植物脱毒方法.ppt

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强光可缩短潜育期。连作或与茄科作物套种使毒源增多，发病率和发病程度明显增加。不卫生栽培是造成流行的重要原因，在病、健株间往来触摸，施用未腐熟有机肥，培带有病毒的土壤都可加重病毒传染,。,防治方法,选择耐病品种,选生长势强，发育速度快，适应当地条件的耐病品种如辽,44,、,6315,、广黄,54,、,176,、,Nc89,、,G80,、,8611,等，注意高抗品种的选育。,加强苗期管理,苗床应选用,2,年以上未种烟草及茄科植物、远离菜田的地块。禁施受,TMV,污染的粪肥。选用从无病田无病株上采收的种子，或用,0,1%,硝酸银或,0,1%,一,0,2%,硫酸锌、,0,1%,磷酸三钠液浸种,l0,分钟，去除种子表面病毒，浸种后要反复冲洗。间苗、定苗前要用肥皂将手洗干净，操作时先管理好苗，发现病株及时拔除。,实行轮作,不与茄科植物问、套作，宜与禾本科,作物轮作,2,3,年。,加强田间管理,严禁将已发病的烟苗移入大田。应先健株后病株顺序管理，操作过程中不宜吸烟，不宜在烟田反复走动、触摸。充分施足氮、磷、钾肥，及时喷施多种微量元素肥料，提高植株抗病能力。移栽后适当炼苗，团棵末期浇临界水，促进植株生长。出现花叶病，要及时追施速效肥、培土浇水、促进开秸开片，减轻病害。有报道，用,0,1%,的褐藻酸钠喷雾也有一定效果。此外，还可选用,2%,宁南霉素水剂，用有效成分,90,一,120g/ha,，采收前,14,天停止用药,。,防治方法,郁金香碎色花病毒,又叫郁金香碎色病毒、郁金香花叶病毒，郁金香病毒的一种（,;,郁金香花叶病毒,;,百合斑驳病毒（,virus,）,.,马铃薯,Y,病毒科可能在全世界范围分布。在郁金香生长的所有温带地区；特别是在生长季节早期蚜虫介体丰富的欧洲南部很普遍。,资料经鉴别、筛选后，即进行形式方面的和实质方面的整理，然后开始全面的分析与综合研究。分析是指对素材进行深入细致的考察、推敲和判断，从中找出所提供的新的知识、情况、理可能在全世界范围分布。在郁金香生长的所有温带地区；特别是在生长季节早期蚜虫介体丰富的欧洲南部很普遍。,欧洲：前捷克斯洛伐克、丹麦、荷兰,;,英国,亚洲：日本西半球：美国；,大洋洲：澳大利亚论或经验。,必要时研究人员可在此基础上提出自己的观点、建议或方案。,郁金香碎色病毒,-,分布,危害与症状,是造成郁金香种球退化的重要原因之一。,该病主要浸染郁金香的叶片及花冠。主要症状表现在花上，同一朵花上花瓣的颜色产生深浅不同的变化，有的颜色加深，有的颜色维持正常，有的颜色变浅等，有的碎锦成斑驳状，有的成条纹状。感病的叶片上出现浅绿色或灰白色条斑，有时形成花叶。花瓣畸型、单色花的花瓣上出现淡黄色、白色条纹或不规则的斑点。感病的鳞茎退化变小，植株生长不良、矮化，花变小、畸型。,郁金香碎色病毒,-,形态特征,病毒粒子丝状，无包膜；通常是纤维状；带有明显模式：长,750-775 nm,、宽,14 nm,。轴槽模糊。基本螺旋模糊。植物细胞中出现包涵体。植物汁液热失活点为,65-70,度。在百合汁液中能保持,4-6d,。最高稀释度是,1/10000,，颗粒的沉降物单组分，共沉降系数为,153S,。