GA∕T 204-2019 法庭科学 血液、尿液中苯、甲苯、乙苯和二甲苯检验 顶空气相色谱法(公共安全).pdf

代替GA/T 2041999 GA/T ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA 法庭科学 血液、尿液中苯、甲苯、乙苯和二甲苯检验 顶空气相色谱法 Forensic sciencesExamination method for benzene, toluene, ethylbenzene and dimethyl benzene in blood and urineHSGC -发布 -实施 中华人民共和国公安部中华人民共和国公安部 发布发布 GA/T I 前 言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准代替GA/T 204-1999血、尿中的苯、甲苯、乙苯、二甲苯的定性及定量分析方法，与GA/T 204-1999相比，除编辑性修改外主要技术变化如下： 修改了标准名称（见封面，1999年版的封面）； 修改了试剂和材料（见第5章，1995年版的第5章）； 增加了仪器及设备（见第6章）； 修改了定性分析和定量分析的有关内容（见第7章，1999年版的第7章）； 修改了定性结果评价和定量结果评价的有关内容（见第8章，1999年版的第8章）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会 （SAC/TC 179/SC 1） 提出并归口。 本标准起草单位：司法鉴定科学研究院、公安部物证鉴定中心。 本标准主要起草人：刘伟、沈敏、沈保华、卓先义、向平、于忠山、王芳琳、何毅。 GA/T 1 法庭科学 血液、尿液中苯、甲苯、乙苯和二甲苯检验 顶空-气相色谱法 1 范围 本标准规定了法庭科学血液、尿液中苯、甲苯、乙苯和二甲苯的顶空-气相色谱（HS-GC）定性定量检验方法。 本标准适用于法庭科学血液、尿液中苯、甲苯、乙苯和二甲苯的定性分析和定量分析。其他可疑样品中苯、甲苯、乙苯和二甲苯的定性分析和定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，采用顶空-气相色谱法定性定量，以保留时间作为定性判断依据；以峰面积为依据，采用内标法或外标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合GB/T 6682 中规定的二级水。试剂包括： a) 叔丁醇，色谱纯； b) 标准溶液： 1） 1.0mg/mL 标准物质溶液：根据苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯标准物质的纯度，移取适量，分别用甲醇配制 1.0mg/mL 苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯标准物质溶液， 置于冰箱中冷藏保存。 有效期 6 个月。 或采用市售溶液标准物质； 2） 0.1mg/mL 标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯标准物质溶液各 1.0mL 分别于 10mL 容量瓶中，用水定容至 10mL，混匀，密封，分别配置成浓度为 0.1mg/mL 苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯标准工作溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。实验中所用其他浓度的标准工作溶液均由1.0mg/mL 标准物质溶液用水稀释得到； 3） 5.0mg/mL 内标物质溶液： 根据内标叔丁醇标准物质的纯度， 移取适量， 用水配制 5.0mg/mL叔丁醇内标物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。或采用市售溶液标准物质； GA/T 2 4） 0.04mg/mL 内标工作溶液：移取 5.0mg/mL 内标物质溶液适量用水稀释配制成浓度为0.04mg/mL 的叔丁醇内标工作溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 3 月。实验中所用其他浓度的内标工作溶液均由 1.0mg/mL 内标物质溶液用水稀释得到。 注：特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液。 5.2 材料 材料包括： a) 顶空瓶； b) 硅橡胶垫； c) 铝帽； d) 密封钳； e) 注射器（1mL）。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（FID）； b) 顶空自动进样器 c) 分析天平：感量 0.1mg； d) 恒温水浴锅。 7 操作方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品提取 7.1.1.1 检材样品制备 移取血液或尿液检材样品200 L及水（若采用内标法，则为叔丁醇内标工作溶液）500L置于10mL顶空瓶中，盖上硅橡胶垫，用密封钳加封铝帽，混匀，供仪器分析。 若采用顶空自动进样器，封盖后直接供仪器分析；若采用手动进样，封盖后将顶空瓶置于恒温电加热器中65下加热10min，抽取液上气体400 L。 