SN∕T 2558.4-2012 进出口功能性纺织品检验方法 第4部分：抗菌性能 平板琼脂法(出入境检验检疫).pdf

书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 进出口功能性纺织品检验方法第部分： 抗菌性能平板琼脂法犜 犲 狊 狋 犻 狀 犵犿 犲 狋 犺 狅 犱犳 狅 狉 犻 犿 狆 狅 狉 狋 犪 狀 犱犲 狓 狆 狅 狉 狋 犳 狌 狀 犮 狋 犻 狅 狀 犪 犾 狋 犲 狓 狋 犻 犾 犲 狊犘 犪 狉 狋 ：犃 狀 狋 犻 犫 犪 犮 狋 犲 狉 犻 犪 犾 犪 犮 狋 犻 狏 犻 狋 狔犃 犵 犪 狉犱 犻 犳 犳 狌 狊 犻 狅 狀狆 犾 犪 狋 犲犿 犲 狋 犺 狅 犱 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布书书书犜犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口功能性纺织品检验方法第部分： 抗菌性能平板琼脂法 中 国 标 准 出 版 社 出 版北京市朝阳区和平里西街甲号（ ）北京市西城区三里河北街 号（ ）总编室： （ ） 网址 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本 印张 字数 千字 年月第一版 年月第一次印刷印数 书号： 定价 元书书书前言 进出口功能性纺织品检验方法 共分为部分： 第部分： 防紫外线性能； 第部分： 负离子含量； 第部分： 免烫性能； 第部分： 抗菌性能平板琼脂法。本部分为 的第部分。本部分按照 给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位： 中华人民共和国浙江出入境检验检疫局、 中华人民共和国宁波出入境检验检疫局。本部分主要起草人： 万旺军、 胡巍、 杨力生、 潘璐璐、 谭蒙、 陈宇、 徐志敏、 徐浩。犛 犖犜 进出口功能性纺织品检验方法第部分： 抗菌性能平板琼脂法范围 的本部分规定了采用琼脂平皿扩散法测定进出口纺织品抗菌性能的定性分析测试方法。本部分适用于机织物、 针织物、 非织造织物和其他平面织物。羽绒、 纤维、 纱线等可参照执行。本部分适用于溶出型、 非溶出型抗菌纺织品。本部分不适用于抗菌剂在试验琼脂上完全不扩散的试样， 也不适用于抗菌剂与琼脂起反应的试样。本部分不涉及抗菌产品安全性的评价。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件， 其最新版本（ 包括所有的修改单） 适用于本文件。 纺织品色牢度试验耐家庭和商业洗涤色牢度术语和定义下列术语和定义适用于本文件。 抗菌纺织品犪 狀 狋 犻 犫 犪 犮 狋 犲 狉 犻 犪 犾 狋 犲 狓 狋 犻 犾 犲 狊含有抗菌物质且具有抗菌功能的， 以天然纤维和化学纤维为主要原料， 经过纺织、 印染或复制等加工， 可供直接使用， 或需进一步加工的纺织工业产品的总称。 抗菌整理犪 狀 狋 犻 犫 犪 犮 狋 犲 狉 犻 犪 犾 犳 犻 狀 犻 狊 犺运用抗菌物质对纺织品进行处理， 使其具有抗菌功能的染整加工过程。 抗菌整理剂犪 狀 狋 犻 犫 犪 犮 狋 犲 狉 犻 犪 犾 犳 犻 狀 犻 狊 犺 犻 狀 犵犪 犵 犲 狀 狋用作纺织品抗菌整理的抗菌物质。按其在织物纤维上的溶出特性可分为两大类： 溶出型抗菌整理剂与非溶出型抗菌整理剂。 抗菌性能犪 狀 狋 犻 犫 犪 犮 狋 犲 狉 犻 犪 犾 犪 犮 狋 犻 狏 犻 狋 狔产品所具有的抑制细菌繁殖的性能。 抗菌带 狕 狅 狀 犲狅 犳犫 犪 犮 狋 犲 狉 犻 犪 犾 犻 狀 犺 犻 犫 犻 狋 犻 狅 狀琼脂培养基表面与试样接触的边界处无细菌繁殖的区域， 即试样边缘附近没有细菌的环带。