第02章--病毒的分类与命名.doc

第十章 杆状病毒科（Baculoviridae）

一、 概 述
二、 杆状病毒的基因组结构与功能
（一）同源序列区
（二）重叠转录物
（三）早期转录物
（四）晚期转录物
（五）基因重组
三、病毒蛋白及功能
四、 状病毒感染的分子机理
五、 重组杆状病毒表达外源基因
六、 杆状病毒作为杀虫剂的应用
主要参考文献

一、概 述

能够感染昆虫的病毒大约有1200种，它们主要分属于以下四个病毒科：杆状病毒科（Baculoviridae）、呼肠孤病毒科（Reoviridae）、虹彩病毒科（Iridoviridae）和痘病毒科（Poxviridae）。其中杆状病毒科病毒为数最多，大约有610种，主要感染鳞翅目（Lepidoptera）、双翅目（Diptera）和膜翅目（Hymenoptera）昆虫。
由于杆状病毒具有高度专一的宿主范围，某些昆虫被感染后可发生大规模的流行病，但对人、畜和其他动植物无害，加之病毒粒子包含在蛋白晶体内，在细胞外环境中十分稳定，故可以作为一种生物杀虫剂用于农业害虫防治，目前已有成功应用的实例；由于多角体蛋白的高水平表达，其基因区段可以用来构建重组病毒以高效表达外源基因。因此，有关杆状病毒的分子生物学，倍受广大生命科学工作者的关注。
1．分类现状
杆状病毒可以分为A、B、C三个亚组（Matthews 1982）。
A亚组：核型多角体病毒（Nuclear polyhedrosis virus, NPV），在单一核内蛋白晶体中包藏有许多毒粒。根据其核壳聚集的程度又可分为单一的（SNPV）和多个的（MNPV）。
B亚组：颗粒体病毒（Granulosis virus, GV），在一般情况下，在蛋白晶体中只包藏有一个毒粒。
C亚组： 非包含体杆状核型病毒（Non-Concluded baculovirus），如椰二疣独角仙病毒（Oryctes rhinoceros），无包含体，可能缺少编码晶体蛋白的基因。
2．形态结构
杆状病毒的基本毒粒为杆状，本科病毒命名即来自于拉丁字Baculum。毒粒有囊膜，囊膜中含有丰富的类脂质，并有蛋白酶。囊膜内含有一个或多个杆状的核衣壳，核衣壳中含有病毒基因组。杆状病毒基因组为双链、环状DNA分子，低密度超螺旋。有时基因组呈多个串状，病毒DNA约40μm长，大约88~160kb，相当于大约80个非重叠基因。病毒DNA与一种碱性蛋白密切连结，这种DNA蛋白被绊缠在一个蛋白鞘内，其核心宽约32nm，长约350nm，蛋白鞘约4nm，环绕核心形成一个稀疏的壳。核衣壳含有4.5nm直径的亚单位，排列成一个开放堆积的环形结构。
苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（Autographa californica nuclear polyhedrosis virus, AcMNPV）是A亚组的代表种，研究得最为详细。它有较广的宿主范围，能感染30种鳞翅目昆虫。有关杆状病毒分子生物学的研究，大多以AcMNPV为模型。
NPV和GV的病毒颗粒有两种形式，一种是病毒颗粒被包藏在蛋白晶体内形成包涵体，包涵体的基质是由一种单一蛋白组成，在NPV称为多角体（Polyhedron），在GV则称为颗粒体。多角体和颗粒体在结构上和功能上密切相关，有时这两种名称可以互用。这种多角体可以保护病毒颗粒，使其在土壤中可以存活许多年。这一小体直径约15μ，可以在显微镜下看到。包涵体非常稳定，对细菌、热和许多化学物质包括低pH有抵抗，它可溶于硫酸钠中。在pH10时，它可被毒粒携带的蛋白酶所降解，这接近于宿主中肠的pH值。因此，毒粒可被释放，能够重新开始新的感染。这种病毒颗粒称为包涵体病毒颗粒（Concluded virus particles, CVP）或称为多角体释放出来的病毒（Polyhedron-derived viruses, PDV）。另一种病毒颗粒形式则不然，它在胞浆装配、芽生，进入血淋巴感染其它细胞。这种病毒颗粒称为胞外病毒颗粒（Extracellular virus particles, ECV）或称细胞膜芽生的病毒（Cell—released virus, CRV）。在感染过程中所产生的这两类病毒，在结构、生化和抗原性上彼此不同，最明显的是在CRV有主要糖蛋白，而PDV则没有。这种糖蛋白可引起两种类型病毒在抗原性、组织嗜性和感染性方面的差异。

