微生物分离培养.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,Mixed culture,Separation of single cultures,Pure culture,研 究 思 路,Cell Cycle Inhibition,Apoptosis,Necrosis,P388.K562 Cells,bioactive microbe,Dereplication,第,1,页,/,共,17,页,Cultivation Optimization,Active Axtract,CC,PTLC,PHPLC,Sephadex LH20,IR,UV,MS,NMR,CD,ORD,X-Ray,Bioactivity Reassay,Evaluation of,anticancer activities,From Microbe Host,to Structure,第,2,页,/,共,17,页,微生物分离筛选路线,样品,稀释,平板涂布,平板划线纯化,斜面保藏,预处理,选择性培养基,第,3,页,/,共,17,页,初筛（,5ml,液体试管培养）,复筛（,100ml,三角瓶培养）,菌株照相（菌落形态、显微形态）,代谢产物指纹图谱（,TLC,、,HPLC,）,保藏（斜面一支，砂土两支，甘油四支，,大发酵菌株发酵种子液甘油管两支）,菌株登记,菌 株,第,4,页,/,共,17,页,菌株编号,分离菌株时格式：样品编号,+,两位序号（如从,SY01,样品中分离的菌株，编号依次为,SY01-01,SY01-02,等）,活性菌株编号由四部分组成：单位,+,研究室,+,分离人姓名首字母,+,序号组成（如,QD-NP-ABC-01,）。,活性筛选工作结束后，上交活性菌株（斜面、砂土、甘油）、活性菌株浸膏、薄层照片、,HPLC,指纹图谱、微生物培养形态、显微形态照片，分离的活性菌株详细填写菌株登记表（,Access,表格）。,第,5,页,/,共,17,页,倒制平板,将融化的琼脂培养基，冷却至,50,左右。,在酒精灯火焰旁，以右手的无名指、小指夹持棉塞，左手掀开皿盖。右手持三角瓶向皿内注入培养基。,将培养皿稍加以旋转摇动后，置于水平位置待凝。,第,6,页,/,共,17,页,稀释,第,7,页,/,共,17,页,将菌种用无菌水制成悬液。,取若干只无菌试管，每只内盛,9ml,无菌水。吸取上述菌悬液,lml,加入第,1,只含有无菌水的试管内。这样就使第,1,只试管细菌浓度为原菌悬液的,l/lO,，也就是,10,-1,。,从第,1,只试管内,(10,-1,),吸取,lml,注入第,2,只含有无菌水的试管内，这样试管内的细菌浓度为原菌悬液的,1/100,，也就是,10,-2,。,用同样方法，制成,10,-3,10,-8,的菌悬液。,第,8,页,/,共,17,页,涂布,第,9,页,/,共,17,页,斜面接种,第,10,页,/,共,17,页,操作前，先用,75,乙醇擦手，待乙醇挥发后才能点燃酒精灯。,将斜面菌种管和欲接种的斜面试管同时拿在左手的大拇指和其它四指之间，长有菌苔的一面向上，并处于水平位置。,先将菌种管和试管的棉塞旋松，便于接种时取出。,右手拿接种环，与通常拿笔一样。将要伸入管内部分的金属柄和金属丝在酒精灯焰上灼烧灭菌。,用右手小指、无名指及手掌将菌种管和试管的棉塞同时拔出，并把棉塞握住，不随意放在桌上或与其它物品相接触，再以火焰烧管口。,将上述在火焰上灭菌过的接种环伸入菌种管内，接取菌种前先在管内壁上或未长苔的培养基面上接触一下，使接种环充分冷却，以免烫死菌种。用接种环轻轻刮取少许苔后，自菌种管内抽出。抽出时勿与管壁相碰，也勿再通过火焰。迅速将沾有菌种的接环伸入待接种的斜面培养基试管内，由里到外划折线，使菌体粘附于培养基上。划线时，勿用力划破培养基。,接种完毕后将接种环抽出，灼烧管口，塞上棉塞。加棉塞时，不要用试管口去迎塞，以免试管在移动时污染杂菌。,接种环在放回原位前，要经火焰灼烧灭菌。,第,11,页,/,共,17,页,在酒精灯火焰上灼烧接种环，待冷却，取一环菌液。,左手握住琼脂平板，用大拇指和食指稍抬起皿盖，同时靠近火焰周围，右手持接种环伸入皿内，在平板上一个区域作,“,之,”,形来回划线。划线时使接种环与平板表面成,30,40,角轻轻接触，以腕力在表面作较快的滑动，勿使平板表面划破或嵌进培养基内。,灼烧接种环，冷却后，再将平皿转动一定的角度，接种环通过划过线的区域，在第二区域继续划线。,划后再灼烧接种环，冷却后用同样的方法在其它区划线。,全部划线完毕后，在平皿底注明菌种、姓名和日期等。将培养皿,倒置,放入恒温箱培养。,适当温度培养一段时间后，取出观察。,平板划线,第,12,页,/,共,17,页,第,13,页,/,共,17,页,new marine genus,Salinispora tropica,Marinispora,sp.,第,14,页,/,共,17,页,第,15,页,/,共,17,页,检查冷凝桶内水位是否高于最高位置或低于最低位置，打开锅盖检查锅内水位是否漫过低盘。,待灭菌完毕后，等温度降至,60,以下，压力表显示为零后方可打开锅盖，取出灭菌材料。,第,16,页,/,共,17,页,使用前应提前开机，打开紫外灯和风机开关,15,20,分钟。,工作台面上，不要存放不必要的物品，以保持工作区内的洁净气流不受干扰。,第,17,页,/,共,17,页,