大肠癌早期诊断技术.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,博尔诚（北京）科技有限公司,BioChain,(Beijing)Science&Technology Inc.,Feb 28,2013,Septin9,基因甲基化结直肠癌早期诊断,早发现,早期发现大肠癌,无创伤,无恐惧感无风险,高灵敏,与肠镜符合率,95.6%,易采样,仅需抽取静脉血,已经获得了,国际专利,；,获得了欧盟,CE,认证,；,即将取得美国,FDA,认证,，完成了近万例临床试验。,美国和欧洲的著名临床检测中心已列为常规检测项目，至今已检测几十万例。,美国和欧洲已将此检测列入医疗保险。,国内正在进行,SFDA,申报的临床实验。,参与国内重大课题,“,五癌,”,筛查国家项目，并已经启动。,Epi,公司,Septin9,基因甲基化进行结直肠癌早期诊断的国际认证,1,结直肠癌背景介绍,3,大肠简介,大肠是消化系统的最后一部分，是一个长约,1.5,米的较粗的管状器官。大肠由两个主要部分组成：结肠和直肠。它们在腹部弯曲病形成一个围绕着小肠的长方形。,4,世界范围内结直肠癌发病率与死亡率高,癌症是世界严重的公共卫生问题，,每年全球约,800,万人死于癌症，其中结直肠癌是人类最常见的消化道恶性肿瘤，发病率位居全球恶性肿瘤第三位，,随着人口趋向老龄化，生活水平日益提高，饮食结构发生改变等因素的影响，在西方发达国家，结直肠癌已成为仅次于肺癌的第二大恶性肿瘤。,结直肠癌是肿瘤中第二大杀手，每年在美国有,140,000,新发病例，以及每年导致,50,000,人死亡；,在发达国家中，北美和欧洲发病率最高，每,10,万人中就有,15-20,人死于结直肠癌；,中国结直肠癌发病率与死亡率呈急剧上升趋势,近十年发病率逐年攀升,每年新发约,40,万人,每年死亡约,19.5,万人,每年增速约为,4.2%,，远超,2%,的国际平均水平,已从第六位跃为第三位,在上海是第二位，仅次于肺癌,2,1 2012,中国肿瘤登记年报,2 2013,年第九届上海国际大肠癌高峰论坛报道,结直肠癌早期筛查可以拯救生命,病人,5,年生存率,早期筛查,73%,不做早期筛查,46%,结直肠癌患者在诊断时，,80%,为中晚期，早期诊断的比例仅为,11.8%,。,有效的早期筛查和干预治疗可使癌的发生率下降,60%,，病死率下降,80%,筛查可提高结直肠癌,5,年生存率,Epigenomics,AG Corporate Presentation 2013.1,中山大学附属第一医院监测数据,北京大学肿瘤医院，上海市疾控中心,李世荣,大肠癌早期诊断的基本策略,.,继续医学教育,2007.,21,(9):p.22-25,目前中国结直肠癌检测主要有两种方法：,便潜血检测,(,FOBT,),和粪便免疫化学法（,FIT,）：主要针对消化道出血；粪便样本，采样不方便；,假阳性率高，结果稳定性差,；受检率,3%,结肠镜检查,:,虽然是检测金标准，但患者对检查有恐惧感，存在肠道出血及感染等风险，依从性差；左右半肠结果差异明显。受检率,5%,现有方法受检率低，急需更易于患者接受的早期检测方法。,结直肠癌的方法和面临的主要问题,便潜血（,FOBT),检测,结肠镜检查,患者的需求？,早发现,能够早期发现大肠癌,无创伤,没有恐惧感，没有风险,高灵敏,检出率高,易采样,不脏，不烦，不痛,我们提供的方法：,采,10ml,血样,95.6%,与肠镜吻合,可检测到,I,期结肠癌,当日拿到检测结果,2,Septin9,基因检测项目介绍,10,SEPTIN9,基因检测,-,德国原装进口,11,灵敏,PCR,DNA,提取和转化,对照组,荧光定量,PCR,技术,包括,oligos,聚合酶、和专利的缓冲液,对照是基于博尔诚,提供的细胞系,基于磁珠提取及专利的亚硫酸盐转化技术,用于结直肠癌的早期筛查,Septin9,基因检测,-,试剂盒组成,12,SEPTIN9,的生物学功能,人类,SEPTIN(SEPT),蛋白家族成员,-13,个,在,Septin,蛋白家族中，,Septin9,蛋白最明显的,特征：,长延伸的,N,端可变区,非极性的脯氨酸富集区,缺少,C,端螺旋区,Septin,蛋白复合物的形成,Septin9,独特的结构特征决定了其在复合物中的位置,缺少,C,端螺旋区的,Septin9,蛋白,，使其位于在八聚体复合中末端。,暴露的,Septin9,N,端可变区影响复合物的整体功能。,保守的,Septin9,N,端的脯氨酸富集区决定了复合物的非极性末端。