二、杆状病毒的基因组结构与功能

杆状病毒的基因组为双链、环状低密度超螺旋DNA，大小80~160kb。其中研究得比较详细的是苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒。A、B、C组的DNA酶切图谱是不相同的。AcNPV DNA的酶切图谱如图10-1所示。Sma I酶切主要有4个片段，BamH I酶切主要有7个片段；Sst I酶切主要有9个片段；Xho I酶切主要有13个片段；EcoR I酶切主要有24个片段；Hind Ⅲ酶切主要有25个片段。因DNA是环状，习惯上以EcoR I片段的起点作为线状的0点来表示。

图10-1. AcNPV DNA的酶切图（引自Adang M.,J.et al.,1982）

AcNPV基因组的转录大致分为立即早期（α，感染后2小时），早期（β，感染后6小时），晚期（γ，感染后10~12小时）和晚晚期（δ，感染后15小时和以上）。除α期外，β、γ、δ期均需前一期表达的特定蛋白。迄今未发现明显的RNA剪接现象，与痘苗病毒相似，说明其基因组是连续的，无内含子。常出现重叠的RNA转录物。这些RNA具有共同的5’-端，或共同的3’-端。另一个有趣的特点是，在AcNPV基因组中，发现有5个同源序列区，称为同源序列区 (Homologous regions，hrs)。这些hrs富有EcoR I切点，所以，其基因组用EcoR I消化后，在凝胶中常出现大量较小的条带，大小在72~215bp。在其它杆状病毒，如枞色卷蛾核型多角体病毒（Choristoneura fumiferana nuclear polyhedrosis virus, CfNPV）、黄杉毒蛾核型多角体病毒（Orgyia pseudotsugata nuclear polyhedrosis virus, OpNPV）也有类似的hrs，这说明这种同源序列区在杆状病毒中有一定的共性，但其确切的生物学意义尚不清楚。

（一）同源序列区
由图10-2可以看出，hr1~5并不集中在AcMNPV基因组的一个特定区段，而是分散在全基因组的不同区段上。
DNA序列分析表明，hr1位于EcoR I片段（Pst I D）内，含4个EcoR I片段，分别为2×90bp，80bp，158bp；
hr2位于Hind III-L片段内，含7个EcoR I片段，分别为87bp, 89bp, 90bp, 108bp, 115bp, 138bp, 161bp；
hr3位于Hind Ⅲ—B片段内，有7个EcoR I片段，分别为4 72bp,88bp,111bp,148bp；
hr4位于BglⅡ—G片段内，其中1个EcoR I片段（120bp）位于EcoR I-Q和L内（图10-2B中hr4左侧），另3个EcoR I片段（79bp,90bp,215bp）位于EcoR I-L和E内（图10-2B中hr4右侧）；
hr5位于Hind ⅢQ片段中，含有5个EcoR I片段，分别为77bp,90bp,104bp,106bp,107bp。
在hr1~5的保守序列区彼此有88%的同源性；在同一hr区段内，EcoR I小片段之间的重复序列中也有高度的同源性，hr1，2，3的EcoR I小片段有80%的同源性，hr4的EcoR I小片段有65%，hr5的EcoR I小片段有87%的同源性。一般来说，在EcoR I切点周围区的序列最保守，远离的EcoR I切点的序列较不保守。