从郁金香栽培品种,Jack Laan,和,Divera,中纯化时,260nm,的特定吸收值为,1.03-1.13,，而纯化自,Texas Flame,的为,1.13-1.21,。,郁金香碎色病毒,-,传播途径,可通过摩擦接种的非介体传播和介体传播。已经报道了数个郁金香碎色病毒的蚜虫介体种类。,病原物为,郁金香碎色病毒,(TBV);,传播途径,是蚜虫和汁液传染。,郁金香碎色病毒,-,检疫与防治,检疫,郁金香碎色病毒在郁金香中均匀分布。,DAS-ELISA,常用于检测储存期间鳞茎样品中病毒存在的活性实验中。抗郁金香碎色病毒和郁金香带状病毒的抗体存在于所用的抗血清中。包被了碎色病毒汁液的板中酶标,PAbs,所获得的,A405,读数高于酶标,MABs,。郁金香碎色病毒,McAbs,可用于区分郁金香碎色病毒的不同株系，亦可与大豆黄色花叶病毒起反应。,防治方法,加强检疫，控制病害的扩展和蔓延。发现病株立即,拔除。避免和百合种植过近，防止相互传染。防治蚜,虫，定期喷洒杀虫剂，喷,40%,乐果乳油,1000,倍液，或,40%,氧化乐果乳油,1000,倍液或,2.5%,鱼藤精,800,倍液防,治蚜虫。减少传播介体。选择无毒植株作繁殖材料。切花时，对刀剪应加热,消毒或洗剂洗净后使用。及时拔除病株并销。及时消,灭蚜虫，切断传播途径。定植时深栽鳞茎，以,20,厘米,为宜，可使碎色隐蔽。种植地点要远离百合。用茎尖,培养法除去病毒，栽培无毒种球。,大蒜,(AlliumsativumL.),病毒病害在世界范围内广泛发生,引起作物产量的严重损失和品质下降。这些病毒由于作物的营养繁殖而在球茎中大量积累。要想有效控制这类病毒病害,首先必须建立有效的病原鉴定体系,并明确它们的种类。迄今为止,已有一些和大蒜花叶病症相关的线状病毒被报道,它们常表现为复合侵染。这些病毒至少包括,3,种马铃薯,Y,病毒属,(Potyvirus),、,2,种麝香石竹潜隐病毒属,(Carlavirus),成员和新近成立的葱,X,病毒属,(Allexivirus),属一些成员,1,3,。其中,Allexivirus,属是新近成立的一个植物病毒属,成员为单链正性,RNA,病毒,基因组,RNA,长,8 0,9 0kb,包裹在长度为,70 0nm,80 0nm,的线状粒子中,3,端具有,poly(A),尾,由螨虫传播,寄主为葱属植物。,大蒜,E,病毒,禾草甘蔗花叶病毒病,症状,叶部出现淡绿色、卵圆形，不规则形病斑，不受叶脉局限，后期呈条纹状。病株生长速度明显减低。,病原特征,甘蔗花叶病毒（,Sugarcane mosaic virus,）。病毒粒体杆状，大小,15,微米,750,纳米。,53,55,时失活，稀释限点,1,：,1000,。至少有,9,个不同的毒株。田间主要借玉米叶蚜（,Rhopalosiphum maydis,）传播。,Carolinonia cyperi,和谷蚜（,Aphis setariae,）两种蚜虫也可以传毒。,寄主范围,有冰草属、雀麦属、马唐属、稗属、黍属、大麦属、乱子草属、雀稗属、狼尾草属、甘蔗、黑麦属、狗尾草属、高梁属、小麦等数十种禾草和作物。在草坪草中以奥古斯丁草受害严重。,甘蔗黑穗病,2006,年，这一疾病能使作物的生长速度与收成降低百分之三十，从而使澳大利亚昆州总值十五亿澳元的蔗糖产业受到灾难性威胁。有关方面还发现这一疾病已经传染至该农场中的许多其它作物。,感染黑穗病的作物呈现弯曲状，从作物顶部朝下呈灰至黑色。