地中海贫血基因检测的临床应用ppt培训课件.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,地中海贫血基因检测的临床应用,一、地中海贫血,2,全球有,3.5,亿,人为地中海贫血基因携带者（占总人口的,2%,）,中国南方高发地区人群携带率最高可达到,24%,3,地中海贫血的地域分布,-,地贫分布,-,地贫分布,中国南方地贫基因携带率,地区,携带率,(%),地贫,地贫 合计,广东,8.53,2.54 11.07,广西,14.95,6.78 21.73,四川,1.92,2.18 4.1,台湾,4.20,1.10 5.3,香港,5.02,3.41 8.43,Xu,et al.,J Clin Pathol,2004,57:517-22.,Cai,et al.,Chi J Epidemiol,2002,23:281-5,.,在我国，地中海贫血主要在南方,广东、广西、海南、四川、重庆,等省市发病率较高，以,广西、广东,最为严重。,4,遗传性血红蛋白病三大类,地中海贫血,(,地贫,),（,Thalassemias,）,常见为,-,地贫,和,-,地贫,异常血红蛋白病,珠蛋白结构异常，绝大部分没有或有轻度临床诊断,遗传性持续性胎儿血红蛋白,珠蛋白的合成不随着胎儿的发育而发生改变，胎儿血红蛋白持续表达。,地中海贫血定义及分类,地中海贫血（,Thalassemia,）简称地贫（,Thal,），是由于血红蛋白的珠蛋白肽链基因突变或缺失，使某种珠蛋白肽链合成障碍而致的一种遗传性慢性溶血性贫血。,血红蛋白分子是由珠蛋白,+,血红素组成，珠蛋白由两对（,4,条）肽链构成。,根据珠蛋白肽链基因（简称,基因或,基因）缺失、缺陷或基因突变和珠蛋白肽链合成障碍的不同，可将地贫分为,型、,型、,型和,型四种，其中以,型和,型地贫较为常见。,地中海贫血定义及分类,人类血红蛋白的合成和演变,胚胎期,胎儿期,成人,gower 1-,22,gower 2-,22,Portland-,22,HbF-,22,HbA-,22,HbA-,22,HbA2-,22,HbF-,22,地贫血红蛋白的组成,正常成人血红蛋白（,Hb,）有三种：,HbA(22)(,2.5,3.5%,),、,HbA2(22)(,96.5-97.5%,),、,HbF(22)(,0-1.0%,),。,地中海贫血及基因型,a,2,a,1,a,2,a,1,a,2,a,2,a,1,a,2,a,1,a,2,a,1,a,2,a,1,a,2,a,1,a,2,a,1,血红蛋白正常,轻型：,2,个,基因缺失或突变,中间型（,HbH,疾病）：,3,个,基因缺失或突变,Hb Barts,：,3,个,基因缺失或突变,静止型：,1,个,缺失或突变,地中海贫血的临床特征,临床特点,静止型,（,地贫,2,）,轻型或标准型（,地贫,1,）,中间型（,HbH,病,/CS,型,HbH,病）,重型,HbBarts,胎儿水肿综合征）,发病年龄,3,个月,儿童，成人,儿童，成人,胎儿,贫血程度,无,无或轻度,中度重度,重度,黄疸,无,无,轻度中度,无或轻度,肝脾肿大,无,无或轻度,轻度中度,重度,血片,RBC,：,形态异常,正常,轻度,中度重度,重度,血红蛋白电泳,正常,正常,HbH,带或伴,HbBarts,HbConstantSpring,大量,HbBarts,伴,HbPortland,少量,HbH,HbF,正常,正常,正常或轻度减少,无,HbH,包涵体,无,无或可有,强阳性,阳性,/,11,0.7,0.95,0.3,0.6,基因诊断,缺失,1,个或突变,/-,，,T,/,缺失,2,个或突变,/-,或,/,T,-,缺失,3,个或突变,-/-,，,T,/-,缺失,4,个,-/-,-,地贫血红蛋白比较,表型,Hb A,Hb Barts,Hb H,正常人,97-98%,0,0,静止型携带者,96-98%,0-2%,(At birth),0,轻型地贫症状,85-95%,2-8%,(At