犛 犖犜 对照样 犮 狅 狀 狋 狉 狅 犾 狊 犪 犿 狆 犾 犲用于验证试验细菌生长环境与条件合适的样品。通常取抗菌纺织品未经抗菌整理前的材料或不经任何处理的 棉织物。 直接接触皮肤的抗菌纺织品犪 狀 狋 犻 犫 犪 犮 狋 犲 狉 犻 犪 犾 狋 犲 狓 狋 犻 犾 犲 狊狑 犻 狋 犺犱 犻 狉 犲 犮 狋 犮 狅 狀 狋 犪 犮 狋 狋 狅狊 犽 犻 狀在穿着或使用时， 产品的大部分面积直接与人体皮肤接触的抗菌纺织品。 非直接接触皮肤的抗菌纺织品犪 狀 狋 犻 犫 犪 犮 狋 犲 狉 犻 犪 犾 狋 犲 狓 狋 犻 犾 犲 狊狑 犻 狋 犺 狅 狌 狋犱 犻 狉 犲 犮 狋 犮 狅 狀 狋 犪 犮 狋 狋 狅狊 犽 犻 狀在穿着或使用时， 产品不直接与人体皮肤、 或仅有小部分面积直接与人体皮肤接触的抗菌纺织品。安全预防措施警告： 使用本标准的人员应有正规微生物检测实验室的实践经验。本标准未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施， 并保证符合国家有关法规规定的条件。原理平皿内注入两层琼脂培养基， 下层为无菌培养基， 上层为接种培养基。试样放在两层培养基上， 培养一定时间后， 根据培养基和试样接触处细菌繁殖的程度， 评定试样的抗菌性能。设备、 培养基和试剂 设备 分光光度计， 检测波长 或 适合于测试试验菌液的浓度。 恒温培养箱： 温控精度为。 水浴锅： 温度能保持在 。 恒温振荡器： 温控精度为。 冰箱： 温度能保持在。 高压灭菌锅： 温度能保持在 ， 压力能保持在 。 显微镜： 放大倍数 倍， 下光源照明。 平皿： 玻璃或聚苯乙烯制， 直径 或 。 微量移液器， 最小刻度。 二级生物安全柜。 旋涡式振动器。 试管、 吸管、 烧瓶等实验室常用器具。 游标卡尺。 培养基和试剂 试剂试验所用试剂应是分析纯的或适用于微生物试验用的。试验用水应是用于制备微生物培养基的分析级的纯水， 可用蒸馏、 离子交换或用反渗透装置过滤等方法制取， 应无毒和无抑菌物质。犛 犖犜 培养基营养肉汤和琼脂培养基采用下列组分， 如有偏离应在试验报告中说明：）营养肉汤胰蛋白胨 植物蛋白胨氯化钠蒸馏水（ 最终定容至） 灭菌后， 值为 。）琼脂培养基胰蛋白胨 植物蛋白胨氯化钠琼脂粉 蒸馏水（ 最终定容至） 灭菌后， 值为 。）沙氏琼脂培养基葡萄糖 蛋白胨 琼脂粉 蒸馏水（ 最终定容至） 灭菌后， 值为 。） （ 磷酸盐） 缓冲液磷酸氢二钠 磷酸二氢钾 蒸馏水（ 最终定容至） 灭菌后， 值为 。注：建议使用现有商业化的脱水原料制备培养基， 并严格按照相关产品制造商的使用说明操作。注：所有物质经配制后如不立即使用， 保存。配制超过个月后不可使用。注：灭菌程序， 置于试管或烧瓶中， 盖上棉塞， 在 、 灭菌 。试验细菌 菌种应使用下列革兰氏阳性、 革兰氏阴性和真菌菌种。革兰氏阳性细菌： 金黄色葡萄球菌犛 狋 犪 狆 犺 狔 犾 狅 犮 狅 犮 犮 狌 狊 犪 狌 狉 犲 狌 狊（ ）革兰氏阴性细菌： 大肠杆菌犈 狊 犮 犺 犲 狉 犻 犮 犺 犻 犪 犮 狅 犾 犻（ 或 、 、 选一种） ， 或肺炎克雷伯氏菌犓 犾 犲 犫 狊 犻 犲 犾 犾 犪狆 狀 犲 狌 犿 狅 狀 犻 犪 犲（ ） ， 根据需要选一种；真菌： 白色念珠菌犆 犪 狀 犱 犻 犱 犪犪 犾 犫 犻 犮 犪 狀 狊（ ） 。注：可使用加入世界菌种保藏联合会（ ） 的菌种保藏机构提供的、 与上述菌种等效的试验细菌。注：根据需要， 可采用其他的试验菌种， 培养基成分、 培养温度和培养方法可根据需要调整。 冻干菌的活化将冻干菌融化分散在 的营养肉汤中形成悬浮状， 在 下培养 。