7.1.1.2 质控样品制备 移取0.2g/mL苯（或甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯）标准溶液100L及水（若采用内标法，则为叔丁醇内标工作溶液）500L作为添加样品；另取水600L（内标法，则为水100L及叔丁醇内标工作液500L）作为空白样品，与检材样品平行操作，供仪器分析。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 顶空自动进样 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品实际情况进行调整： a) 加热箱温度：65； b) 定量环温度：105； GA/T 3 c) 传输线温度：110； d) 气相循环时间：15min（色谱柱1、色谱柱2），25min（色谱柱3）； e) 顶空瓶加热平衡时间：10.0min； f) 顶空瓶加压时间：0.10min； g) 定量环充满时间：0.10min； h) 定量环平衡时间：0.05min； i) 进样时间：1.00min。 7.1.2.1.2 顶空手动进样 将样品置于65恒温水浴中加热10min，用1mL注射器吸取瓶内液面上气体0.4mL，进样。 7.1.2.1.3 气相色谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品实际情况进行调整： a) 色谱柱： 1） DB-ALC1柱（30m0.32mm1.8m）或等效色谱柱； 2） DB-ALC2柱（30m0.32mm1.2m）或等效色谱柱； 注：DB-ALC1、DB-ALC2 柱是 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程：40保持3min，以10/min速率升至150，保持1min； c) 进样口温度：150； d) 检测器温度：300； e) 氢气流量：40mL/min； f) 空气流量：400mL/min； g) 载气：高纯氮； h) 柱流量：8.0mL/min。 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品液上气体，按 7.1.2.1 的分析条件进样分析。 7.2 定量分析 7.2.1 样品制备 准确移取血液或尿液检材样品200 L两份分别置于10mL顶空瓶中，按7.1.1.1进行操作。 用单点校正法定量时，配置单点浓度的苯（或甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯）标准溶液，准确移取标准溶液 200 L 两份分别置于 10mL 顶空瓶中，加水（若采用内标法，则为叔丁醇内标工作溶液）500L（标准溶液中目标物含量应为检材样品中目标物含量的(100 50)%） ，作为单点校正样品，与检材样品平行操作，供仪器分析。 用标准曲线法定量时，配制系列浓度的苯（或甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯）标准溶液（参见附录A中A.1），准确移取标准溶液200 L各两份分别置于10mL顶空瓶中，加水（若采用内标法，则为叔丁醇内标工作溶液）500 L（检材样品中目标物的含量应在标准曲线的线性范围内），作为系列浓度标准曲线样品，与检材样品平行操作，供仪器分析。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 按7.1.2.1规定的条件分析。 GA/T 4 7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和单点校正或标准曲线样品液上气体，按7.2.2.1的分析条件每个样品进样分析1次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 7.2.3.1.1 内标-标准曲线法 记录检材样品和标准曲线样品中目标物及内标物的峰面积值，以标准曲线样品中目标物与内标物的峰面积比为纵坐标、标准曲线样品中目标物的含量为横坐标进行线性回归，得到线性方程。根据检材样品中目标物与内标物的峰面积比，按公式（1）计算含量： = . (1) 式中： W检材样品中目标物的含量，单位为微克每毫升（g/mL）； Y检材样品中目标物与内标物的峰面积比； a线性方程的截距； b线性方程的斜率。 7.2.3.1.2 内标-单点校正法 记录检材样品和单点校正样品中目标物及内标物的峰面积值，按公式（2）计算校正因子，按公式（3）计算含量： =标内内标 . (2) 式中： f校正因子； M标标准样品中目标物添加量，单位为微克（g） ； A内标准样品中内标物峰面积值； M内标准样品中内标物添加量，单位为微克（g） ； A标标准样品中目标物峰面积值。 =样内内样 . (3) 式中： W检材样品中目标物的含量，单位为微克每毫升（g/mL） ； f校正因子； A样检材样品中目标物峰面积值； M内检材样品中内标物添加量，单位为微克（g） ； A内检材样品中内标物峰面积值； M样检材样品的取样量，单位为毫升（mL） 。 7.2.3.1.3 外标-标准曲线法 记录检材样品和标准曲线样品中目标物的峰面积值，以标准曲线样品中目标物峰面积值为纵坐标、标准曲线样品中目标物的含量为横坐标进行线性回归， 得到线性方程。 根据检材样品中目标物的峰面积GA/T 5 值，按公式（4）计算含量： =样 . (4) 式中： W检材样品中目标物的含量，单位为微克每毫升（g/mL）； A样检材样品中目标物峰面积值； a线性方程的截距； b线性方程的斜率。 