河南科技大学微生物工程学课件第二章4节保藏、.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,菌种连续传代导致自发突变或回复突变是菌种发生退化的直接原因。,由于连续传代使培养物经常处于旺盛的生长状态，且每次传代时营养和环境等培养条件都是不断变化的，与处于休眠状态的培养物相比，细胞的自发突变率要高的多。菌株经过连续传代后，含突变基因的个体在数量上逐渐占优势，退化现象就逐渐显露出来。,1.菌种衰退的原因,菌种生长的条件要求没有得到满足，或是遇到不利的条件，或是失去某些需要的条件。,菌种保藏方法不当。,各种菌种的保藏法对阻止菌种变异的效果不尽相同，用效果较差的条件保藏菌种时，菌种就较易发生退化。,保藏操作不当也会影响保藏效果，会影响到菌种的变异。,2.防止菌种衰退的措施,（1）控制传代次数,（2）创造良好的培养条件,（3）利用不易衰退的细胞传代,（4）采用有效的菌种保藏方法,尽量避免不必要的移种和传代，并将必要的传代降低到最低限度，以减少细胞分裂过程中所产生的自发突变几率。,如：在赤霉素生产菌,G.fujikuroi,的培养基中，加入糖蜜、天冬酰胺、谷氨酰胺、5-核苷酸或甘露醇等丰富营养物时，有防止衰退效果。,对于放线菌和霉菌，菌丝细胞常含有几个细胞核，因此用菌丝接种就易出现衰退，而孢子一般是单核的，用于接种就可避免这种现象。,三、菌种的保藏,一个优良的菌种被选育出来以后，要保持其生产性能的稳定、不污染杂菌、不死亡，这就需要对菌株进行保藏。尽量减少传代次数，防止菌种衰退。,1.菌种保藏的原理,菌种保藏主要是根据菌种的生理、生化特性，人工创造条件使菌体的代谢活动处于休眠状态。,保藏时，一般利用菌种的繁殖体和休眠体（孢子、芽胞等），创造最有利于休眠状态的环境条件，如低温、干燥、隔绝空气或氧气、缺乏营养物质等，使菌体的代谢活性处于最低状态，同时也应考虑到经济、简便方法。,由于微生物种类繁多，代谢特点各异，对各种外界环境因素的适应能力不一致，一个菌种选用何种方法保藏较好，要根据具体情况而定。,2.菌种保藏方法,7种常用菌种保藏方法的比较,方法,主要措施,适宜菌种,保藏期,评价,冰箱保藏法,（斜面）,低温（4,）,各大类,约16月,简便,冰箱保藏法,（半固体）,低温（4,），避氧,细菌，酵母菌,约612月,简便,石蜡油封藏法*,低温（4,），阻氧,各大类*,约12年,简便,甘油悬液保藏法,20,70,低温，保护剂（20甘油）,各大类,约10年,较简便,砂土保藏法,干燥，无营养,产孢子的微生物,约110年,简便有效,冷冻干燥保藏法,干燥、低温、无氧，有保护剂,各大类,515年,繁而高效,液氮保藏法,超低温（196,），有保护剂,各大类,15年,繁而高效,*用斜面或半固体穿刺培养物均可，一般置于4,下。,*对于可利用石油作碳源的微生物不适宜。,3.菌种保藏的注意事项,菌种在保藏前所处的状态,菌种保藏所用的基质,操作过程对细胞结构的损害,4.主要的菌种保藏机构,从事原始菌株的保藏，进行有关保藏的研究；,提供保藏菌种的品种目录，定期（或不定期）出刊沟通信息；,提供菌种，促进微生物菌种的交流。,作用：,国内,1979年7月，我国在国家科委和中国科学院主持下，召开了第一次全国菌种保藏工作会议，在会上成立了中国微生物菌种保藏管理委员会（China Committee for Culture Collection of Microorganisms，CCCCM），下设六个菌种保藏管理中心：,1、普通微生物菌种保藏管理中心,真菌、细菌,病毒,中国科学院微生物研究所（北京）,中国科学院武汉病毒研究所（武汉）,2、农业微生物菌种保藏管理中心,中国农业科学院土壤肥料研究所（北京）,3、工业微生物菌种保藏管理中心,轻工业部食品发酵工业科学研究所（北京）,4、医学微生物菌种保藏管理中心,真菌,中国医学科学院皮肤病研究所（南京）,细菌,卫生部药品生物制品检定所（北京）,病毒,中国医学科学院病毒研究所（北京）,5、抗生素菌种保藏管理中心,中国医学科学院抗生素研究所（北京）,四川抗生素工业研究所（成都）,华北药厂抗生素研究所（石家庄）,新抗生素菌种,生产用抗生素菌种,6、兽医微生物菌种保藏管理中心,农业部兽医药品监察所研究所（北京）,微生物菌种保藏机构名称和缩写,中 国,缩写,名称,缩写,名称,ACCC,中国农业微生物菌种保藏管理中心,ISF,中国农业科学院土壤肥料研究所,SH,上海市农业科学院食用菌研究所,CACC,抗菌素菌种保藏管理中心,IA,中国医学科学院抗菌素研究所,SIA,四川抗菌素工业研究所,CGMCC,普通微生物菌种保藏管理中心,AS,中国科学院微生物研究所,AS-IV,中国科学院武汉病毒研究所,CFCC,林业微生物菌种保藏管理中心,CAF,中国林业科学院菌种保藏管理中心,CICC,工业微生物菌种保藏管理中心,IFFI,轻工业部食品发酵工业科学研究所,CMCC,医学微生物菌种保藏管理中心,ID,中国医学科学院皮肤病研究所,NICPB,卫生部药品生物制品监察所,IV,中国医学科学院病毒研究所,CVCC,兽医微生物菌种保藏管理中心,CIVBP,中国兽医药品监察所,YM,云南省微生物研究所,国外重要菌种保藏机构,1、ATCC：美国模式培养物（菌）保藏中心,2、NRRL：美国农业部北方开发利用研究部,3、CSH：美国冷泉港研究所,4、IAM：日本东京大学应用微生物研究所,5、IFO：日本发酵研究所（大阪）,6、NCTC：英国国立标准菌种收藏所,7、CBS：荷兰真菌中心保藏所,