普通遗传学实验六-多倍体的诱发与鉴定-3.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,普通遗传学实验六,多倍体的诱发与鉴定,一、实验目的,掌握多倍体人工诱发的原理，了解人工诱变的方法。,掌握多倍体鉴定的方法。,二、实验材料,实验材料,:,蚕豆（,2n=2X=12,）经染色体加倍处理后的根尖。,三、实验用品,试剂：卡宝品红染色剂，,0.1%,秋水仙素，卡诺固定液，,1Mol/L HCI,仪器及器具：显微镜、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片等,四、实验原理,多倍体广泛地存在于植物界，目前已知被子植物中有三分之一以上的物种是多倍体。,其产生途径除自然发生外，也可采用高温、嫁接和射线处理等物理方法和化学药剂处理方法而获得多倍体植株，其中应用最广泛、效果最好的是,秋水仙素化学诱导法,。,秋水仙素是由百合科植物秋水仙(,Colchicumautumnale L,.,)中提炼出来的一种生物碱，对植物的种子、幼芽、嫩枝等可产生诱变作用。,其作用机理是：阻止微管的聚合作用，从而抑制细胞分裂时纺锤体的形成，使复制后的染色体不能拉向两极，使染色体停滞在分裂中期，但细胞不分裂，不能形成两个子细胞，从而导致染色体加倍，形成多倍体细胞，在此基础上进一步发育成多倍体植物。,鉴定多倍体可分直接法和间接法,直接法,：是将经过秋水仙素溶液处理的根尖、茎尖进行染色体计数，多倍体植株的染色体是加倍的。,间接法,:,除了检查染色体数目变化外，形态特征的变异也是一个重要方面。多倍体植物的气孔、花器、花粉粒、种子、果实等部分明显变大，气孔数目减少而密度变稀，同源多倍体育性有一定的降低，所以同源多倍体中有部分畸形的不育花粉粒。这些常作为染色体数目加倍的辅助性指标。,多倍体植物的气孔增大,经秋水仙素溶液处理后的蚕豆根尖明显变大,多倍体种子比二倍体种子明显增大,1.紫苏二倍体种子；2-6.紫苏多倍体种子,经秋水仙素处理后的蚕豆根尖细胞染色体,经秋水仙素处理后的,洋葱根尖细胞染色体,五、实验方法与步骤,材料培养：,将蚕豆种子洗净，浸种24hr，待种子吸胀后置于培养皿中，放在25,温箱中,发芽。,加倍处理,：当根长约0.5cm时，滴加0.1%秋水仙素浸根处理24-36hr，待根尖明显膨大后，将秋水仙素冲洗干净，切取根尖用卡诺固定液固定2-24hr，再换70%乙醇，置4,冰箱保存备用,。,酸,解：,用吸水纸将乙醇吸干，加1Mol/L HCI，置60,水浴锅中水解18min后，将HCI倒掉，用水洗3次，置水中备用。,涂片：,切取根尖分生区部分，置载玻片上，用镊子将根尖夹成糊状并涂成薄层，待水分干燥后，加,1,滴卡宝品红染色液，染色,5min,，加盖玻片,。,压片,：用吸水纸包住盖玻片的位置，左手将盖玻片固定，右手拿解剖针或镊子敲打盖玻片，最后用大拇指垂直向下压片。,显微观察,：先在,10镜下调好焦距，找到染色体分散的细胞后，再换40 镜下观察统计染色体数目。,六、实验结果,绘一个分散良好的加倍蚕豆细胞染色体图，并注明倍性。,简述秋水仙素诱发多倍体的原理。,