,甘薯种性退化,1,：,甘薯良种随着种植年代的增加会出现植株变小、分枝减少、叶片皱缩、羽状斑纹、生长势衰退、块茎变小、产量品质明显下降、甚至丧失生产利用价值，这种现象就叫做年甘薯种性退化。甘薯种性退化 是长期以来普遍存在严重影响甘薯生产发展的一个重大问题，一般减产高大,30%,以上。,2,：,研究证明，,甘薯种性退化原因主要是由病毒侵染造成的,。,目前世界上已报导侵染甘薯的病毒有十多种，在我国主要有两种：一是,甘薯羽状斑驳病毒,，主要症状是叶片出现规则退绿条纹或带有紫色边缘的退绿斑，也可沿叶脉行成紫色羽状斑纹，植株生长势减弱，薯块上产生褐色纵裂，薯块内部形成褐色的内木栓，薯块变小，产量品质下降；二是,甘薯潜隐病毒,，其症状表现不明显，产量品质下降。,马铃薯病毒,马铃薯,Y,病毒是马铃薯第二个重要病毒性病害。它通过感染的块茎长期存在并由蚜虫非持续性地传播。产量损失可达,80,。症状：症状随着病毒株系、马铃薯品种及环境条件变化很大。脉缩、叶片卷曲、小叶叶缘向下翻、矮化、小叶叶脉坏死、坏死斑点、叶片坏死和茎上出现条纹都是典型的症状。不太敏感品种的反应只是发生轻微的花叶，或者表现不出症状。,植物病毒的危害,病毒引起的病害在数量上占植物病害的第二位。由植物病毒引起的植物病害的植物有：禾本科、茄科、豆科、十字花科和葫芦科等。在辽宁省引起毁灭性的植物病毒病有番茄蕨叶病毒病，辣椒花叶病毒病和烟草脉坏死病毒病等。,生产上危害较大的植物病毒病害有：烟草花叶病、黄瓜花叶病、马铃薯病毒病、玉米矮花叶病等。,一,.,病毒在植物体内的危害及分布,1.,危害,:,绝大多数,植物都可以无,性繁殖的,容易受到多种病原菌的侵染,体内积累浓度相当高的病毒。,在无,性繁殖的种类中,，由于病毒通过营养体进行传递，在母株内逐代积累，危害日趋严重。,病原菌的侵染不一定会,造成,植物的死亡,却会大大降低,植物的生长发育及产量和质量,从而影响其栽培的经济效益,。,因此,脱除病毒及其他病原,菌,对,植物栽培,生产是非常必要的。,一,.,病毒在植物体内的危害及分布,2.,分布,在植物体内的分布具有不均匀性，随植株不同部位和年龄而异。,老叶和成熟组织及器官中病毒含量较高,根尖、茎尖生长点约,0.11mm,区域内，几乎不含病毒,。,(,原因：分生组织细胞分裂和生长速度快，而病毒在植物体细胞内繁殖速度相对较慢；另外，病毒是通过筛管组织或胞间联丝传播至其他组织细胞的，而茎尖分生组织无分化，没有维管组织。,),危害一些植物的病毒数目,物种,感染病毒种类,物种,感染病毒种类,物种,感染病毒种类,菊花,19,矮牵牛,5,苹果,36,康乃馨,11,百合,6,柑橘,23,水仙,4,马铃薯,17,葡萄,26,唐菖蒲,5,大蒜,24,草莓,24,风信子,3,豌豆,15,桃,23,月季,10,樱桃,44,梨,11,所谓脱毒就是采用一定的方法除去植物体内病毒的技术。,无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物体内的存在表现阴性反应的苗木。,一、茎尖培养脱毒（一）通过茎尖培养脱毒的原理,1,、病毒在植物体内的分布 病毒浓度不同，离尖端越远病毒浓度越高。茎尖或根尖，离体培养便可获得无病毒再生植株。