图10-2. AcNPV基因组中hrs的位置（引自Guarino et al.,1986）
A：hrs在EcoRI酶切图上的位置，以重黑纵线1~5表示，纵线以下为克隆的区段。
C为ClaI; H为HinfI; Ss为SspI; N为NsiI; X为XbaI; Sa为SalI。
B：hr1~5的EcoRI切点，酶切点之间的数字表示EcoRI片段的大小(bp)。

在EcoR I切点周围60bp是高度保守区，由12~155bp的非同源区序列隔开。在hr区段内，不论是保守序列，还是非保守序列，A+T均极为丰富，平均可达67%，而病毒基因组的A+T仅为58%。保守区中有28bp不完全的反向重复区（回文结构），最为保守。如图10—3所示，EcoR I切点为此回文序列的核心，在4个区段的保守的回文结构中只有一个bp不匹配。在hr5有2bp不匹配。

图10-3. 在hrDNA中高度保守的回文序列（引自Guarino et al., 1986） *指不匹配的bp

杆状病毒的hr序列具有增强子效应，如表10-1所示。如在质粒p39CAT的39K启动了上游不同方向插入hr区段，其下游的cat基因的表达明显增加，而且hr4的一个EcoR I小片段与整个hr区段一样，具有同样效力的增强作用。这说明AcNPV hr增强子和其它增强子有相似之处，即均有重复序列，但是后者并不是增强效应所必需的。
AcNPV hr增强子在病毒基因组中所处的位置，明显地不同于脊椎动物病毒的增强子，后者位于主要的立即早期基因的几百个bp内，其功能是先顺式（Cis）激活调节基因的转录，然后再经反式作用（Trans）于晚早期基因的转录，然而AcNPV的hr增强子分散位于病毒的全基因组，距离立即早期调节基因IE-1至少有3kb远。IE-1的转录不为其所连接的hr5序列所影响，而其晚早期基因的表达却增强1 000倍。
鉴于SV40和多瘤病毒的增强序列也是DNA的复制起始点，所以，推测AcNPV可能也有此功能。

表10-1 AcNPV hr序列对CAT基因的增强效应*
转录质粒 CAT活性(pmol/min/Mega细胞) 增强倍数
39CAT 1.2 1
39CAT-hr1+ 1 173 978
39CAT-hr- 2 075 1 729
39CAT-hr2+ 1 306 1 088
39CAT-hr2- 2 352 1 960
39CAT-hr3+ 347 289
39CAT-hr3- 243 202
39CAT-hr4左- 1 622 1 351
39CAT-hr5+ 1 272 1 060
39CAT-hr5- 1 259 1 049

*μg的上述质粒和0.1μg的pIE-1质粒转染草地贪夜蛾细胞（Spodoptera frugiperda），24小时后收集细胞测定CAT活性。实验重复3次（引自Guarino et al.,1986）。

（二）重叠转录物
杆状病毒基因组转录的另一特点是带有一套重叠的RNA转录物，其数量远远多于蛋白的数量。重叠转录物不仅发生在早期转录，也发生在晚期转录。这种重叠的转录物或有共同的5’-端，或有共同的3’-端；如AcNPV物理图32.6~41.0处的重叠转录物具有共同的3’-端；HindⅢ K-Q片段的重叠转录物也具有共同的3’-端；Hind Ⅲ Q-P的p10编码至少有4个转录物，即1.5kb，1.1kb，0.75kb和2.5kb均具有共同的5’-端。在AcNPV的81.2~85.0物理图单位区段（EcoR I N-J）至少有9个病毒RNA，大小为1.3~4.6kb，具有共同的3’-端，如图10-4所示。