犛 犖犜 用接种环取菌悬液以划线法接种到琼脂培养基平皿上， 在 下培养 。从培养皿上取典型菌落接种在琼脂培养基斜面试管内， 在 下培养 。 菌种转种及保存冻干菌激活后接种斜面试管培养， 然后贮存于冰箱内（ ） ， 作为保存菌， 保存期不超过个月， 每月传代一次， 传代次数不超过 代。若转种后保存时间超过个月， 不得用于下一次转种。 标识对每个菌种应标注如下信息：）供应冻干菌的菌种保藏机构名称；）冻干菌的名称和编号；）冻干菌的批号；）冻干菌激活日期；）保存菌的贮藏日期；）保存菌的实验室编号。试验菌液的制备 革兰氏菌菌液的制备 两步预培养程序制备革兰氏菌接种菌悬液 用接种环在 代的接种斜面试管取一接种环菌， 以划线法接种到琼脂培养基平皿上， 在 下培养 左右。注：该平皿在 条件下保存， 在周内使用。 取营养肉汤 放入 的三角烧瓶内， 用接种环取 平皿上的典型菌落接种在肉汤内培养。培养条件为： 温度 ， 振动频度 ， 时间 。 用蒸馏水 倍稀释营养肉汤， 用其调节培养后的菌浓度为 ，作为试验菌液， 采用分光光度计或稀释法测定菌液浓度。注：该试验菌液不可放冰冷箱内保存， 应尽快使用。注：分光光度计法测定菌液浓度操作步骤：）设定分光光度计的测量波长为 ；）以未加菌液的培养液作为空白对照， 测定培养后的含菌培养液 值；）在显微镜下， 利用细菌计数板对该含菌培养液进行细菌计数， 得到的细菌数量与 值相对应；）依据上述对应关系， 以后测定的细菌 值通过换算即可得到相应的细菌浓度。 白色念珠菌菌液的制备 用接种环在 代的接种斜面试管取一接种环菌， 以划线法接种到沙氏琼脂培养基平皿上，在 下培养 。 用接种环从 平皿上挑出典型培养菌落， 接种于沙氏琼脂培养基试管斜面， 下培养 ， 得新鲜培养物。 往上述试管加入 缓冲液 ） ， 反复吹吸， 洗下新鲜菌苔。用 吸管将洗脱液移至另一支无菌试管， 用旋涡式振荡器混合 或用手振摇 次， 使充分混匀， 制成接种菌悬液。菌悬液含量采用分光光度计法或稀释法测定， 菌浓度为 。注：该试验菌液不可放冰冷箱内保存， 应尽快使用。犛 犖犜 试样的准备 样品洗涤 概述试样一次洗涤。若有更多次洗涤需求， 按以下方法之一进行操作， 并在试验报告中注明采用的洗涤方法。 一次洗涤方法从抗菌织物大样中取 以上的小样， 试验条件为 ， 浴比 ， 无磷标准洗涤剂浓度 。洗衣机中加入 热水， 试样 及陪洗织物 ， 洗涤剂 ， 开机洗涤 。排水，常温自来水注洗 。取出织物， 离心脱水 。再用常温自来水注洗 ， 取出织物，离心脱水 。为防止残留的洗涤剂干扰抗菌性能测试， 最后一个程序结束时充分清洗样品， 然后晾干或烘干。 多次洗涤方法 耐洗色牢度试验机洗涤方法从抗菌织物大样中取个小样（ 每个尺寸 ， 剪成块） ， 采用 无磷标准洗涤剂，参照 进行洗涤， 下述程序相当于次洗涤： 水温 ， 洗涤剂浓度 ， 溶液， 钢珠 粒， 洗 洗涤后取出试样， 在 和 的水中清洗两次， 每次 。重复此程序， 直至规定的洗涤次数。为防止残留的洗涤剂干扰抗菌性能测试， 最后一个程序结束时充分清洗样品， 然后晾干或烘干。 家用双桶洗衣机洗涤方法从抗菌织物大样中取 以上的小样， 试验条件为 ， 浴比 ， 无磷标准洗涤剂浓度 。下述程序相当于次洗涤（ 以 布样为例， 实验试验应根据试样按比例增加水量及洗涤剂） ： 在洗衣机中加入 热水， 试样 及陪洗织物 ， 洗涤剂 ， 开机洗涤 。排水，常温自来水注洗 。取出织物， 离心脱水 。再用 常温自来水注洗 ， 取出织物， 离心脱水 。重复此程序， 直至规定的洗涤次数。为防止残留的洗涤剂干扰抗菌性能测试， 最后一个程序结束时充分清洗样品， 然后晾干或烘干。 检测试样从样品上选取有代表性的试样， 每种菌试验块（ 正面块， 反面块） 圆形试样， 直径 。 