新城疫的实验室诊断.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实训 新城疫（禽流感）的诊断,一、初步诊断二、实验室诊断,1,、病毒分离培养,一、,实训目的,较系统的了解和掌握新城疫的初步诊断和实验室诊断。,掌握新城疫（禽流感）病毒分离培养接种材料的准备、照蛋的方法。,掌握新城疫病毒接种方法和尿囊液收获的方法。,二、,实训器材,仪器,：恒温培养箱、离心机、照蛋器、超净工作台,材料,：灭菌研钵、灭菌生理盐水（每组,50ml),、灭菌蒸馏水,100ml,、灭菌平皿（每组,1,个）、灭菌离心管（带盖）、注射器（,1ml,、,5ml,）、碘酊棉、酒精棉、酒精灯、铅笔、打孔器、蜡、蛋架、解剖盘、剪刀、镊子、,9-10,日龄鸡胚,药品,：庆大霉素、消毒药,其他,：新城疫的病死禽,三、实训方法步骤,（一）初步诊断：症状观察、流行病学调查、病死鸡剖检，取病料。,（二）病毒分离培养,1,、鸡胚的选择和孵化,发育正常的鸡胚,：可见清晰的血管和活的鸡胚，血管及分支明显，呈鲜红色，鸡胚可以活动。,死胚：,胚体固定在一端不动，看不到血管或血管消散。,日龄选择,卵黄囊接种，,6,一,8,日龄,绒毛尿囊腔接种，,9,一,10,日龄,绒毛尿囊膜接种，,9,一,13,日龄,血管注射：,12,一,13,日龄,羊膜腔或脑内注射：,10,日龄,血管注射,2,、鸡胚接种前的准备,病毒接种材料的处理,液体材料,：加抗生素置室温,1h,或冰箱,12,一,24h,，离心取上清液；过滤除菌,患病动物组织,：取病料，放入,研钵,，剪碎、研磨，,用生理盐水稀释,5,倍,，每毫升加入,2000IU,庆大，室温中,1h,或冰箱,12,24h,，,1000r/min,离心取上清液。,照蛋,取,9,10,日龄鸡胚,进行照蛋,，,以铅笔划出,气室、打孔的位置。,3,、鸡胚的接种,消毒,打孔,：用打孔器在酒精灯火焰烧灼消毒后，在气室顶端和气室下沿无血管处钻一小孔。,接种,：用注射器吸取,接种液,0.2ml,，,针头从气室下,沿小孔处插入，,深,0.5cm,，,即,已穿过了外壳膜且距胚胎有半指距离时注入。,封口,：注射后以石蜡封闭小孔，置孵育箱中直立孵育,。,4,、接种后的检查,接种后,24h,内死亡的鸡胚,，是由于接种时鸡胚受损或其他原因而死亡，应该弃去。,24h,后,，每天照蛋,2,次，如发现,鸡胚死亡立即放人冰箱,，于,5,天,内,不能致死的鸡胚亦放人冰箱冻死,。,死亡的鸡胚,置冰箱中,l,一,2h,即可取出收取材料并检查鸡胚病变。,5,、鸡胚,尿囊液,收获,器材,：超净工作台、蛋架、鸡胚、碘酊棉、酒精棉、镊子、注射器（,5ml,）、灭菌西林瓶、灭菌平皿,方法步骤,消毒气室端。,用无菌镊子去,气室顶壳,，开口直径为整个气室区大小，以无菌镊子撕去,一部分蛋壳膜,，在无大血管处撕破,绒尿膜,。,用镊子轻轻按住胚胎，以无菌吸管或,注射器吸取绒毛尿囊液置于,灭菌西林瓶,中,。（收集的液体应清亮，混浊则表示有细菌污染，丢弃。）,密封、写标签，冰冻保存，作毒种或试验用。,观察鸡胚病变。,所有材料用具煮沸后丢弃或清洗。,