birth),2%,Hb H,疾病,下降,G),13,HBB,CD43,CD43 GT,2,HBA,QS125,Codon 125(T-C),14,HBB,-29,-29AG,3,HBA,CS142,Codon 142(T-C),15,HBB,Int,起始密码子,ATGAGG,4,HBA,-SEA,SEA,缺失,16,HBB,CD14-15,CD14-15(+G),5,HBA,-3.7,3.7,缺失,17,HBB,CD27-28,CD27-28(+C),6,HBA,-4.2,4.2,缺失,18,HBB,-32,-32CA,7,HBB,CD41-42,CD41-42(-TCTT),19,HBB,-30,-30TC,8,HBB,IVS-2-654,IVS-2-654 CT,20,HBB,IVS-1-1,IVS-1-1 GT,9,HBB,CD17,CD17 AT,21,HBB,IVS-1-5,IVS-1-5 GC,10,HBB,-28,-28AG,22,HBB,CD31,CD31(-C),11,HBB,CD26,CD26 GA,23,HBB,Cap,CAP+40-+43(-AAAC),12,HBB,CD71-72,CD71-72(+A),本试剂盒适用于人,DNA,样本的地中海贫血基因型（包含,3,种,突变、,3,种,缺失及,17,种,突变）中国常见的突变基因型的检测，可用于人地中海贫血的,辅助诊断,及适用于大样本量的,携带者筛查,和,产前基因诊断,。,覆盖广,26,品质优,点突变与测序结果符合率高达,100%,三家临床医院广东省妇幼保健院、广西省妇幼保健院及湖北省妇幼保健院结果汇总见下表：,阳性符合率（临床灵敏度）,=711/,（,711+0,）,=100%,；,阴性符合率（临床特异性）,=709/,（,0+709,）,=100%,；,总符合率,=,（,711+709,）,/,（,711+0+0+709,）,=100%,；,27,检测方法,阳性样品,阴性样品,点突变,点突变,现代高达试剂盒,260,478,573,测序,260,478,573,共计,738,573,检测方法,阳性样品,阴性样品,现代高达试剂盒,428,217,Gap-PCR,428,217,品质优,缺失突变与,Gap-PCR,结果符合率高达,100%,阳性符合率（临床灵敏度）,=428/,（,428+0,）,=100%,；,阴性符合率（临床特异性）,=217/,（,0+217,）,=100%,；,总符合率,=,（,428+217,）,/,（,428+0+0+217,）,=100%,；,时间短,检测流程,样本核酸提取,20,min,多重,PCR,扩增,2.5,h,r,液相杂交,15 min,结果检测与判读,1 min/test,29,分型强,全新液相芯片技术简介,二维数字编码磁珠,30,藻,分型强,全新液相芯片技术简介,目前，国内地贫分子诊断方法主要有,Gap-PCR,、反向斑点杂交、导流杂交、测序等。其中,Gap-PCR,只能检测出地贫中的缺失型，反向斑点杂交需要两次检测才能完整的检出、,-,地贫；导流杂交技术不能做到基因位点的准确分型；而测序方法需要昂贵的仪器,，,复杂序列分析，,人工经验要求高，,不利于大规模筛查。,国内现有地中海贫血基因检测技术及现状,-,地中海贫血,-,地中海贫血,亚能生物技术,(,深圳,),有限公司,-,地中海贫血基因检测试剂盒,(gap-PCR,法,)(,国食药监械,(,准,),字,2012,第,3401088,号,-,地中海贫血基因检测试剂盒,(,反向点杂交法,)(,国食药监械,(,准,),字,2013,第,3400676,号,中山大学达安基因股份有限公司,-,地中海贫血基因检测试剂盒,(gap-PCR,法,)(,国食药监械,(,准,),字,2011,第,3401628,号,-,地中海贫血基因分型检测试剂盒,(PCR-,反向点杂交法,)(,国食药监械,(,准,),字,2012,第,3401665,号,珠海经济特区海泰