图10-4. AcNPV EcoR I N-J区段的重叠转录物（引自 Oellig C et al., 1987）

（三）早期转录
采用克隆的基因片段进行DNA—RNA杂交试验表明，在AcNPV感染秋粘虫（草地贪夜蛾）细胞系1PLB—SF21 4小时后，就可发现12个主要的和30个次要的转录物。在6~8小时后，病毒特异性的转录物在数量上和程度上均有明显增加（图10-5）。

图10-5. AcNPV早期转录物的位置、大小和数量
图中虚线至重黑线分别代表RNA-DNA杂交的程度：非常弱、弱、中等、强。数字代表转录的大小（KDAb）。N.T.表示未测定。（引自Erlandson et al., 1985）

（四）晚期转录物
采用AcNPV的cDNA克隆选出的晚期转录物翻译的蛋白如图10-6所示。图中值得详细介绍的晚期蛋白有二个。一种多角体蛋白，相当于图中EcoR I片段内的32kDa蛋白，另一个是p10蛋白，相当于图中EcoR I P片段中的7.2kDa蛋白。

图10-6. AcNPV晚期蛋白示意图（引自Adang et al., 1982）
结果来自克隆的cDNA选出的晚期RNA翻译物

1. 多角体蛋白
在杆状病毒中，多角体蛋白具有特殊的重要性，其表达量极高，它占受感染昆虫全部碱性蛋白的17%。它由单拷贝基因编码，无内含子，其结构基因的侧翼区有高度保守的12nt，即AATAAGTATTTT，位于多角体蛋白起始密码上游20~70nt处。12nt保守序列上游100nt的A+T%为47%~65%，而下游则高达75%~89%。测定了7个多角体和两个p10基因的侧翼区，其保守序列如下：

T5 T5 T7
A7 A T A A G G2 A A3 T A2 T
T2 A1 C1
C1

其中字角数字表示相同序列的基因数，未表出数字者表示有9个基因均相同。
该12nt保守序列出现在两个晚期mRNA起始点附近，其详细功能尚不清楚，可能具有启动子功能。这一12个核苷酸保守区的变异可以影响其转录水平。此外，在AUG附近位置也相当保守，在-3位均为A，这也与高效表达有关。

U4 A4 C4
A A3 C3 A U G G2
C2 T2 U2
A1

OpMNPV多角体mRNA的3’-端有AATACA序列，OpMNPV p10 mRNA的3’-端也有类似的AATAA序列，这与其它真核的加工信号相类似。
多角体蛋白有243~246个氨基酸，而颗粒体蛋白为247~248个氨基酸，分子量为28 665~29 318。4种NPV、两种GV的多角体或颗粒体蛋白基因的全序列见图10-7、图10-8，蛋白质序列见图10-9。可见N端序列变异较大。LdMNPV在第9、10位缺2个氨基酸；PbGV在175位缺一个氨基酸；GmMNPV缺4个、LdMNPV缺6个氨基酸（另一篇报告不缺）。

图10-7. AcMNPV多角体基因的全序列及推导的氨基酸序列（引自Hooft et al.,1983）
-58位为转录起始，-78区、-110区各为TATA和CAAT区段，-128和-142位有两个8bp的串联重复

图10-8. 6个多角体和颗粒体基因的全序列
AcMNPV：苜缩银纹夜蛾核型多角体病毒（Autographa californi NPV）
BmMNPV：家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori NPV）
OpMNPV：黄杉毒蛾核型多角体病毒（Orgyia pseudotsugata NPV）
PbGV：甘兰菜粉蝶颗粒体病毒（Pieris brassicae GV）
TnGV：甘兰尺蠖（粉纹夜蛾）颗粒体病毒（Trichoplusia ni NPV）
(引自Rohrmann et al.,1986)

图10-9. 多角体和颗粒体蛋白序列（引自Rohrmann et al.,1986）
X: Glu或Gln; Z: Asp或Asn。GmMNPV: 大蜡螟核型多角体病毒（Galleria mellonella NPV）
LdMNPV: 舞毒蛾核型多角体病毒（Lymantria diopar NPV）其它同图10-7。

