞,DNA,整合时，可以造成病毒基因,L1,片段的大量缺失,HPV,病毒基因,L1,片段缺失导致漏诊,全基因组探针,(HC2 HPV),L1,基因段探针,(PCR HPV),CIN 3,癌症,(L1,基因段缺失,),检测到阳性结果,HPV DNA,检测探针,假阴性结果,检测到阳性结果,检测到阳性结果,HC2,全长基因探针,V.S PCR,方法,L1,寡核苷酸探针,L1,片段丢失导致的假阴性,总结,HPV,检测应用于宫颈癌初筛是未来的必然趋势,HPV,检测用于筛查最重要的是找出风险人群，而非单纯的检测病毒,选择合适的,HPV,检测方法，首先注重的应该是准确性，而保证准确性的关键就是判断标准的设定,谢谢！,