生物制药有限公司,东南亚型,-,地中海贫血,Zeta,链蛋白检测试剂盒,(,酶联免疫法,)(,国食药监械,(,准,),字,2011,第,3400228,号,深圳益生堂生物企业有限公司,地中海贫血基因检测试剂盒,(PCR,探针法,)(,国食药监械,(,准,),字,2012,第,3400354,号,厦门致善生物科技有限公司,-,地中海贫血基因检测试剂盒,(,荧光,PCR,熔解曲线法,)(,国食药监械,(,准,),字,2013,第,3401294,号,潮州凯普生物化学有限公司,-,和,-,地中海贫血基因检测试剂盒,(PCR+,膜杂交法,)(,国食药监械,(,准,),字,2012,第,3400399,号,北京现代高达生物技术有限责任公司,-,和,-,型地中海贫血基因检测试剂盒,(PCR-,杂交法,)(,国食药监械,(,准,),字,2013,第,3401572,号,地中海贫血检测试剂盒,现代高达,同类产品,（,Gap-PCR,、膜杂交）,样本收集,样本收集,基因组,DNA,获取,基因组,DNA,获取,缺失和突变分,2,管进行,PCR,扩增,缺失，,点突变和,点突变分别进行,PCR,扩增,多重微珠杂交（,30min,）,Gap-PCR,核酸电泳（,1h,）,膜杂交（,2-4h,）,自动化洗涤（,5min,）,人工洗涤（膜杂交）,电脑软件自动判读,人工判断，,UV,下观察,缺失突变,人工判读，,2,张膜条分别对,和,进行判读,同类产品操作流程对比,比较内容,现代高达,同类产品（,Gap-PCR,、膜杂交）,检测位点,同时对,缺失、,突变及,突变检测,分别对,缺失、,突变及,突变检测,基因分型,可以准确区分杂合和纯合型,只能区分少数位点,结果分析,仪器自动分析判断,人工分析判读，耗时耗力,报告时间,1,天,4-7,天（,96,个样品）,分析通量,96,样本,/,次，适合大样本量检测,单个样本分析,自动化程度,高，样本转管无需再次标记，电脑自动化判读结果等,低，样本标记繁多，易出错，结果检测靠手工操作等,准确度,高，自动化高，减少人工错误，,较高，但稳定性差，受经验、环境因素等影响,耗材费用,低,低,环境污染,无,使用,EB,，有致癌性（,Gap-PCR,）,自备试剂,只需纯水，用于显色液和洗液稀释,需自己配制或购买杂交液、电泳液等,同类产品优势对比,通量高,采用自动化检测技术，每次可同时检测,96,个样本，分析样本通量高；,品质优,结果为数字信号，由软件自动判读，同时生成检测报告单，结果准确、稳定可靠，有效避免人为错误，阴、阳性符合率均为,100%,；,判读易,采用电脑软件自动判读，减少人工误差，结果稳定性高,；,时间短,检测速度快，报告时间最短可至,5,小时；,效率高,实验室需求人员少，,2,个人,1,套仪器一天可完成,500,人份样本检测；,分型强,能在一次实验针对突变和缺失同时进行多个位点检测,，突变、突变和缺失一次呈现；,覆盖广,可覆盖中国人群地贫基因变异的,95%,以上，准确性高；,种类多,样本种类包括外周血、羊水、绒毛、脐带血、足血片。,产品优势,产品应用实例,广东省妇幼保健院,广东省妇幼保健院院长张小庄发布发布了最新的广东地贫防控项目基线调查结果,广东省妇幼保健院地贫基因实验室内，工作人员在使用液态芯片仪分析地贫基因,我公司与广东省妇保院合作对广东省,21,个地市的,14332,对,户籍住院分娩孕产妇夫妇进行检测，发现地贫基因携带率为,16.8%,；这些夫妇所分娩胎儿中，地贫基因携带率为,16.0%,。,37,与现有地贫筛查方案结合的产品定位,重庆市,纳入职工生育保险,凡符合我市职工生育保险待遇享受条件的人员，按照,重庆市物价局重庆市卫生局关于新增和修订部分医疗服务项目价格的通知,（渝价,2009161,号）规定进行,“遗传疾病基因检测”（项目编码：,A250700019,），,生育保险基金按照,每项,600,元标准,予以限额支付。,39,海南省为民办实事事项,40,广东、广西免费孕前优生检查,41,谢 谢,