用小纸片包好。注：短纤维、 长绒毛织物可剪碎， 在培养基上形成一厚层。为便于操作， 可将一玻璃环先放在琼脂培养基上， 填充试验材料后， 再拿开。注：由于涂层织物不透气， 可能抑制细菌生长。此种情况， 将试样剪成小条， 排放在培养基上， 每条之间留有小空隙。 试样处理将装有试样的小纸包放入高压灭菌锅， 于 、 灭菌 。备用。若试样不宜采用高犛 犖犜 压蒸汽灭菌， 可采用其他方法（ 如： 紫外线灭菌、 环氧乙烷灭菌等） ， 但所用灭菌方法不应影响抗菌性能和检测结果。 对照样取不经任何处理的 棉织物作为对照样， 尺寸、 灭菌与否、 处理方法均与对应的试样相同。注：对照样也可按下列工艺制备： 纯棉针织坯布煮炼（ ， ， 浴比，）水洗酸洗水洗中和水洗漂白（， ， ， 浴比 ，）热水洗（ ）水洗烘干。注：对上述制备织物， 按 洗涤方法， 不加洗涤剂， 次洗涤后作为对照样。若需要， 可同时取与试样材质相同但未经抗菌整理的材料作比对。 试验步骤 准备下层无菌培养基。向无菌平皿中倾注 琼脂培养基（ 白色念珠菌采用沙氏琼脂培养基） ， 并使其凝结。 准备上层接种培养基。取 的琼脂培养基（ 白色念珠菌采用沙氏琼脂培养基） 放入烧瓶， 加入试验菌液。振荡烧瓶使细菌分布均匀， 向 中的每个平皿中倾注 ， 并使其凝结。接种过的琼脂培养皿应在内使用。 用无菌镊子将试样和对照样分别放于平皿中央， 均匀地按压在琼脂培养基上， 直到试样和琼脂培养基之间很好地接触。各样边缘相距 以上， 与平皿边缘相距 以上。 将试样放在琼脂培养基上后， 立即放入 的培养箱中培养 （ 白色念珠菌为 ） ， 要确保在整个培养期中试样和琼脂培养基保持接触。 结果的计算和评价 每个试样至少测量处， 并按式（） 计算试样的抑菌带宽度。犎（犇犱） （）式中：犎 抑菌带宽度， 单位为毫米（） ；犇 抑菌带外径的平均值， 单位为毫米（） ；犱 试样直径， 单位为毫米（） 。 测定抑菌带后， 用镊子将试样从琼脂培养基上移去， 用显微镜检查试样下面接触区域的细菌繁殖情况。注：测量时， 应选择均匀而完全无菌生长的抑菌圈进行。 根据细菌繁殖的有无和抑菌带的宽度， 按表评价每个试样的抗菌效果。表抗菌效果评价抑菌带宽度试样下面的细菌繁殖情况描述评价无抑菌带大于， 没有繁殖无抑菌带在之内， 没有繁殖无没有抑菌带， 没有繁殖有效犛 犖犜 表（ 续）抑菌带宽度试样下面的细菌繁殖情况描述评价轻微没有抑菌带， 仅有少量菌落， 繁殖几乎被抑制中等没有抑菌带， 与对照样相比， 繁殖减少至一半有限大量没有抑菌带， 与对照样相比， 繁殖没有减少有或仅轻微减少无效没有繁殖， 即使没有抑菌带， 也可认为抗菌效果好。因为活性物质的低扩散阻止了抑菌带的形成。细菌繁殖的减少是指菌落数量或菌落直径的减少。 阴性对照的标准空白试样， 抑菌圈宽度犇， 则判定试验有效。否则判定试验无效， 需重新做试验。 样品经次洗涤， 抑菌带， 为非溶出型； 抑菌带， 为溶出型。 样品经次洗涤， 抑菌带， 建议重新测试。 结果表示如下：）直接接触皮肤的抗菌纺织品及抗菌医用纱布、 绷带等医疗用品， 应所有抗菌检测试样均满足表中“ 有效” 的要求时， 则认为该样品具有抗菌效果。）非直接接触皮肤的抗菌纺织品， 抗革兰氏菌检测试样满足表中“ 有效” 的要求时， 则认为该样品具有抗菌效果。有特殊需求的参考 ） 。 试验报告试验报告应包括下列内容：）试验是按本部分进行的；）样品、 对照样的描述；）试样尺寸、 数量和准备（ 如： 消毒、 洗涤次数、 洗涤方法） ；）试验细菌名称及接种菌液浓度；）对照样试验结果；）试验结果（ 每种菌试验的抑菌带、 细菌繁殖情况） ；）样品抗菌效果的评价（ 有正反面注明） ；）试验人员和试验日期；）任何偏离本部分的情况。犛 犖犜