肠道病毒71型灭活疫苗(课堂PPT).ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,.,*,Enterovirus type 71 inactivated vaccine,课程：生物技术制药,班级：,2013,生技一班,肠道病毒,71,型灭活疫苗,刘雨桐,1,.,EV71,图片,肠道病毒,71,型,(enterovirus 71,，,EV71),为单股正链,NA,病毒，是小,NA,病 毒 科 肠 道 病 毒 属 中 的 重 要 成 员 之 一。,EV71,基因组由,7400,多个核苷酸构成，包含一个开放读码框，编码大约,2200,个氨基酸的多聚蛋白。该多聚蛋白可被进一步水解成,P1,、,P2,和,P3,三个前体蛋白，,P1,前体蛋白编码,VP1,、,VP2,、,VP3,和,VP4,四种结构蛋白，,P2,、,P3,前体蛋白编码,7,种非结构蛋白,(2A,2C,和,3A,3D),EV71,包括,A,、,B,和,C 3,种基因型，,11,个基因亚型，每种亚型感染均可引起手足口病,(hand,，,foot and mouth disease,，,HFMD,EV71,简介,2,.,01,02,02,02,03,人血浆中含有的中和抗体可在细胞基质上中和不同的,EV71,。可减少或消除毒株攻击乳鼠后的致病及死亡现象，而在毒株攻击乳鼠的同时或其后限定的时间内注射含,EV71,中和抗体的人血浆，可起到保护乳鼠的作用,EV71,感染或疫苗免疫动物后产生的抗体具有病毒中和活性；中和抗体在体外与,EV71,中和后，可减少或消除毒株攻击乳鼠后的致病性；,EV71,疫苗除能诱导中和抗体外，还能诱导细胞免疫应答，其也具有免疫保护作用。,EV71,疫苗可行性,3,.,01,02,03,04,全病毒灭活疫苗,减毒活疫苗,基因工程疫苗,病毒样颗粒,(VLPs),疫苗,肠道病毒,71,型疫苗分类,05,合成肽疫苗,4,.,为什么选择灭活疫苗,生产工艺成熟，具有良好的免疫原性及安全性，众多研究证明灭活,EV71,病毒疫苗较其他形式疫苗，如,VP1,亚单位疫苗、,DNA,疫苗、,VLP,疫苗有更好的免疫效果，是,EV71,疫苗发展的主要类型。目前进入临床研究的,5,株,EV71,疫苗均为灭活疫苗，而临床试验结果表明这些疫苗均有较好的免疫原性及安全性。（,2014,）,在中国内地,1998,年后流 行株均为,C4,，故中国企业研发的疫苗均以,C4,型毒株作为疫苗株。,5,.,1,2,二倍体细胞疫苗生产工艺：疫苗株 株在人二倍体细胞（株）上适应传代，收获病毒液，经灭活、浓缩、层析过滤，吸附氢氧化铝佐剂后，制备成为肠道病毒 型灭活疫苗成品。,细胞疫苗生产工艺：疫苗株株或株感染 细胞后，收获病毒培养液，经超滤浓缩、凝胶过滤、离子交换层析纯化、甲醛灭活，吸附氢氧化铝佐剂后，制备,7,灭活疫苗成品。,灭活疫苗两种类型,6,.,01,病 毒 液 的培养,及 灭 活,02,EV71,病毒的纯化、检测,及制备,03,灭活疫苗免疫原,性检测及保护性研究,灭活疫苗制备一般流程,7,.,1,2,病毒液的灭活收获病毒液按（）加入福尔马林，灭活，并每间隔,2,取样，采用微量滴定法进行感染性滴度检测以观察其灭活效果。,病毒微量滴定法：将灭活后的病毒液按 倍梯度稀释，以,孔置于孔平底细胞培养板，每个稀释度接种孔，每孔按,细胞,培养液加入细胞，、时观察记录病变，超过细胞病变孔判为病变阳性,病 毒 液 的 灭 活,8,.,EV71,病毒的纯化、检测及制备,分 析,分 析,检测,将纯化后的产品进行灭活疫,苗成品的制备,01,02,03,04,9,.,01,02,03,04,膜分离技术,超速离心,凝胶过滤层析（,gel filtration chromatography,，,GF,）,离子交换层析（,ion-exchange chromatography,，,IEC,）,肠道病毒,71,型灭活疫苗,分离纯化方法,05,疏水相互作用层析（,hydrophobic interaction chromatography,，,HIC,）,10,.,03,Options,02,Options,01,Options,疫苗标准方面,国家质量控制和审评部门结合,2010,版,中华人民共和国药典,和修订企业注册标准中对预防性疫苗的要求，对申报临床试验的灭活疫 苗 毒 株、原 液 和 成 品 标 准 进 行 规 范 和 统一。对种子库要求 疫 苗 主 要 保 护 区 氨 基 酸 序列在三级种子批均保持一致；,疫苗纯度控制方面,在疫苗纯度控制上，高效液相色谱法（）规定颗粒峰面积不低于，疫苗动物效力统一修定为以针后半数有效量（）作 为 效 力 指 标，保证了疫苗生产的一致性和有效性；,标准品方面,中国食品药品检定研究院（中检院）联合家企业已完成了疫苗中和抗体检测标准品和疫苗抗原定量标 准品的研制（国生标字、）。