,2,、茎尖大小与脱毒 茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分生组织不能合成自身需要的生长素，但下部叶原基能提供，因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。但茎尖越大，脱毒效果差。,2,、茎尖剥离和接种,将已消毒的芽放在带滤纸的培养皿上,解剖镜下剥去幼叶,切下带,1,2,个叶原基的生长点（,0.3,0.5mm,）,切下的茎尖转至培养基上（顶部向上）。,（三）培养基与培养方式,1,、培养基：,MS,，,White,Morel,等,2,、培养方式：一般采用半固体培养基。,（四）影响茎尖脱毒效果的因素（茎尖脱毒技术的关键）,植物种类、病毒种类、剥离茎尖的大小（,0.3-0.5mm,带,1-3,个叶原基）、培养基营养,用于脱毒的适宜茎尖大小,植物,病毒名称,剥离茎尖大小,（,mm,）,植物,病毒名称,剥离茎尖大小,（,mm,）,马铃薯,马铃薯卷叶病毒,1.0,3.0,百合,花叶病,0.2,1.0,马铃薯,Y,病毒,1.0,3.0,鸢尾,花叶病,0.2,0.5,马铃薯,X,病毒,0.2,0.5,菊花,各种病毒,0.2,1.0,马铃薯,G,病毒,0.2,0.3,康乃馨,各种病毒,0.2,0.8,马铃薯,S,病毒,0.2,以下,大丽花,花叶病,0.6,甘薯,斑纹花叶病毒,1.0,2.0,大蒜,花叶病毒,0.3,1.0,缩叶花叶病毒,1.0,2.0,甘蔗,花叶病,0.7,3.0,羽毛状花叶病毒,0.3,1.0,草莓,各种病毒,0.2,1.0,二、热处理脱毒 脱毒原理：一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下（,35-40,度）即钝化失活。,1,、温汤浸渍处理脱毒法 材料置于,50,左右热水中浸渍几十分钟到数小时。,特点：,简单易行，成本低，但易使材料受伤。,适用：,甘蔗、木本植物和休眠器官的处理。,2,、热空气处理脱毒法 将植物用,35,40,的热空气处理,2,4,周或更 长时间。,特点：,损伤较小，操作简便，须严格控制温度时间,适用：,多数植物,3,、热处理结合茎尖培养脱毒,目前常采用将热处理和茎尖分生组织培养结合起来的方法脱毒。,特点：,既可缩短热处理时间，提高植株成活率，又可剥离较大的茎尖，提高茎尖培养的成活率和脱毒率。,适用：,大多数植物，并可除去一般培养难以去除的纺锤块茎类病毒。,三、其他组织培养脱毒方法,（一）愈伤组织培养脱毒 将感染病毒的组织离体培养获得愈伤组织，再诱导愈伤组织分化成苗，从而获得无病害毒植株的方法，即愈伤组织培养脱毒法。部分愈伤组织细胞不带病毒可能有以下两方面的原因：,是愈伤组织细胞分裂增殖速度快，而病毒复制速度较慢，赶不上细胞的繁殖；是愈伤组织发生了抗病毒突变。,（二）珠心胚培养脱毒 柑橘类种子为多胚种子，除具有合子胚外还有珠心胚，种子一般不带病毒，因此珠心胚植株不易带病毒。（三）微尖嫁接脱毒 指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖（,0.14-1.0mm,带,3-4,个叶原基），以培养脱毒苗的技术。脱毒程序：无菌砧木培养,茎尖准备,嫁接,嫁接苗培养,移植。