,哺乳动物的,Septin,蛋白家族形成非极性、,棒状八聚体的复合物,（,SEPT9-SEPT7,SEPT6,SEPT2,SEPT2,SEPT6,SEPT7-SEPT9),。,SEPTIN,蛋白复合物在细胞分裂期的作用,Septin,蛋白复合物参与细胞分裂的功能：,Cytoskeletal,scaffold,（细胞骨架的支架），平行于肌动蛋白应力纤维（,Actin,filament,），为参与肌球蛋白,II,（,Myosin II,）活性的分子提供附着点，参与,Rho,信号通路，涉及细胞类型和功能变化。,Diffusion barrier,（膜蛋白扩散障碍），束缚跨膜蛋白和胞内膜蛋白的无序扩散。肿瘤细胞具有很高的膜动力学特征。,若,Septin9,蛋白,失调，,Septin,蛋白复合物结构失去稳定，从而扰乱细胞分裂过程，导致细胞朝癌变发展,甲基化,5,甲基胞嘧啶,基因启动子区甲基化,效应：基因表达下降或失活，蛋白水平下降,甲基化是肿瘤发生的早期事件,Epigenetic changes resulting in transcriptional silencing of cancer genes are among the most frequently discovered evens in human tumor samples and altered,chromain,structure in 5-regulatory region.,Hypermethylation,of gene promoter associated,CpG,islands occurs early during colorectal cancer development,suggesting its utility as a molecular marker for both early detection and monitoring progression of the disease,.,-,Glockner,S.C.,et al.,Cancer Research,2009,69:4691-9,在基因启动子区域,CpG,岛区域发生的甲基化事件，通常发生在结直肠癌的早期，因此,可以把甲基化作为结直肠癌早期诊断和监测疾病进展的分子标记物,。,Septin9,基因启动子,gamma,区域的甲基化导致该基因的表达发生改变,发生甲基化的,septin9,基因从肿瘤细胞中脱落，进入血管,血液,游离甲基化片段和肿瘤细胞,结直肠癌的癌变与,septin9,基因甲基化,游离,DNA,血红细胞,肿瘤细胞,德国,EpiGenomics,公司专利的外周血游离,DNA,甲基化检测技术提高了微量甲基化,DNA,检测的灵敏度,Blocker,引物屏蔽非甲基化的,DNA,，避免其与探针结合。,特异水解探针的应用提高了血液中甲基化基因的检出率。,德国,Epigenomics,公司在世界不同国家，包括中国都申请了该技术的专利,游离的肿瘤细胞,DNA,大肠,血管,Septin 9,基因的甲基化在肿瘤中特异发生,SEPTIN9,基因甲基化结直肠癌的检测原理,外周血采样,甲基化基因检测,荧光定量,PCR,法,自动化结果判读,肿瘤细胞,正常细胞,CE,数据,2011.9,德国埃尔兰根大学医学院,提交,FDA,关键临床数据,FDA,补充实验,2012.12,病例对照,ARUP,实验室,肿瘤病理分期,pT1,pT4,pT1,pT4,pT0/Tis,pT4,pT0/Tis,pT4,病例数,247,184,7,940,300,144,敏感性,80.6%,1,79.3%,68%,1,71%,1,90%,2,特异性,99.3%,1,99,%,80%,1,86%,1,88%,2,注：,CE,要求是,I,期,期肿瘤病人。,FDA,要求腺瘤，原位癌和,I,期,期肿瘤病人。,1),Epigenomics,AG Corporate Presentation 2013.1,2)Case control study results with,ARUPs,LDT test published,Nov 16,2011,Septin9,基因检测,-,具有高灵敏和高特异,24,国内临床验证实验显示,SEPTIN9,检测针对中国人群同样具有高灵敏性和特异性,总数,灵敏性,特异性,结直肠癌组,47,85.1%,（,4047),健康正常组,36,100%,（,3636,）,检测样本总数,83,例，包括,47,例结直肠癌和,36,例健康对照,结果：灵敏性,85.1%,，特异性,100%,SEPTIN9,检测可检出大部分早期大肠癌,Warren,J.D.,et al.,Septin,9,methylated,DNA