NY∕T 1859.10-2017 农药抗性风险评估 第10部分：专性寄生病原真菌对杀菌剂的抗性风险评估(农业).pdf

ICS 65.100 B 17 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 1859.10一2017农药抗性风险评估第10部分:专性寄生病原真菌对杀菌剂抗性凤险评估Guidelines on the risk assessment for pesticide resistance一Part 10: The risk assessment for fungicide resistance in obligate parasitic fungi 2017-06斗2发布2017-10-01实施gs: 中华人民共和国农业部发布前言NY / T 1859 (农药抗性风险评估拟分为如下部分:第1部分.总则，一第2部分，JjfJ郎r杀菌剂抗药性风险评估;一一第3部分.扬虫对拟除虫菊Il类农药抗药性风险评估，一一第4部分乙航乳酸合成酶抑制剂类除草剂抗性风险评估，一-第5部分十字花科蔬菜小菜峨抗药性风险评估，第6部分灰45病菌抗药性风险评估，第7部分.乙毗事I酶A竣化j除草剂抗性风险评估;第8部分:场每病菌抗药性风险评估，第9部分:扬虫类对新烟碱类杀虫剂抗性风险评估，第10部分:专性寄生病原真菌对杀菌剂抗性风险评估;第11部分植物病原细菌对杀菌剂抗性风险评估;第12部分小麦田杂草对除草剂抗性风险评估。本部分为NY/T1859的第10部分。本部分按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本部分1农业部科1植业笛型司提出并归口。本部分起草单位农业部农药检定所、中国农业大学。本部分主要起草人:刘四莉、何静、文IJ鹏飞、杨峻、黄中乔、陈立平、张;l:II1。NY/T 1859. 10-2017 I NY/T 1859. 10-2017 农药抗性风险评估第10部分:专性寄生病原真菌对杀菌剂抗性风险评估1 范围本部分规定了本部分适用于白粉菌药登记试验。其他试验可3 3.1 3.2 3.3 3.4 可完全打13. 5 抗性指数resishmce factor 、方法及抗药性风险的笆理。的杀菌剂抗性风险评估的农1日于本文抗药性菌株对该药剂的敏感性参数(一般以EC50或MIC表示)与其亲本或野生敏感1if株敏感性参数或与敏感基线的平均ECso或MIC的比值。3. 6 适合度fitness 病原菌在存活、生长、致病和l繁殖等方T町的l力。1 NY!T 1859.10-2017 37 交互抗药性cross-r四istance病原Ji对某一杀菌剂产生抗性时，由于相同或相近的抗药性机制，也对其他未接触过的杀菌剂表现抗性的现象，也称正交互抗药性.3. 8 负交互抗药性negative cross-resistance 病原呈WM一种杀菌剂产生抗性l时，对其他杀菌剂表现为更加l敏感的现象。4 抗性风险评估4. 1 抗性凤险的影响因子4. L 1 药剂多作用位点、非选择性杀菌剂如l硫黄、石硫合剂、百菌711等在理论上属于低抗性风险的药剂，单作用位点、选择性强的杀菌剂如磁菌酶、I喘菌附、l览氧菌醋、11比I些磁菌醋等甲氧基丙烯殷醋类杀菌剂，多菌灵、苯菌灵、甲基硫菌灵等苯并咪l哇类杀菌剂理论上属于高抗性风险药剂。用于白粉病、锈病防治的其他杀菌剂，直n三l峰回、己l些醉、戊略醇、苯隧甲环l座、脱1t1庄、C环l峰等三l些类杀菌剂，丁苯吗111*、十三吗l淋等l吗l淋类杀菌剂，l%在l驼i庭醇、乙峨lii)，1叶锈特等杂环类杀菌剂理论上属于中等抗性风险的药知1.4. L 2 靶标生物专性寄生病原真Ji指在离休条件下尚不能利用培养基培养，只能寄生在寄主作物上才能生存的病原Ji菌.这类真菌数盘较少，但危害严重，如白粉郎和l锈茵等。