在氨基酸序列中脯氨酸是相当保守的，在60位以后的序列中13/17保守。135位的Cys是保守的，181位的Cys也是保守的。但在颗粒蛋白中Cys在185位。酸性（Asp和Gln）和碱性（Arg和Lys）氨基酸各有15%。
多角体蛋白和颗粒体蛋白的二级结构预测见图10-10，有7个保守α-螺旋区（A-G）。多角体蛋白与颗粒体蛋白在二级结构上有某些不同：4个多角体蛋白中，α-螺旋40%~48%；β摺叠为33%~36%；β-回转5%~8%，随机卷曲13%~15%；而在颗粒体蛋白中，α螺旋为55%，β摺叠为9%~11%，β回转为11%~13%，随机卷曲为23%。在保守的Cys和135的Pro附近的β回转区这两种蛋白都高度保守。

图10-10. 多角体蛋白质二级结构预测（引自Rohrmann et al.,1986）
H：α螺旋。E：β折叠。T：β回转。C：随机缠卷。虚点代表与AcMNPV相同。
有7个α螺旋区，由线条框出，并以A—G表示之。

在蛋白的疏水区和亲水区也相当保守，40位、220位是两个高度保守的亲水区，在40位区域有较强的抗原决定簇。
虽然多角体蛋白和颗粒体蛋白氨基酸序列有50%的差异，但它们的三维结构是高度保守的。
2. p10蛋白
p10蛋白过去称为7.5KDA、7.2KDA、8KDA、10KDA。它是一种糖蛋白。p10蛋白的表达量也是十分高的，其基因位于EcoRI P片段内。p10有93个氨基酸，其分子量为10 132D。UAA位于+255位。p10多肽中无Met、His、Trp、Tys和Cys。TAU前100bp内A+T%为83%，而编码区为58%。有两组重复序列，一是在ATG上游，GCATAAACTC，相似的序列GCACAAACT也出现在多角体蛋白基因的启动子区域。mRNA起始于-64位。推测TATAAT序列位于-86位。CAATAT序列位于-160位（图10—11）。p10蛋白的功能尚不清楚，可能与包含体有关。

图10-11. p10蛋白基因的核苷酸序列和推导的氨基酸序列
-64位箭头表示转录起始。ATG前标出7bp的反转重复序列，AATAAA（=处）表示聚(A)信号，（=）（→）表示两组重复序列（引自KDAuzio et al.,1984）。

3. p39
p39蛋白是AcNPV的主要衣壳蛋白，位于56.6~58.0基因图单位。转录始始区有A/GTAAG序列（Thiem et al., 1989a）。其86~120位与人轮状病毒VP6有同源序列（Both et al.,1984）。
4. p6.9
p6.9是一种碱性核蛋白，富有Arg（Wilson et al., 1987）。
5. CG30
Thiem等（1989b）发现，在AcNPV主要衣壳蛋白基因VP39的下游有一CG30基因，相当于OpNPV的OP基因，它们编码的蛋白具有转录调节蛋白的特点，有2个结合核酸的结构域：一为“锌指”（Zinc finger）结构域，C—X2—C—X11—C—X2—C；另一为“Leu拉链”（Leu zipper）结构，（Leu-X7）7。

（五）基因重组
根据酶切分析，在AcNPV中存在大量的基因型突变株，包括DNA缺失、插入，以及含有宿主细胞DNA插入的突变株。一种常见的现象是，在关系密切的杆状病毒间发生重组，如AcMNPV与RoMNPV之间，以及AcMNPV与GmMNPV之间。前者在草地夜蛾细胞培养中的重组率为7%。高浓度病毒的连续传代也可获得突变体，且常有额外的DNA插入，大小在1.5kb和18kb之间。另外，还有一种FP（Few polyhedra）突变株，这类突变株常是在病毒基因组的特定区域内（HindⅢ I）插入了一段宿主细胞的DNA。

