玉米小斑病抗性鉴定.ppt

实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 一、一、实验目的目的学学习和初步掌握玉米小斑病抗性和初步掌握玉米小斑病抗性鉴定技定技术。1 1、玉米小斑病的主要症状特征、玉米小斑病的主要症状特征观察。察。2 2、玉米小斑病的接种方法。、玉米小斑病的接种方法。3 3、玉米小斑病的病情与抗性、玉米小斑病的病情与抗性级别鉴定。定。1.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 玉米小斑病（玉米小斑病（Helminthosporium maydis）是是温温暧潮湿地区玉米潮湿地区玉米产区广泛区广泛发生的一种病害，也是我生的一种病害，也是我国玉米生国玉米生产上的主要病害之一，流行年份往往造成上的主要病害之一，流行年份往往造成严重重损失。失。选育抗病自交系和育抗病自交系和杂交种，是防治小斑病最交种，是防治小斑病最经济有效的措施。玉米从幼苗到成株均可有效的措施。玉米从幼苗到成株均可发病，通常病，通常从下部叶片开始向上蔓延，先从叶面从下部叶片开始向上蔓延，先从叶面产生褐色小点，生褐色小点，后后扩大成大成23mm的褐色病斑，病斑受叶脉限制，常的褐色病斑，病斑受叶脉限制，常常成不常成不规则形。形。发病适温病适温为2530。二、内容说明2.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 3.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 内容说明(续)根根据据小小斑斑病病菌菌侵侵染染特特点点的的不不同同，可可将将小小斑斑病病菌菌划划分分为O小小种种和和T小小种种两两个个生生理理小小种种。T小小种种对T型型细胞胞质有有专化化毒毒性性，故故育育种种上上应尽尽量量避避免免使使用用有有专化化性性的的细胞胞质类型型。玉玉米米对小小斑斑病病抗抗性性表表现亦亦有有两两种种，一一是是多多基基因因控控制制，表表现为病病斑斑数数量量少少，在在保保湿湿条条件件下下，病病斑斑形形成成的的孢子子少少，孢子子形形成成时间较长。二二是是由由隐性性单基基因因rhm控控制制，表表现为小的褪小的褪绿病斑。病斑。鉴定玉米育咱材料抗小斑病的方法有自然定玉米育咱材料抗小斑病的方法有自然诱发鉴定，定，大田大田诱发鉴定和人工接种定和人工接种鉴定。但以人工接种定。但以人工接种鉴定定较为可靠。可靠。4.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 5.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 6.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 （一）所需用品（一）所需用品1、材材料料：供供试玉玉米米材材料料、玉玉米米抗抗病病和和感感病病对照照材材料料。玉玉米米小小斑斑病病菌菌种种，T小小种种的的培培养养物物；上上一一季季感感染染O小小种种小斑病的玉米植株病叶。小斑病的玉米植株病叶。2、仪器器用用具具：高高压灭菌菌锅、超超净工工作作台台、酒酒精精灯灯、接接种种环、恒恒温温箱箱、烧杯杯、漏漏斗斗、试管管、纱布布、玻玻璃璃棒棒、培养皿、培养皿、显微微镜、小、小喷雾器、保湿罩等。器、保湿罩等。3、药品品试剂：75%酒酒精精、0.1%升升汞汞溶溶液液、葡葡萄萄糖糖、琼脂、脂、马铃薯等。薯等。三、所需用品和操作方法 7.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 用具用具8.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 （二）操作方法（二）操作方法 1.苗期接种苗期接种鉴定定（1）菌种的培养）菌种的培养病原菌的分离病原菌的分离选取新取新鲜病叶作病叶作为分离材料，在分离材料，在灭菌室内菌室内进行操作。先将行操作。先将病斑剪成病斑剪成45mm2大小，大小，约3040块，然后分，然后分别将病将病组织小小块置置于于0.1%升汞溶液中消毒升汞溶液中消毒1min，立即取出，按无菌操作方法投，立即取出，按无菌操作方法投入无菌水中清洗三次，每次入无菌水中清洗三次，每次23min。最后以无菌操作方法，将。最后以无菌操作方法，将病斑病斑组织按正方形四点排列，栽种在按正方形四点排列，栽种在PDA平板培养基（去皮平板培养基（去皮马铃薯薯20g，葡萄糖，葡萄糖1020g，琼脂脂1720g，水，水100ml）上，置）上，置2530 温箱中培养温箱中培养约7天。天。9.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 10.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 菌种的菌种的纯化化 选取培养性状典型的菌落，按无菌操作方法移植取培养性状典型的菌落，按无菌操作方法移植到斜面培养基上（每个典型菌落移到斜面培养基上（每个典型菌落移3管），然后再放管），然后再放在在25 恒温下培养。待恒温下培养。待产生生孢子后，子后，选取菌落取菌落较一致一致的斜面的斜面12管，挑取一点，管，挑取一点，观察察孢子的形状、分隔数、子的形状、分隔数、脐点特点。