其中，主要包括引起小麦臼粉病的禾本科布氏白粉菌小麦专化型(Blumeriagrarnillis f. sp. lritici)，引起黄瓜臼粉病的瓜类单丝壳白粉菌CErysiphe cichoracearum)，引起葡萄臼粉病的葡萄钩丝壳菌(U7IcinuLa71ecalo斤，引起小麦锈病的条J柄锈菌小麦专化型(PucciniastriiJormis f. sp. lrici)、隐匿柄锈菌小麦专化型(P.recondita f. sp. lritici)、禾锈菌小麦专化型(卫gramillisf. sp. tritici)等，该类真菌离体培养较为闲难，但其病菌繁殖周期较短，:j!侵染频繁，主要通过气流传播，国际杀菌剂抗药性行动委员会(FungicideResistance Action Committee, FRAC)将其归为高抗药性风险的病原菌。4. L 3 农事操作及生态环境风险大面积种植感病品种以及单作或连作等有利于病害发生和流行的种植方式和l生态环搅条件均1JD抗药性风险;单一使用作用机理相同的杀菌剂以及增加药JliJ选择压力的施药方法均会增加抗药性风险。4. 2 抗性风险评估内容4. 2 1 敏感基线的建立从未使用过某种药剂及其相同作用书LJJIl药剂的多个代表性地区采集供试菌株(注60株)。按照NY/ T 1156. 4,NY/ T 1156.11和NY/ T 1156. 15中的盆栽法或者离体组织法测定其对该药剂的敏感性(ECso或MIC)。如果供试菌株敏感性呈单峰分布，则这些菌株可视为野生敏感菌株，其对药剂的敏感性(ECso或MIC)的平均值可作为靶标菌对该药剂敏感基线的EC，o或MIC参数.具体方法见附录Ao4.2.2 药剂特性及交互抗性明确待评估药剂所属类型、作用方式及;ElA活性和l持效期，调查该药剂(或同类药剂)在当地使用的历史、fJI!月频率;同类药剂是否产生抗药性的现象;当地是否采取了抗药性治理措施。参考以上调查结果，并依据对敏感菌株和抗药性菌株毒力测定结果，分析该药剂是否与生产上常用药剂之间具有交互抗药性或负交互抗药性。4. 2. 3 靶标病原菌产生抗药性的潜能采户IJ紫外诱变、药剂驯11化的方法对3个以上代表性亲本菌株在室内进行抗药性菌株的筛选，紫外2 NY/T 1859. 10-2017 诱变时以紫外线!射后抱子存活率为5%-10%的!照射剂茄;处理，以杀菌知1MIC剂量;进行抗药性突变体筛选，药剂驯化时须先将健康作物111.片(或l叶企)在接近MIC浓度的药液rl浸泡，之后将靶标菌袍子悬浮液接种于带药11. 1.片表面，培养数天，待其发病并产生袍子(叉子包子或组袍子)后，将袍子洗!况重新接*1到用药液处理!过的健康叶片上，并逐渐提高药剂浓度。在含药浓度逐步提高的带药!叶片上连续培养多代之后，将在含MIC药剂浓度之上还能生伏的菌体，确定为疑似突变体.将疑似突变体在无药健康叶片上转接继代培养3代后测定;Jtj(.t杀菌剂的敏感性，抗药性生物学性状能够稳定遗传的菌株作为抗性J!ti株。靶标菌产生抗药性的潜能以抗药性突变频率和l抗性指数表示.抗药性突变频率X按式(1)计算。x=是X100 . . . . 式中，X一一抗药性突变频率，单位为百分率(%); N，一一筛选获得的抗药性菌体数量，单位为个，N2 用于抗药性筛选的供试!IJl标病原菌群体数盘总利，单位为个。抗性指数(resistancefactor，RF)按式(2)计t): RF=去王.rl, E. 抗性J!ti株对该药剂的敏感性(EC，o)，单位为微克每毫刑(g/mL); E2 亲本菌株对该药剂的敏感性(Ec，.，)，单位为微克每运到(g/mU.4.24 抗药性菌株的适合度测定测定靶标病原前的存活能力、抱子产生能力、于包子萌发能力、致病力和竞争力等适合皮相关的生物学性状指标，比较抗药性菌株和敏感菌株(包括亲本菌株)有元差异.具体方法见附录B。