2种品牌粪便血红蛋白和转铁蛋白胶体金免疫层析试纸检测限和检出率比较.pdf

临床检验杂志2 0 2 3年8 月第41卷第8 期D0I:10.13602/ki.jcls.2023.08.022种品牌粪便血红蛋白和转铁蛋白胶体金免疫层析试纸检测限和检出率比较月Chin J Clin Lab Sci,Aug.2023,Vol.41,No.8569临床检验技术研究王娟，孙婷婷”，武爱文”，冷家骅，刘汝锋，王悦，徐国宾（北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所，恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室，a.检验科,b.胃肠肿瘤中心，北京10 0 142)摘要：目的观察2 种品牌胶体金免疫层析试纸检测粪便血红蛋白和转铁蛋白的检测限及其对临床粪便样本检测的阳性率。方法采用2 种胶体金试纸同时检测倍比稀释的血红蛋白和转铁蛋白标准液,同一浓度平行检测10 次,检测结果均为阳性的最低稀释浓度即为该试纸的检测下限。采用2 种试纸同时检测连续送检的2 6 8 例粪便样本，比较粪便血红蛋白单检及其联合转铁蛋白检测的阳性率。结果A、B2 种品牌的血红蛋白和转铁蛋白检测下限与说明书标示值一致,分别为150 ng/mL和40ng/mL。2 种品牌血红蛋白试纸检测粪便样本阳性率分别为42.5%、2 8.4%，联合转铁蛋白检测的阳性率分别为6 0.1%、55.2%。结论即使不同品牌胶体金试纸血红蛋白和转铁蛋白的检测下限相同，但单检或联检的阳性率有显著差异，联检的阳性率高于单检。关键词：粪便；血红蛋白；转铁蛋白；消化道出血；肿瘤中图分类号：R446Limits and rates of detection for hemoglobin and transferrin in fecal samples:comparison of colloidal gold immunochromato-graphic test papers with two different brandsWANG Juan,SUN Tingting,WU Aiven,LENG Jiahua,LIU Rufeng,WANG Yue,XU Guobing(a.Department of Clinical Labo-ratory,b.Department of Gastrointestinal Cancer,Key Laboratory of Carcinogenesis and Translational Research(Ministry of Education),Peking University Cancer Hospital and Institute,Beijing 100142,China)Abstract:ObjectiveTo investgate the sensitivity and positive rate of two brands of test paper reagents with colloidal gold immuno-chromatography for the detection of hemoglobin and transferrin in feces samples from cancer patients,Methods The double-dilutedstandards of hemoglobin and transferrin solution with different concentrations were detected simultaneously by using the test paper rea-gents with colloidal gold.The parallel detections for same concentration were performed for ten times concurrently.The lowest dilutionconcentration with positive results for all the samples was considered as the lower limit of detection of the test paper.Two kinds of teststrips were used to detect 268 feces samples from cancer patients and the positive rates of single test for hemoglobin and the tests com-bined with transferring were combined.Results The limits of hemoglobin and transferrin detected by brands A and B were 150 ng/mLand 40 ng/mL respectively,which were consistent with those stated in the instructions from regent kits.The positive rates of the twobrands of hemoglobin test paper were 42.5%and 28.4%,respectively,and the positive rates of the combined transferrin test were60.1%and 55.2%,respectively.The positive rate of combined detection for hemoglobin and transferrin increased.Conclusion Al-though the lower limits of detection for hemoglobin and transferrin by