正在开展的疫苗标准研究 包括：比 活 一 致 性 标 准，细 胞 残 余,N,标准等；开展的疫苗标准品研究 包括疫苗效力标准品和冻干标准中和抗体检测株等,11,.,目前，亚洲地区进入临床试验阶段的灭活疫苗有,5,家,(,其中,3,家来自中国大陆，另外,2,家分别来自我国台湾和新加坡,),，他们采用的病毒株、细胞系、培养技术和免疫佐剂有所不同,(,表,1),北京微谷生物医药有限公司,(Vigoo),、中国科兴生物制品有限公司,(Inovac),和中国医学科学院,(CAMS),所研制的疫苗在,2013,年已完成了临床,期试验，而我国台湾国家卫生研究院,(NH,I),和新加坡,Inviragen,公司研制的疫苗正在进行临床,期试验,(,表,2),。,12,.,Vigoo,以,160,、,320,和,640 U,剂量加以氢氧化铝佐剂的福尔马林灭活疫苗随机接种包括,12,36,月龄儿童和,6,11,月龄婴儿在内的,12 000,名受试者。结果显示，疫苗仍然具有较好的疫苗效能，可使约,90%,的受试者能抵御,HFMD,，,80%,的抵御疱疹性咽峡炎或相关神经症状。,Sinovac,分别以,400 U,加以氢氧化铝佐剂的疫苗或安慰剂随机接种,10 077,名受试者，其疫苗效能可达,88%,以上。,CAMS,则对,12 000,名,6,71,月龄的婴儿和儿童随机接种了,100 U,疫苗或安慰剂，疫苗也显示出了良好的安全性和免疫原性，但具体信息不详,NH,I,研制的疫苗不仅对,EV71B1,、,B5,和,C4A,亚型具有较强的中和活性，对柯萨奇病毒,A16,也有一定的交叉中和活性,在,期试验中,13,.,中国医学科学院医学生物学研究所全球首个针对肠道病毒,71,型（,EV71,）感染所致手足口病的创新疫苗,通用名称：肠道病毒,71,型灭活疫苗（人二倍体细胞）,英文名称：,Enterovirus Type 71 Vaccine,Inactivated,（,Human Diploid Cell,）,（,1,）疫苗毒种是我国流行株，具有良好的免疫原性和抗原交叉反应性。,（,2,）细胞基质采用人胚肺二倍体细胞，有效保证在儿童群体中使用的安全性。,（,3,）生产技术采用细胞工厂大规模培养技术，有效提高疫苗产能和质量。,（,4,）建立的疫苗保护性评价婴猴动物模型，为开展疫苗保护性效果的系统分析和评价创造基础条件。,（,5,）对不同基因型毒株的交叉保护试验，进一步证明该疫苗对多数基因型别的,EV71,感染均具有保护效果。,（,6,）疫苗诱导免疫反应的相关研究，为进一步阐明,EV71,感染致病机制及疫苗免疫学机理提供了大量数据和资料。是目前国内外新型疫苗研发中的重要创新点。,14,.,北京科兴生物制品有限公司自主研发的预防用生物制品,1,类新药益尔来福获批,通用名称：肠道病毒,71,型灭活疫苗（,Vero,细胞）,英文名称：,Enterovirus Type 71 Vaccine,Inactivated,（,Vero Cell,）,全球首创预防用生物制品,1,类新药,对,EV71,所致手足口病的保护率高达,94.6%,对,EV71,所致手足口病重症和住院病例保护率为,100%,稳定性良好，有效期长达,3,年,不添加防腐剂与稳定剂，进一步降低安全风险,全球最高标准控制,Vero,细胞宿主蛋白与,DNA,残留,15,.,16,.,灭活疫苗仍然存在问题,1,2,3,EV71,免疫保护机制复杂，除体液免疫外，细胞免疫也发挥着重要的作用。然而，灭活疫苗主要诱导的是体液免疫，细胞免疫不够充分。,灭活疫苗生产和运输成本高昂。疫苗效力较高而疫苗价格较低的常规免疫才符合我国的成本效益，这可能会制约灭活疫苗的应用。,EV71,本身存在抗体依赖性增强感染现象，不恰当的疫苗接种有可能会增加重症病例的风险。,17,.,参考文献,1.,梁燕,赵红玲,刘龙丁,廖芸,董承红,纳锐雄,et al.,肠道病毒,71,型灭活疫苗的规模化制备和免疫原性研究,J.,中国病毒病杂志,.2012(06).,2.,梁争论,.,我国肠道病毒,71,型灭活疫苗研发现状,J.,中国病毒病杂志,.2012(06).,3.,马洁,邓永强,秦成峰,秦鄂德,.,肠道病毒,71,型疫苗研究进展,J.,军事医学,.2015(07).,4.,王一平,姚昕,毛群颖,梁争论,.,肠道病毒,71,型疫苗质量控制研究进展,J.,微生物学免疫学进展,.2015(05).,5.,肖慧,明平刚,陈晓琦,徐葛林,.,肠道病毒,71,型灭活疫苗分离纯化方法的研究进展,J.,中国生物制品学杂志,.2015(10).,18,.,大,谢,谢,家,！,19,.,