如果抗性群体的适合度明显低于敏感群体(包括亲本菌株)，则抗性群体在田间难以形成优势利群.如果抗性群体的适合度接近或高于敏感群体(包括主持本菌株)，则在药剂选择压力情况下，抗性群体在日l间能够形成优势利1伴。如果抗性群体的适合度明显高于敏感群体(包括亲本菌株)，在没有药剂选择压力的情况下，抗性群体在田间也容易形成优势种群.4. 2 5 抗性风险级别分析依据抗药性m;i株的突变频率、抗性指数和l适合皮测定结果，并结合交互抗药性、药剂的活性及;H-作用机制和l病害特征等研究结果，预测药剂在田间相广使用后，辑:1标菌对其产生抗性的风险。4.2. 5. 1 高等抗性风险如果药剂持效JYH王、作用位点单一或者作用机制不明、田间有同类药I使用的历史、靶标病原菌易于产生抗药性突变、抗性指数很高，抗药性医I株适合度接近或高于敏感群体(包括亲本菌株)，且防治对象为气流和雨水传捕的多循环病窑，则4ll标商对该药剂的抗性风险级别为illi等风险。4.2.5.2 中等抗性凤险如果药剂作m位点单一或者作用机制不明、田间有同类药剂1ll!用的历史、把标茵易于产生抗药性突变、抗性指数低中等、抗药性国I株适合度低于或主主近敏感1排体(包括亲本J!ti株)，则相!标f;对该药剂的抗性风险级别为中一高等风险。4. 2. 5. 3 低等抗性风险如果药剂为多作用位点或药剂虽为单作用位点，但旺l间没有同类药剂使用的历史、抗药性商株突变频率较低、抗性指数低、抗药性B株的适合度显低于敏感i附体(包括亲本商株)，贝I1明标商对该药剂的抗性风险级别为低等风险。3 NY 11 1859.10-2017 5 抗性凤险管理5. 1 抗性风险的可接受性确定抗性风险的级别后，要考虑抗性风险的可接受性.属于低等抗性风险级别的药剂，一般不锦要采取抗性管理措施;属于中等抗性风险级别的药剂，必要时应考虑采取抗性风险管理措施;属于高等抗性风险级别的药剂，应采取抗性Jx险管理措施。5.2 抗性风险管理的一般原则措施，饵在产品标签和使用说明书料。对于低等抗性风险和l使用说明书上剂可分别与琳、十三吗琳等1吗换使用时药剂组合5.3.6 监视j抗药性发生和发展的产品提供抗性风险评估资料及管理，并在续展登记n才提供抗药性l监测资.对于单作用杀茵l挫等三l些类季节使用3甲级级基丙烯酸酣类杀菌剂或丁%:吗，延缓抗药性的发展。轮对于高、中等抗性风险的杀商剂应实施抗药性发生和发展监测。5. 3. 7 产品标签标注在产品标签上标注抗性风险级别，对南、rl.等抗性风险的杀菌剂应标f!Jj相应抗性风险管理的措施。4 附录A(规范性附录)敏感基线的建立NY/T 1859.10-2017 A.1 建立敏感基线是风险评估中的-项最基本的内容，可以作为衡量田间抗药性菌株发生和发展的重要依据。从未施用过供试药剂及其同类药剂的不同地区采集靶标菌的病样，进行菌株的分离和纯化，测定该病原菌群体对供试药剂的敏感性，建立敏感基线。A.2 敏感基线建立要求有一定数量的样本盐，Leung等(993)认为建立敏感基线所需的样本大小必须满足以后进行敏感性检测时90%以上的敏感菌株分布在该敏感基线内。相关研究中一般进行敏感性测定所选用的样本大于60株。该样本分别代表了不同地区的样本特点。A.3 将所有供试菌株对某种药剂的敏感性CEC50)划分成不同区段(一般5个7个区段)，首先确定全部供试菌株对某种药剂的敏感性CECso)分布范围例如从较小的a到较大的b)，再写出浓度区段(等差数列)，+Cb)/n，a十2Cb-a)/ n ，a十3C!J-a)/，+4Cb-a)/ n，十Ck-1) X Cb-a) / n Cn为区段数，走为数列的序数)。每个区段均对应有不同菌株数或菌株出现频率，以菌株出现频率C%)为纵前11 ，以药JfiJ浓度区段中值为横前11，画出菌株敏感性分布的光滑1111线图，81n个点连成，直日每一点以Cx，y)来表示，则z代表浓度区段中值，y代表该区段中茵株数占全部供试菌株数的百分率(频率)。