然后点特点。然后计测孢子大小。确子大小。确认纯种后，再用斜种后，再用斜面培养基面培养基扩大培养，大培养，让其其产生大量生大量孢子后，置冰箱中子后，置冰箱中保存待用。保存待用。11.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 菌菌丝形形态12.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 （2 2）孢子子悬浮液的制浮液的制备 用少量无菌水倒入已用少量无菌水倒入已产孢子的斜面培养基子的斜面培养基试管中，管中，猛力猛力摇动冲洗冲洗孢子。也可子。也可辅以接种以接种环表表层刮除。最后刮除。最后将所有冲洗将所有冲洗孢子液集中在子液集中在洁净的三角瓶中。用的三角瓶中。用纱布布滤去菌去菌丝及培养基，及培养基，滤液用蒸液用蒸馏水稀水稀释，调至在至在100倍倍显微微镜下每个下每个视野有野有5个个孢子子浓度的度的悬浮液待用。浮液待用。13.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 （3）接种病菌）接种病菌 接种小斑病的适宜接种小斑病的适宜时期是在玉米期是在玉米6个叶片左右。个叶片左右。接种前在配制好的接种前在配制好的孢子液中加入子液中加入2%蔗糖，以促蔗糖，以促进病病菌菌孢子萌子萌发。接种菌液量是每株。接种菌液量是每株12ml。用微型。用微型喷雾器均匀器均匀喷雾，喷后立即以塑料袋套盆保温，置后立即以塑料袋套盆保温，置25左左右温度下保湿右温度下保湿24小小时。14.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 （4）病情）病情鉴定和分定和分级标准准接接种种后后710天天即即可可进行行病病情情鉴定定。鉴定定应在在同同一一天天内内完完成成。鉴定定项目和目和标准如下：准如下：发病程度病程度以以叶叶片片为单位位进行行鉴定定。根根据据病病斑斑占占叶叶片片面面积的的百百分分率率，记载每每片片叶叶的的感感病病程程度度。发病病程程度度分分为9级（表表1）。鉴定定接接种种部部位位的的叶片，每株叶片，每株4片叶，每个供片叶，每个供试材料材料10株共株共40片。片。以以整整株株为单位位，根根据据整整株株的的发病病情情况况，分分为7个个等等级（表表2）。而而后，以叶片后，以叶片为单位，位，计算病叶率和病情指数。算病叶率和病情指数。15.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 病情病情计算公式16.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 表表1玉米小斑病叶片玉米小斑病叶片发病程度分病程度分级标准准等等级病斑占叶片面病斑占叶片面积（%）01234567801256101120213031505170700级1级2级3级4级5级6级7级8级17.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 表表2玉米小斑病整株玉米小斑病整株发病程度分病程度分级标准准级别 全株叶片病斑占全株叶片病斑占总叶面叶面积（%）0全株叶片无病全株叶片无病0.5植株下部叶片有零星病斑（占叶片面植株下部叶片有零星病斑（占叶片面积10%以下）以下）1植株下部叶片有少量病斑（占叶片面植株下部叶片有少量病斑（占叶片面积11%25%）2植株下部叶片有中量病斑（占叶片面植株下部叶片有中量病斑（占叶片面积26%50%）3植植株株下下部部叶叶片片有有多多量量病病斑斑（占占叶叶片片面面积51%以以上上），出出现大大片片枯枯死死现象象，中中上上部部叶叶片片有有中中量量病病斑斑（占占叶叶面面积26%50%），上上部部叶叶片片有少量病斑（占叶面有少量病斑（占叶面积1025%）4植植株株下下部部叶叶片片基基本本枯枯死死，中中部部叶叶片片有有多多量量病病斑斑（占占叶叶面面积50%以以上上），出，出现大片枯死大片枯死现象，上部叶片有中量病斑（占叶面象，上部叶片有中量病斑（占叶面积2650%）。）。5全株基本枯死。全株基本枯死。0.5级1级2级3级4级5级0级18.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 病情病情鉴定和分定和分级标准（准（续）病斑病斑长度度随机随机测量量40个独立的病斑，每株个独立的病斑，每株4个，以个，以mm为单位。位。抗病性的反抗病性的反应型型病斑反病斑反应型分型分为三三级，分，分级标准准见表表3。19.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 表表3 3 玉米小斑病抗性反玉米小斑病抗性反应型分型分级标准准 病斑型病斑型病斑症状病斑症状坏死型坏死型 病斑中央的坏死部分病斑中央的坏死部分为黄褐色，周黄褐色，周围有深色的有深色的边缘，病斑周，病斑周围和两端没有暗和两端没有暗绿色的浸色的浸润区。区。萎蔫型萎蔫型 病病斑斑中中央央的的坏坏死死部部分分为灰灰褐褐色色至至近近似似灰灰白白色色，没没有有深深色色边缘，在在坏坏死死斑斑周周围或或两两端端有有绿色色的的浸浸润区区，在在高高温温、潮潮湿湿、光光照照弱弱的的条条件件下下浸浸润区区扩展快，并且叶片迅速呈暗展快，并且叶片迅速呈暗绿色，萎蔫死亡。