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葫芦素葫芦素B B通过抑制通过抑制NF-KBNF-KB信号通路诱信号通路诱导导RamosRamos细胞外源性凋亡细胞外源性凋亡 (CucurbitacinB induces Ramos cell exogenous apoptosis through inhibiting NF-KB signal pathway)姓名：丁秀丽导师：吴雄志单位：天津医科大学附属肿瘤医院主要内容主要内容研究背景研究背景1研究思路研究思路2研究内容研究内容3研究流程研究流程4创新性与可行性创新性与可行性5研究背景研究背景葫芦素是从葫芦科植物中提取的一类四环葫芦素是从葫芦科植物中提取的一类四环三萜类化合物，其强大的抗肿瘤作用尤其三萜类化合物，其强大的抗肿瘤作用尤其令人瞩目，有望成为一种新的有效的抗肿令人瞩目，有望成为一种新的有效的抗肿瘤药物。瘤药物。Jian Chao Chen et al.,Cucurbitacins and cucurbitane glycosides:structures and biological activities,Nat.Prod.Rep,2005,2005,386 396葫芦素发现于葫芦素发现于1960s1960s，因具有广泛的抗肿瘤活性，因具有广泛的抗肿瘤活性而备受关注，但由于其较窄的治疗指数和非特异而备受关注，但由于其较窄的治疗指数和非特异的毒副作用，其研究在随后的几十年里被停滞。的毒副作用，其研究在随后的几十年里被停滞。随后，基于美国随后，基于美国NCI60NCI60抗肿瘤筛选平台的建立，抗肿瘤筛选平台的建立，葫芦素又重新吸引了研究者的目光。它的抗肿瘤葫芦素又重新吸引了研究者的目光。它的抗肿瘤活性几乎可以与紫杉类，长春新碱和鬼臼素类等活性几乎可以与紫杉类，长春新碱和鬼臼素类等植物来源的抗肿瘤药物相睥睨，是一种极具前景植物来源的抗肿瘤药物相睥睨，是一种极具前景的新型抗肿瘤药。的新型抗肿瘤药。Dhong Hyun Lee et al.,Cucurbitacin:Ancient Compound SheddingNew Light on Cancer Treatment,TheScientificWorldJOURNAL(2010)10,413418葫芦素的抗肿瘤活性葫芦素的抗肿瘤活性葫芦素的抗肿瘤活性葫芦素的抗肿瘤活性葫芦素B乳腺癌乳腺癌肺癌肺癌白血病，淋巴瘤白血病，淋巴瘤。结直肠癌结直肠癌前列腺癌前列腺癌喉癌喉癌脑胶质瘤脑胶质瘤骨肉瘤骨肉瘤相关机制相关机制Xiuping Chen et al.,Biological activities and potential molecular targets of cucurbitacins:a focus on cancer,Anti-Cancer Drugs 2012,23:777787研究思路研究思路 研究证实CuB能够通过调节STAT3,NF-KB信号通路及其下游信号分子Bcl-2,Bcl-xl,Bax,mcl-l等诱导细胞发生内源性凋亡。但有关CuB对淋巴瘤细胞外源性凋亡通路影响的研究尚未见报道。葫芦素葫芦素B 本研究通过观察CuB作用后人淋巴瘤Ramos细胞形态、增殖、凋亡、周期、外源性凋亡相关分子的变化情况，探讨其对 Ramos细胞外源性凋亡的影响及其可能的作用机制。理论依据理论依据1我们研究发现葫芦素B对Burkitt淋巴瘤Ramos细胞有明显的凋亡诱导作用。2通过初步实验证实其能上调NF-KB的抑制蛋白IkBa的蛋白表达。3我们又通过western blot实验检测，发现其主要影响外源性凋亡蛋白caspase8。通过查阅文献通过查阅文献caspase8c-FLIPNF-KB葫芦素能够抑制泛素蛋白酶体系统对IkBa的降解，从而抑制NF-KB信号通路。NF-KB又恰好能上调外源性凋亡调控分子c-FLIP的表达。c-FLIP是目前发现的唯一在DISC水平参与调节受体调亡通路的分子，它能抑制caspase8 的激活，从而抑制外源性凋亡。由此将由此将NF-KB与外源性凋亡联系起来与外源性凋亡联系起来Ning Ding et al.,Apoptosis Induction Through Proteasome Inhibitory Activity of Cucurbitacin D in Human T-Cell Leukemia,Cancer2011;117:273546Wang Q et al.PKC delta-mediated regulation of FLIP expression in human colon cancer cells.Int J Cancer,2006Jan 15;118(2):326-34.Ma H M,Zhou K Y,Progress in Biochemistry and Biophysics,2006,33(10):932939信号通路如下：信号通路如下：-a研究内容研究内容细胞学实验细胞学实验分子生物学实验分子生物学实验 动物实验动物实验 1.CuB对对Ramos的的增殖抑制作用增殖抑制作用。2.CuB对对Ramos的的凋亡诱导作用凋亡诱导作用。3.CuB对对Ramos的的细胞周期阻滞作用细胞周期阻滞作用。Text裸鼠移植移植瘤裸鼠移植移植瘤 免疫组化免疫组化 4.CuB对对IkBa，p-IkBa的蛋白表达的影的蛋白表达的影响。响。5.CuB对对c-FLIP蛋白蛋白表达的影响。表达的影响。6.CuB对对caspase8凋亡酶活性的影响。凋亡酶活性的影响。7.CuB对对P65mRNA片段片段,c-flip的转录水的转录水平影响。平影响。研究流程研究流程Western检测IkBa,NF-KB,c-FLIP 蛋白表达 RT-PCR检测p65C-flip,mRNA转录 Western检测caspas 8 蛋白含量变化Hochest染色检测细胞凋亡 流式细胞术检测细胞凋亡CuB通过抑制通过抑制NF-KB信号通路信号通路诱导诱导Ramos细胞外源性凋亡细胞外源性凋亡细胞学实验分子生物学实验 台盼蓝染色测增殖 流式细胞术检测细胞周期动物实验裸鼠淋巴瘤移植瘤模型建立免疫组化检测NF-KB,C-FLIP水平创新性创新性从从NF-KBNF-KB信号通路阐明了信号通路阐明了CuBCuB诱导凋亡诱导凋亡是通过外源性凋亡通路，与是通过外源性凋亡通路，与c-FLIPc-FLIP下下调有关。调有关。第一次通过裸鼠移植瘤模型研究第一次通过裸鼠移植瘤模型研究CuB对对Burkitt淋巴瘤的体内抑瘤作用。淋巴瘤的体内抑瘤作用。为为CuB早日开发成抗肿瘤药物进入临早日开发成抗肿瘤药物进入临床应用积累经验。床应用积累经验。祝各位老师工作顺利！祝各位老师工作顺利！