三、杆状病毒感染的分子机理

在16世纪时，昆虫杆状病毒感染称之为黄疸。幼虫感染后有典型的症状，感染后24小时内停食，不辨方向，行动缓慢，继而外皮发生颜色改变，常变得有光泽，脆性增加，体液可从破裂处溢出，内容主要是病毒的多角体蛋白，常呈白色。病程约5天。病毒可以侵犯脂肪体、皮下组织、气管基质、肌肉、神经纤维、神经节和心包细胞等。
幼虫常因食用带有NPV和GV的多角体而感染。幼虫的肠液呈碱性，在此条件下，多角体蛋白被降解，释放的病毒颗粒为PDV。随后PDV出现在中肠的柱状细胞微绒毛处，病毒以其外膜与微绒毛融合而进入细胞，并在核内繁殖。此时，虽然有多角体蛋白合成，但不形成实体。已带有包膜的病毒在基底膜积累，进入血淋巴，从而感染血细胞，病毒可从血细胞芽生。芽生的CRV在pH中性条件下即可感染其它细胞。CRV主要是在机体内细胞与细胞之间传播与感染，而PDV主要是在昆虫与昆虫之间传播与感染。但是，CRV经口也有感染性。
CRV对草地贪夜蛾（Spodoptera frugiperda）或粉纹夜蛾（Tricho-lusiani）细胞有很高的感染性，病毒经过细胞融合可进入胞内，然后很快就脱衣壳，其病毒基因组进入核内。病毒在细胞核内繁殖。有一种64kDa的糖蛋白，对CRV在组织培养中与细胞相互作用是很重要的。在PDV中未发现这类蛋白。NPV的DNA是具有感染性的，病毒DNA须成环状才有感染性，DNA结合蛋白可以增强其感染性。病毒DNA感染宿主范围与活病毒是相同的。AcMNPV的研究表明，在感染后6小时病毒DNA即开始复制，CRV在感染后10小时产生，12小时后可以发生多角体蛋白，但是，病毒包涵体要到感染后18~24小时才能发现。在病毒感染后36~48小时细胞外病毒量最高，但多角体蛋白却在4~5天内继续增加，直至细胞溶解。
病毒的繁殖周期见图10-12。

图10-12 杆状病毒繁殖周期（引自Luchow et al.,.,1988）

近年来在基因工程的实验中，以杆状病毒为载体，高效表达外源基因，日益受到人们的重视，原因是：
（1）杆状病毒对人畜是安全的，构建重组杆状病毒也不需要经过任何具有致癌潜力的转化细胞系；
（2）杆状病毒有庞大的基因组，外源基因的插入容量较大，重组病毒仍能在昆虫的幼虫或细胞培养上正常繁殖；
（3）多角体基因的启动子效率甚高，本身的表达水平高达1mg/ml/1×106~2mega细胞，达整个细胞蛋白的50%左右，外源基因的表达水平可高达500μg/ml；
（4）多角体基因编码区为非必需区，并不影响细胞外病毒的复制，外源基因插入灭活后形成非包含体的病毒Occ-，后者形成的空斑明显不同于Occ+病毒形成的空斑，依此标志极易选出重组病毒；
（5）目前凡由杆状病毒载体表达的外源蛋白，在抗原性、免疫原性和功能上均与天然的相似。
目前，许多外源基因，包括细菌、病毒、植物和动物的基因，用杆状病毒载体均获得高水平的表达（表10-3）。重组病毒构建的基本原理与痘苗病毒载体相类似（见图10-13）。