色，萎蔫死亡。褪褪绿病斑型病斑型 病病斑斑小小，病病斑斑中中央央为白白色色坏坏死死，没没有有绿色色边缘，病斑周病斑周围有褪有褪绿晕圈。圈。坏死型坏死型萎蔫型萎蔫型褪褪绿病斑型病斑型20.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 2.2.成株期接种成株期接种鉴定定 接接种种：抽抽雄雄前前将将粉粉碎碎的的头一一年年病病叶叶撒撒入入心心叶叶喇喇叭叭口口，接接种种应在在下下午午或或傍傍晚晚湿湿度度较大大时进行行。天天气气干干燥燥时，接种后可在每株心叶接种后可在每株心叶喷水。水。病情病情鉴定和分定和分级标准：抽准：抽丝后后15天左右天左右进行病情行病情鉴定，定，鉴定定应在同一天内完成。在同一天内完成。发病程度以整株病程度以整株为单位，分位，分7个等个等级。分。分级标准准见表表2。一般用于苗期和成。一般用于苗期和成株期抗病性株期抗病性鉴定。整株定。整株调查中，植株上、中、下叶片中，植株上、中、下叶片的划分，以第一果穗上下两片叶的划分，以第一果穗上下两片叶为中部叶，其下中部叶，其下为下下部叶，其上部叶，其上为上部叶。上部叶。21.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 表表2玉米小斑病整株玉米小斑病整株发病程度分病程度分级标准准级别 全株叶片病斑占全株叶片病斑占总叶面叶面积（%）0全株叶片无病全株叶片无病0.5植株下部叶片有零星病斑（占叶片面植株下部叶片有零星病斑（占叶片面积10%以下）以下）1植株下部叶片有少量病斑（占叶片面植株下部叶片有少量病斑（占叶片面积11%25%）2植株下部叶片有中量病斑（占叶片面植株下部叶片有中量病斑（占叶片面积26%50%）3植植株株下下部部叶叶片片有有多多量量病病斑斑（占占叶叶片片面面积51%以以上上），出出现大大片片枯枯死死现象象，中中上上部部叶叶片片有有中中量量病病斑斑（占占叶叶面面积26%50%），上上部部叶叶片片有少量病斑（占叶面有少量病斑（占叶面积1025%）4植植株株下下部部叶叶片片基基本本枯枯死死，中中部部叶叶片片有有多多量量病病斑斑（占占叶叶面面积50%以以上上），出，出现大片枯死大片枯死现象，上部叶片有中量病斑（占叶面象，上部叶片有中量病斑（占叶面积2650%）。）。5全株基本枯死。全株基本枯死。0.5级1级2级3级4级5级0级22.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 病株率和病情指数病株率和病情指数计算算 病株率和病情指数病株率和病情指数计算方法是以整株算方法是以整株为单位位进行。行。23.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 1、玉米小斑病、玉米小斑病发病的适宜条件是什么？病的适宜条件是什么？2、玉米小斑病的典型特征、玉米小斑病的典型特征为何？何？3、玉米小斑病、玉米小斑病鉴定的基本定的基本环节有哪些？有哪些？4、玉米小斑病接种的要点是什么？、玉米小斑病接种的要点是什么？5、玉玉米米品品种种对小小斑斑病病抗抗性性表表现分分几几级？各各级表表现如何？如何？四、作业24.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 1 玉玉米米遗传育育种种学学编写写组，1979，玉玉米米遗传育育种种学学，230260，科学出版社。，科学出版社。2 方方中中达达，1998，植植病病研研究究方方法法，p373376，中中国国农业出版社。出版社。参考文献25.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 后面内容直接后面内容直接删除就行除就行资料可以料可以编辑修改使用修改使用资料可以料可以编辑修改使用修改使用26.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 主主要要经营：网网络软件件设计、图文文设计制制作作、发布布广广告等告等公公司司秉秉着着以以优质的的服服务对待待每每一一位位客客户，做做到到让客客户满意！意！27.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 致致力力于于数数据据挖挖掘掘，合合同同简历、论文文写写作作、PPT设计、计划划书、策策划划案案、学学习课件件、各各类模模板板等等方方方方面面面面，打造全网一站式需求打造全网一站式需求28.实验十实验十 玉米小斑病抗性鉴定玉米小斑病抗性鉴定 感感谢您的您的观看和下看和下载The The user user can can demonstrate demonstrate on on a a projector projector or or computer,computer,or or print print the the presentation and make it into a film to be used in a wider fieldpresentation and make it into a film to be used in a wider field29.