different brands of colloidal gold test paper was the same,the pos-itive rates of single test or combined tests were significantly different,and the positive rates of combined tests should be higher thanthose of single test.The simultaneous detection for hemoglobin and transferrin in the feces appeared to improve the diagnostic accuracyfor gastrointestinal bleeding,presumably without raising false-positivereactions.Key words:feces;hemoglobin;transferrin;gastrointestinal bleeding;tumor粪便血红蛋白（hemoglobin,Hb）是辅助消化道出血诊断的标志物，多采用胶体金免疫层析法进行定性检测。具有更高检测灵敏度的粪便血红蛋白免疫学定量检测（fecal immunological test,FIT）被各文献标志码：A国指南推荐用于结直肠癌筛查 。Hb可经胃黏膜分泌的消化酶和肠道细菌的分解被降解，免疫反应性减弱甚至导致检测结果呈假阴性 2 。转铁蛋白（t r a n s f e r r i n,T r f)不易被胃酸和肠道细菌降解，在粪*基金项目：北京市医院管理中心“扬帆计划重点医学专业（ZYLX202116）。作者简介：王娟，1994年生，女，技师，大学本科，主要从事临床检验工作。通信作者：徐国宾，研究员,E-mail;。570便中的稳定性高于Hb。文献报道粪便 Hb 与 Trf 联合定性检测的阳性率显著高于Hb 单检 3。粪便Hb 和 Trf 联检对于消化道出血的筛检率高,受到推荐。粪便 Hb 和 Trf 定性与定量检测试剂品牌多,其检测灵敏度影响粪便检出的阳性率。本研究旨在了解几种胶体金定性试纸检测下限是否与说明书标示值相符，观察不同品牌试纸检测粪便样本Hb 和Trf 的阳性率,比较不同品牌试纸单检和联检的阳性率与检测一致性。1材料与方法1.1粪便样本收集连续收集2 0 2 2 年7 月至9 月北京大学肿瘤医院住院患者送检的粪便样本2 6 8例,男144例,女12 4例,年龄2 0 8 1岁,平均年龄56.7岁。本研究获得北京大学肿瘤医院伦理委员会批准（批件号：2 0 2 2 YJZ57）。人选患者于人院前均签署样本可用于临床研究的同意书。粪便样本留取后2 h内完成检测。1.2Hb 和 Trf 标准液配制1.2.1Hb、T r f 储存液配制取比色法测定Hb浓度为10 0 g/L的人全血样本1 mL,加人蒸馏水破坏红细胞并定容至10 0 mL,配制得1 g/L Hb 储存液 4。取免疫比浊法测定Trf 浓度为2 g/L的血清样本2 mL,加人生理盐水定容至10 0 mL,配制得40 mg/L Trf 储存液。1.2.2胶体金试纸检测限确定用各厂家试剂盒配套的样本稀释液倍比稀释储存液配制Hb、T r f 应用液。稀释后的Hb、T r f 应用液浓度分别为1 g/mL、0.8 g/mL、0.6 g/mL、0.4 g/mL、0.2 g/mL、0.15 g/mL,0.1 g/mL、0.0 5 g/mL、0.0 1 g/mL以 及40 0 ng/mL、30 0 n g/m L、2 0 0 n g/m L、100 ng/mL、40 n g/m L、2 0 n g/m L、10 n g/m L、8ng/mL。使用不同品牌的Hb和Trf试纸平行检测不同浓度应用液10 次,检测结果均为阳性的Hb或Trf最低应用液浓度定义为该试纸的检测下限。1.3统计学分析用SPSS12.0统计软件进行统计学分析。计数资料以例数或百分比表示,组间率的比较采用配对卡方检验。以P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1检测限Hb 浓度150 ng/mL,Trf 浓度40ng/mL时,A、B2 种品牌试纸10 次检测结果均为阳性。Hb 浓度 50 ng/mL,Trf 浓度 10 ng/mL临床检验杂志2 0 2 3年8 月第41卷第8 期ChinJClinLab SciAug.2023,Vol.41,No.8时,A、B2 种品牌试纸10 次检测结果均为阴性。A、B2 种品牌试纸的Hb检测限为150 ng/mL,Trf为40 ng/mL。检测结果见表1。表12 种品牌胶体金试纸检测不同浓度Hb、T r f溶液结果(n=10)浓度试纸项目(ng/mL)品牌Hb1501005010Tif4020108注：A、B试剂盒Hb、T r f 检测灵敏度标示值分别为2 0 0 ng/mL、40 ng/mL。2.2粪便样本Hb和Trf检出率用A、B2 种品牌试纸同时检测2 6 8 例粪便样本Hb和Trf,结果见表2。A 品牌试纸Hb单检阳性率（42.5%）和联合Trf检测阳性率（6 0.1%）均高于B品牌（2 8.4%、55.2%）（P 0.0 5）;2 种品牌试纸Hb、T r f联合检测阳性率均高于单检,差异有统计学意义。虽然 A、B2种品牌试纸Hb、T r f 检测下限相同,但患者粪便样本检测阳性率有差异。2 种品牌试纸Hb 和 Trf 检测结果均为+/+、+/-、-/+和-/-的总一致性为80.2%（2 15/2 6 8）。结果表明2 种品牌Hb和Trf完全一致率未达到预期值（如90%以上）。进一步观察发现,2 种品牌试纸Hb、T r f 阳性一致率分别为65.2%(75/115)和8 8.3%（12 1/137)。B品牌Hb检出率低是2 种品牌检测总一致性低的原因。