A.4 敏感基线在外观上呈一条平滑的单峰曲线，全部供试菌株对药剂敏感性CECso)的平均值，即平均ECso可作为抗性菌株的抗性频率和抗性水平等指标检视!ilt监测的依据。5 NY/T 1859. 10-2017 附录B(规范性附录)抗药性菌株的适合度测定适合度是指抗药性病原菌在存活、生长、致病、繁殖等方面与敏感群体的生存竞争能力。试验1通过测定靶标病原菌的抗药性状的稳定性、于包子产生能力、抱子萌发能力、致病力、竞争力等适合度相关的生物学性状指标，比较不同抗性水平的抗性商株和敏感菌株(包括亲本喔l树。有无差异，来评价抗药性菌株的适合度。如果抗性群体的适合皮明显低于敏感群体(包括亲本菌株)，则该药剂回间使用后靶标的一对其产生抗性的风险较低。如果抗性群体的适合度接近或高于敏感群体(包括亲本菌株)，则靶标囱对该药剂具有一定的归间抗性风险。如果抗性群体的适合度明显高于敏感群体(包括亲本菌株)，则靶标l对该药剂产生抗性的风险较高。B.1 抗药菌株的稳定性将抗药突变体和l亲本敏感菌株接种在未经过药剂处理的健康111片上，待发病产生袍子(如锈病及袍子或担子包子)后进行转代培养。分别测量各菌株第1代、第5代和第10代对药剂的敏感性。比较培养不同代数后菌株对药剂敏感性有无明显的变化。B.2 抱子产生能力将同浓度的抗药突变体和l亲本敏感菌株抱子(友抱子或扭袍子)悬浮液同时接种在未经过药剂处理的健康l叶片上，待发病产生新抱子后，用无ii水将所有袍子洗脱下来，血球计数板测定袍子浓度。统计分析抗性l株与其亲本m株之间产抱子能力的差异。每个菌株重复4次，每次不少于50个接种点。B.3 抱子萌发能力将抱子(叉子包子或扭袍子)悬浮液稀释成适当浓度00倍X10倍显微镜下每个视野50个100个抱子左右)，取40L于凹玻片中，在合适的培养温度和时间下培养，调查抗药性菌株和亲本敏感菌株的抱子萌发率。统计分析抗性-曲株与其亲本菌株的袍子萌发率的差异。每商株重复4次.各重复陋。L观察3个以上视野，调查抱子总数不少于200个。B.4 致病力将相同浓度的抗药突变体和亲本敏感菌株袍子(反袍子或担子包子)悬浮液同时接f!I在未经过药剂处理的健康l叶片上，待发病后进行病情调查，比较抗药突变体和亲本敏感l株发病率与病斑而积的差异。每个菌株重复4次，每次不少于50个J盔和l点。B.5 竞争力选择产于包能力、袍子萌发能力或致病力相当的抗性雀i株和敏感l株，制备同等浓度的袍子悬浮液，分别按照10、3 1、1 1、1 3和o 1的比例混合，接种在未经药液处理利用亲本敏感菌株最小抑制浓度(MIC)处理的健康Iq片上，宜于适合的环搅下培养，待其充分发病后分别狈:!i:病斑面积，然后将未经过j剂处型的11十片上的于包子洗J悦。按上述方法继续培养多代，根据用药处理过的III片发病面积估算抗药性突变体在混合群体中的比例。每个处理重复4次，每次不少于50个接种点。抗药性突变体在混合群体中的比例Y按式(8.1)计算，计算结果保留整数。6 NYjT 1859.10-2017 y=生X100 . CB. 1) 式中。Y 抗药性突变体在混合群体中的比例，单位为百分率C%); A1 药剂处理11十片的发病面积，单位为平方毫米Cmm2); A2一未用药剂处理叶片的发病而积，单位为平方毫米Cmm勺。7 toN|OF，白的FHFZ中华人民共和国农 业行业标准农药抗性风险评估第10部分:专性寄生病原真菌对杀茵剂抗性风险评估NY/ T 1859.10-2017 争奇中国农业出版社出版(北京市朝阳区麦子店街18号楼)Cilrll政编码100125 网址WWW由. cn) 北京印刷一厂印刷新华书店北京友行所发行各地新华书店经销给x 导印张。75字数15千字2017年9月北京第1次印刷2回到本880mmX1230mm1/16 2017年9月1自1版g号16109 4290 定价18.00元+导版权专有侵权必究举报电话[phone]