单克隆抗体技术.pptx
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1、汇报人:陈海云汇报人:陈海云 吴亚荣吴亚荣指导老师:余为一指导老师:余为一 主要内容主要内容:一、概念一、概念二、单克隆抗体的原理二、单克隆抗体的原理三、单克隆抗体的制备三、单克隆抗体的制备四、单克隆抗体的应用四、单克隆抗体的应用 1975年年 Kohler&Milstein创立单克隆抗体技术,获得创立单克隆抗体技术,获得19841984年诺贝尔医学和生理年诺贝尔医学和生理学奖学奖 创立者创立者:一、概念一、概念 多克隆抗体(多克隆抗体(PcAbPcAb):病原微生物和天然抗原含):病原微生物和天然抗原含有多种抗原决定簇,刺激机体免疫系统后,可形有多种抗原决定簇,刺激机体免疫系统后,可形成针对
2、不同抗原决定簇的混合抗体。成针对不同抗原决定簇的混合抗体。单克隆抗体(单克隆抗体(mAb)mAb):单个淋巴细胞克隆产生,针:单个淋巴细胞克隆产生,针对一种特定抗原决定簇的抗体对一种特定抗原决定簇的抗体。单抗和多抗产生区别单抗和多抗产生区别小鼠多克隆抗体(多克隆抗体(多克隆抗体(多克隆抗体(PcAbPcAbPcAbPcAb)与单克隆抗休()与单克隆抗休()与单克隆抗休()与单克隆抗休(McAbMcAbMcAbMcAb)的比较)的比较)的比较)的比较项目项目PcAbPcAbMcAbMcAb抗体的制备抗体的制备用免疫血清用免疫血清用杂交瘤技术用杂交瘤技术抗体的浓度抗体的浓度0.1-1.0mg/ml
3、0.1-1.0mg/ml(血清)(血清)10-100g/ml(10-100g/ml(培养上清培养上清)1-10mg/ml1-10mg/ml(血清)(血清)5-20mg/ml5-20mg/ml(腹水)(腹水)均一性均一性抗体组成复杂抗体组成复杂抗体组成单一抗体组成单一特异性特异性抗体批间有差异抗体批间有差异抗体批间无差异抗体批间无差异识别的抗原决定簇识别的抗原决定簇多多单一单一二、基本原理二、基本原理三、制备流程三、制备流程:材料准备材料准备实验动物实验动物:与骨髓瘤细胞供体同一品系的动物与骨髓瘤细胞供体同一品系的动物(BALB/cBALB/c小鼠小鼠 6-8 6-8周龄周龄 20-25g 20
4、-25g)抗抗 原原:可溶性抗原或颗粒性抗原可溶性抗原或颗粒性抗原B B淋巴细胞:小鼠脾脏淋巴细胞:小鼠脾脏骨髓瘤细胞:与实验小鼠同一品系的动物骨髓瘤细胞:与实验小鼠同一品系的动物 细胞株保持细胞株保持HGPRTHGPRT缺陷状态。缺陷状态。常用骨髓瘤细胞常用骨髓瘤细胞SP2SP2/0 0、NS1NS1等。等。材料准备材料准备饲养细胞饲养细胞饲养细胞饲养细胞:在组织培养中,单个或少数分散的细胞不易生长在组织培养中,单个或少数分散的细胞不易生长 繁殖,若加入其他活细胞则可促进这些细胞生长繁殖,若加入其他活细胞则可促进这些细胞生长 繁殖,所加入的细胞称饲养细胞。繁殖,所加入的细胞称饲养细胞。小鼠腹
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