,一些常见病毒病引起的可见病症,症状,病毒病名称,症状,病毒名称,褪绿、黄化,小麦黄矮病,斑点,十字花科黑斑病,花叶、斑驳,烟草花叶病、菜豆花叶病、黄瓜花叶病,猝倒、立枯,棉花立枯病、瓜苗猝倒病、水稻烂秧病,溃疡,杨树溃疡病、柑桔溃疡病，番茄溃疡病,萎蔫,棉花枯萎病、茄科植物青枯病,枯死,马铃薯晚疫病、水稻白叶枯病,矮化,玉米矮化病、泡桐丛枝病、小麦丛矮病,穿孔,桃细菌性穿孔病,徒长,水稻恶苗病,疮痂,柑桔疮痂病、梨黑星病、马铃薯疮痂病,卷叶,马铃薯卷叶病,二、指示植物法,将一些对病毒反映敏感，症状特征显著的植物作为指示植物，用以检验待测植物体内特定病毒的存在。特点：条件简单，操作方便，经济而有效，只能测出病毒的相对感染力。,几种马铃薯病毒的指示植物及表现症状,病毒种类,指示植物,表现症状,马铃薯,X,病毒（,PVX,）,千红日、曼陀罗、辣椒、心叶烟,脉间花叶,马铃薯,S,病毒（,PVS,）,苋色藜、千日红、曼陀罗、昆诺阿藜,叶脉深陷，粗缩,马铃薯,Y,病毒（,PVY,）,野生马铃薯、洋酸菜、曼陀罗,随品种而异，有些轻微花叶或粗缩，敏感品种反应为坏死,马铃薯卷叶病毒（,PLRV,）,洋酸菜,叶尖呈浅黄色，有些品种呈紫色或红色,（一）草本植物鉴定,1,、汁叶涂抹法 被鉴定植物取,1,3,克幼叶加,10ml,水及少量磷酸缓冲液,-,研碎过滤,-,加金钢砂作磨擦剂,-,汁液在叶面上涂抹,2,3,次接种,2,、小叶嫁接法 指示植物作砧木，被鉴定植物小叶作接穗，常用劈接法。,（二）木本指示植物鉴定,直接在指示植物上嫁接待检植株的芽片,部分病毒的木本指示植物及相应症状,病毒种类,木本指示植物,表现症状,苹果褪绿叶斑病毒,苏俄苹果,叶片出现褪绿斑点，叶小，植株矮化，长势弱,苹果茎痘病毒,司派,227,或光辉,叶片反卷，植株矮化，皮层坏死,苹果茎沟病毒,弗吉尼亚小苹果,植株矮小，接合部内有深褐色坏死环纹，木质部产生深褐色纵向条沟,苹果花叶病毒,兰蓬王、红玉和金冠,叶片上产生黄斑、沿叶脉条斑,苹果锈果类病毒,国光,叶和茎干锈斑、坏死斑,葡萄扇叶病毒,葡萄茎痘病毒,沙地葡萄圣乔治,叶片出现褪绿斑点、线纹斑及环斑、局部坏死、畸形；叶脉间出现星状透明斑,葡萄卷叶病毒,欧亚种葡萄,叶片下卷、叶脉间变红,葡萄茎沟病毒,Kober 5BB,仅在,Kober5BB,上会产生茎沟,葡萄栓皮病毒,LN33,节间肿大，部分叶片背面出现栓皮,葡萄金黄病毒,Baco 22A,植株矮化，叶片下卷、黄化,葡萄脉坏死病,110R,叶片背面沿叶脉出现坏死斑，卷须和嫩梢坏死,葡萄脉斑驳病,河岸葡萄,褪绿斑，沿脉斑驳，叶片畸形,柑橘碎叶病,腊斯克枳橙、特洛亚枳橙、卡里佐枳橙和厚皮来檬,新叶上出现叶片扭曲，叶缘残缺呈破碎状,三、抗血清鉴定法 特异性高，测定速度快，几小时甚至几分钟就可以完成。植物病毒鉴定中最有用方法之一。（一）原理 刺激抗体产生蛋白质抗原。抗原与抗体间能发生高度专一性的血清学反应（免疫反应）,第三节 无病毒苗的保存和繁殖,通过不同脱毒方法所获得的脱毒植株，经鉴定确系无特定病毒者，即是无病毒原种。,无病毒植株并不是有额外的抗病性，它们有可能很快又被重新感染。所以一旦培育得到无病毒苗，就应很好保存，这些原原种或原种材料保管得好可以保存利用,5,10,年。,一、无病毒苗的保存,（,一）隔离保存,通常无病毒苗应种植在隔虫网内，使用,300,目，即网眼为,0.4,0.5mm,大小的网纱，也可用盆栽。,要求：,A,栽培土壤消毒；,B,周围环境要整洁；,C,及时喷施农药防治虫害。,谢谢大家,