is a sensitive and specific blood test for colorectal cancer.,BMC Med,2011.,9,:p.133.,SEPTIN9,检测结肠左右侧无差异,左侧肿瘤,右侧肿瘤,Septin9,检测,96.4%,94.4%,便潜血检测,83.3%,50.0%,Grutzmann,R.,et al.,Sensitive detection of colorectal cancer in peripheral blood by,septin,9 DNA,methylation,assay.,PLoS,One,2008.,3,(11):p.e3759.,注：,FIT,国内不常用。,这组数据结果是,Epigenomics,在美国采用目前最先进灵敏度最高的试剂盒（日本产），受检者连续三天取便样，检测,3,次大便标本。,1)Chin J,Gastroenterol,，,2001,，,Vo|6,，,No 4 244-251,2)Case control study results with,Epi,proColon,2.0 final product published Sep 19,2011,3)Case control study results with,ARUPs,LDT test published Nov 16,2011,方法,灵敏性,特异性,Septin9,2,3,80.6%,99.3%,愈刨木酯法,gFOBT,1,便潜血试验,45.8%,78.9%,免疫法,iFOBT,1,便潜血试验,52.9%,86.1%,免疫化学法,FIT,(,美国数据）,便潜血（,3,次便样）,2,3,68.2%,70.6%,癌胚抗原,CEA,2,、,3,51.8%,85.3%,Septin9,基因检测,-,方法对比,28,SEPTIN9,结直肠癌检测适用于哪些人群,1,）一般风险人群：大于,40,岁人群,2,）高风险人群：,结直肠癌家族史和家族性腺瘤性息肉病,大于,20,岁人群。,炎症性肠病多年不愈、病变范围较广的溃疡性结肠炎,化放疗治疗效果评估，术后检测。,建议上述人群，每年进行一次结直肠癌早期筛查。,The Best Screening Test Is the Screening Test That Gets Done,.,最好的筛查项目是容易操作的项目,-Sidney,Winawer,MD,Chief of Gastroenterology at Memorial Sloan Kettering Cancer Center ASCO 2001,The Best Test Is the Test the Patients Can Get and Will Take,.,最好的检测是病人能够做并愿意做的检测,-,Durado,Brooks,American Cancer Society,Fast,Dx,配有,SDS 1.4,软件带有,21 CFR part 11,Roche,LightCycler,480 Instrument I,Software Version 1.5,Roche,LightCycler,480 Instrument II,Software Version 1.5,Applied,Biosystems,7500 Fast,配有,SDS 1.4,软件,SEPTIN9,结直肠癌早期筛查,早发现、无创伤、高灵敏、易采样,世界上独一无二的甲基化基因外周血检测方法,检测报告说明,检测说明,1,）临床研究已证实血浆中检测到,Septin9,基因发生甲基化与患结直肠癌存在密切相关。,2,）检测结果为,阳性,是指存在患结直肠癌高风险。,接受结肠镜检查，以确诊是否患有结直肠癌。,接受我们的随访，进一步诊疗后请填写随访信。,3,）检测结果为,阴性,，说明没有检测到,Septin9,基因发生甲基化。,无消化道不适症状者一年进行一次抽血复查检测。,有消化道不适症状者,1,3,月后抽血复查此项检测。,34,一、门诊挂号,二、就诊,确认结直肠癌筛查试用人群,四、抽血,1,、交费,2,、门诊治疗室抽血（,10ml,）,三、检查,体格等常规检查,问诊以确定临床信息,五、登记,1,、资料扫描存档,2,、签署知情同意书,六、送标本,将静脉血、受检者临床,信息送至博尔诚医学检验所,七、,Septin9,甲基化检测,八、发送报告,邮寄、,E-mail,、传真等,九、结果解读,收到报告后医生进行结果解读,Septin9,基因检测,-,就诊流程,35,一、体检中心,36,文献发表,37,文献发表,SCI,统计数据,谢谢！,