表10—3 外源基因在重组昆虫病毒中的表达
基 因 来 源 大小(bp) 蛋白质(kDa) 生物学活性 文 献
AcMNPV多角体蛋白 基因组 1 050 29 磷酸化，核内 Hooft et al., 1983
蓝舌病毒，VP2 cDNA 2 800 93 免疫原性（VP2） Inumaru et al., 1987
蓝舌病毒，VP3 cDNA 2 800 92.5 中和活性（VP3） Inumaru et al., 1987
果蝇KDArueppel cDNA — 72 结合ssDNA和dsDNA抗原
基因产物 性磷酸化，核内 Ollo et al., 1987
CAT 基因组 785 27 CAT活性，抗原性 Luchow et al., 1988
CAT 基因组 — 27 CAT活性 Carbonell et al., 1985
β半乳糖苷酶融合蛋白 基因组 9 200 120 β—gal活性 PennocKDA et al., 1984
β半乳糖苷酶 基因组 3 000 110 β—gal活性抗原性 Summers et al., 1987
cDNA 572 25/22 抗原性 Lanford et al., 1987
HBcAg cDNA 1 236 29/25 抗原性，糖基化， Lanford et al., 1987
形成脂蛋白颗粒
人cmyc原癌基因 cDNA — 64/61 抗原性，磷酸化核内 Miyamoto et al., 1987
人CSF-1 cDNA — 34 CSF—1活性，抗原性， Inlow et al., 1987
糖基化，分泌二聚体
HuIFN—α — — 19.5 IFN活性，抗原性，信 Maeda et al., 1987
号肽被切割，分泌
HuIFN—β 基因组 780 17/20.5 IFN活性，抗原性，糖 Smith et al., 1983
基化,切割信号肽,分泌
HIVenv cDNA 2 700 150/120 抗原性，糖基化蛋白酶 Hu et al., 1987
130/41 加工
HIVenv cDNA — 160/120 抗原性，免疫原性，糖 Cochran et al., 1987
基化
HIVgag cDNA 1 818 55/40 抗原性，蛋白酶加工 Madisen et al., 1987
HIVgag-pol cDNA 3 114 24/55/40 抗原性，蛋白酶加工 Madisen et al., 1987
HTLV-1p40 cDNA 1 750 40 HTLV—1LTR启动子 Jeang et al., 1987
的反式激活，抗原性，
磷酸化，核内
人IL—2 cDNA 1 000 16/15.5 IL—2活性，抗原性， Smith et al., 1985
信号肽被切割，分泌
人副流感病毒 cDNA 1 716 70 HA，HAd活性，HA Coelingh et al., 1987
抑制活性，抗原性，
免疫原性，中和活性，
保护性，糖基化，细
胞表面
流感病毒多聚酶PA cDNA 2 200 87 抗原性 St Angelo et al., 1987
流感病毒多聚酶PB1 cDNA 2 300 93 抗原性，形成PB1— St Angelo et al., 1987
PB2复合物
流感病毒多聚酶PB2 cDNA 2 300 85 抗原性，形成PB1— St Angelo et al., 1987
PB2复合物
流感病毒（鸡瘟）HA cDNA 1 750 — HA, HAd活性 KDAuroda et al., 1986
溶血活性
抗原性
免疫原性
中和活性
保护性
糖基化，蛋白酶切
割细胞表面
流感病毒（A/PR8/ cDNA — 65 HA，HAd活性， Possee et al., 1986
34）HA 糖基化，蛋白酶
切割，细胞表面 Matsuura et al., 1987
ICMV糖蛋白前体 cDNA 3 300 72 抗原性，糖基化 Matsuura et al., 1986
GPC 细胞表面
LCMVN cDNA 3 300 62 抗原性
N.crassa激活蛋白 基因组 2 900 100 位点特异性结合 Baum et al., 1987
DNA
菜豆phaesseolin cDNA 1 400 51/45 抗原性，糖基化分泌 Bustos et al., 1987
多瘤病毒T抗原 cDNA — 100 起点特异性结合 Rice et al., 1987
DNA，抗原性
伪狂犬病 — — 46 抗原性，免疫原性 Thomsen et al., 1987
gp50