A品牌试纸Hb/Trf+/+、+/-、-/+占总样本量（2 6 8 例）的比例分别为2 9.9%、12.7%和17.5%，总阳性率为6 0.1%;B品牌试纸Hb/Trf+/+、+/-、-/+占比分别为2 2.0%、6.3%和2 6.9%，总阳性率为55.2%。2 种品牌Hb、T r f联检阳性率差值为4.9%（6 0.1%v s 55.2%），低于2 种品牌Hb检测阳性率的差值14%（42.5%vs28.4%），说明联合粪便Trf检测可提高检出的总阳性率并减少消化道出血的漏检率。A品牌Hb/Trf-/-的10 7 例粪便样本中,B品检测结果A+B+A+一+一B一A一BABA+B+A+BA一B一一A一一B一一一+一+一一+一+一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一一+一一临床检验杂志2 0 2 3年8 月第41卷第8 期牌Hb/Trf+/-、-/+分别有1例和7 例,仅占7.5%（8/10 7）。B品牌Hb/Trf-/-的12 0 例粪便样本中,A品牌Hb/Trf+/+、+/-、-/+分别有2 例、16 例和3例，占17.5%（2 1/12 0）。说明检出阳性率有差异的2 种品牌均存在漏检情况,漏检样本可能多为Hb、T r f 含量较低的样本。表2 2 种品牌胶体金试纸检测粪便样本Hb和 Trf的一致性(n=268)A编号Hb1+2+3+4+56789101112133讨论消化道出血原因多。恶性肿瘤相关的消化道出血原因包括肿瘤浸润出血（2 3.8%）、消化道静脉曲张（19.7%）、消化道溃疡（16.3%）和消化道糜烂（10.9%）等 5-6 。抗肿瘤治疗（包括手术、放疗、化疗、免疫治疗、靶向治疗等)均有可能导致肿瘤坏死破溃、溃疡、感染或发生炎性肠病、门静脉高压，从而导致消化道出血 6-7 。对于怀疑有急性消化道出血的患者,应进行多学科会诊(MDT)评估,并进行紧急处理,对于慢性消化道出血者也应明确病因。消化道出血的临床表现因出血部位及出血速率而不同,轻者可无症状或伴有贫血及血容量减少,严重者可出现休克甚至危及生命,及时发现早期出血尤为重要。粪便Hb检测是广泛应用的快速筛查消化道出血的方法。Hb在胃肠道中的稳定性低于Trf,西京医院郝晓柯团队定性检测了36 3例肿瘤患者粪便样本 Hb 和 Trf,单检和联检的阳性率分别为36.1%、46.0%和55.1%8 ，联检较Hb单检阳性率高19.0%。本实验也观察到类似的结果。多项试验结果表明Hb和Trf 联检的确可提高消化道出血的阳性检出率并减少部分出血的漏检,但粪便Hb与Trf单检和联检对上下消化道出血的筛检效能仍不明确，这可能是我国部分地区粪便Trf尚未列人医疗服务项目的原因。月Chin J Clin Lab Sci,Aug.2023,Vol.41,No.8B例数TifHb+一+一一+一一571本研究发现实际测量的A、B2 种品牌胶体金试纸Hb、T r f检测下限相同,均与试剂盒说明书标示灵敏度吻合，但2 种品牌试纸检测粪便样本的阳性率有差异。我们认为这种阳性率的差异可能与膜试纸的结构和含水量影响胶体金标记抗体与检测靶抗原复合物的迁移速度有关，也可能与不同品牌试纸胶体金标记抗体检测抗原复合物稳定性受粪便基质影响程度不同有关。因此实现不同医院间粪便Hb、T r f 定性检测结果的互通之路面临很多Trf难题。我们在选择粪便 Hb、T r f 检测试剂时,除比+57一1+20一2一99+7+一+一一+一+一一+一+一较说明书宣称的检测灵敏度外，还应用倍比稀释的标准液验证标示的检测限，并比较临床送检粪便样本的阳性检出率。目前已有免疫比浊、免疫荧光法定量检测粪便1Hb、T r f的试剂盒问世，定量法较胶体金检测更敏15感。观察粪便Hb、T r f、钙卫蛋白、乳铁蛋白等特种蛋1+2一16+44一3白质定性与定量检测对于各种消化道肿瘤和消化道出血的筛查效能,明确粪便特种蛋白定量检测是否有助于急慢性消化道出血量的判断及其对消化道出血干预的影响是有意义的,需要进一步的研究。4参考文献1 陈迎珠，王娟，徐国宾，等.重视粪便血红蛋白免疫学检测在结直肠癌筛查中的应用及质量控制 J.临床检验杂志，2 0 2 3，41(1):1-7.2Otto S,Nemeth M.Double immunochemical screening test(hemo-globin and albumin)for the detection of occult intestinal bleedingJ.J Clin Lab Anal,1993,7(6):301-306.3罗福东，廖焕兰，黄宪章，等.血红蛋白和转铁蛋白在粪便隐血试验中的诊断价值 J.南方医科大学学报，2 0 10，30(2)：40 7-40 8.【4 中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程M.第3版.南京：东南大学出版社，2 0 0 6：12 4-3115Yarris JP,Warden CR.Gastrointestinal bleeding in the cancer pa-tientJ.Emerg Med Clin North Am,2009,27(3):363-379.6 中国医师协会外科医师分会，中国医师协会外科医师分会肿瘤外科医师委员会，中国医师协会外科医师分会多学科综合治疗专业委员会.恶性肿瘤相关急腹症多学科管理中国专家共识J.中华胃肠外科杂志，2 0 2 0，2 3（5）：42 1-437.7Davidson SE,Gillespie C,et al.Practice guidance on the manage-ment of acute and chronic gastrointestinal problems arising as a re-sult of treatment for cancer J.Gut,2012,61(2):179-192.8肖凤静，郑善銮，郝晓柯，粪便血红蛋白、转铁蛋白联合检测在恶性肿瘤患者并发消化道出血筛查中的意义 J.检验医学与临床,2 0 19,16(3)：38 5-38 6.（收稿日期：2 0 2 3-0 7-0 5）（本文编辑：王海燕）