7.2.3.1.4 外标-单点校正法 记录检材样品和单点校正样品中目标物的峰面积值，按公式（5）计算含量： =样标标样 . (5) 式中： W检材样品中目标物的含量，单位为微克每毫升（g/mL） ； A样检材样品中目标物峰面积值； M标标准样品中标准物添加量，单位为微克（g） ； A标标准样品提取液中目标物峰面积值； M样检材样品的取样量，单位为毫升（mL） 。 7.2.3.2 计算相对相差 记录两份平行操作的检材样品中目标物的含量，按公式（6）计算相对相差： %10021=XXXRD . (6) 式中： RD相对相差，用百分比（%）表示； X1、X2两份检材样品平行定量测定的含量数值； X两份检材样品平行定量测定含量的平均值。 8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 在相同条件下进行样品测定时， 检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致 （相对误差在 1.0%之内），且经两种不同色谱柱的分析，结果一致，空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。必要时，用气相色谱-质谱确证。方法的检出限参见附录A，相关谱图参见附录B。 8.1.2 阴性结果评价 检材样品中未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰， 出现与内标溶液一致的色谱峰， 空白样品无干扰， 或检材样品中未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰， 添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 GA/T 6 8.2 定量结果评价 如果目标物含量的RD10%（有凝血块的血样不大于15），定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中目标物含量的RD10%（有凝血块的血样大于15），定量数据不可靠。应按7.2重新提取检验。 苯、甲苯、乙苯、二甲苯中毒诊断参考资料参见附录C。 GA/T 7 附 录 A （资料性附录） 方法学有效性验证 A.1 标准曲线 配制苯 （甲苯、 乙苯、 邻二甲苯、 间二甲苯、 对二甲苯） 质量浓度为0.50 g/mL、 1.0g/mL、 2.0g/mL、5.0g/mL、10.0g/mL、25.0g/mL、50.0g/mL的标准溶液，按7.1.1.1操作，以苯（甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯）与内标叔丁醇的峰面积比对苯（甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯、对二甲苯）质量浓度做标准曲线，线性相关系数（r）均不小于0.995。 A.2 检出限和定量限 本方法各化合物的检出限均为0.2g/mL，定量限均为0.5g/mL。 GA/T 8 附 录 B （资料性附录） 苯、甲苯、二甲苯、乙苯及内标的气相色谱图 B.1 苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯和对二甲苯和内标气相色谱图见图B.1（色谱柱1条件）。 图B.1 苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯和对二甲苯标准品和内标气相色谱图 B.2 苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯和对二甲苯和内标气相色谱图见图B.2（色谱柱2条件）。 图B.2 苯、甲苯、乙苯、邻二甲苯、间二甲苯和对二甲苯标准品和内标气相色谱图 GA/T 9 附 录 C （资料性附录） 苯、甲苯、乙苯、二甲苯中毒诊断参考资料 C.1 中毒症状 急性苯中毒主要表现为中枢神经系统症状，轻者出现黏膜刺激症状，患者诉头痛、头晕、恶心、呕吐等，随后出现兴奋或酒醉状态，严重时发生昏迷、抽搐、血压下降、呼吸和循环衰竭。慢性中毒以造血系统损害为主要表现，有头晕、头痛、乏力、失眠、记忆力减退等神经衰弱症候群的表现，造血系统损害以白细胞数减少最为常见。中毒晚期可出现全血细胞减少、致再生障碍性贫血。 吸入较高浓度甲苯蒸汽后可出现头晕、头痛、恶心、呕吐、四肢无力、意识模糊、步态蹒跚，重症者有躁动、抽搐或昏迷，并伴有眼和上呼吸道刺激症状，可出现眼结膜和咽部充血。直接吸入液体后可出现肺炎、肺水肿、肺出血及麻醉症状。 二甲苯蒸汽可引起眼、鼻、喉的刺激，高浓度时可致严重的呼吸困难、甚至死亡，吸入高浓度的二甲苯还可使食欲丧失、恶心、呕吐、腹痛，有时可引起肝肾可逆性损伤。 C.2 尸检所见 急性苯中毒死亡尸体以中枢神经病变为主， 大脑白质广泛水肿， 血管周围神经组织疏松和淋巴细胞浸润，胶质细胞周围出现大空泡，并有脱髓鞘现象。气管黏膜、胸膜及非严重淤血和出血，有明显肺水肿。 接触极高浓度死亡以肺脏明显出血和水肿为主要病变， 大脑仅有轻度血管充血， 肝肾可无明显异常，体内富含脂肪的组织中的苯含量与接触浓度平行。慢性苯中毒死亡尸体皮肤苍白，贫血貌，全身散在出血斑点，继发性感染灶，鼻与口腔黏膜溃疡，肝、脾、淋巴结可无肿大或轻度肿大，骨髓象呈再生障碍性贫血或白血病表现。 C.3 致死浓度 苯的血中致死浓度为0.95g/mL；甲苯的血中致死浓度为10g/mL；二甲苯的血中致死浓度为3g/mL40g/mL。 _