曲妥珠单抗联合化疗方案治疗乳腺癌的疗效及其作用机制研究.pdf

目的评价曲妥珠单抗联合化疗方案治疗乳腺癌(BC)的疗效，并探讨其对患者外周血磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)通路的干预作用。方法选取2019年3月至2021年1月南阳市中心医院乳腺科一病区收治的68例BC患者为研究对象，采用奇偶分组法分为单一组和联合组各34例。单一组患者予以TP方案(紫杉醇+顺铂)化疗，联合组患者予以曲妥珠单抗+TP方案化疗，两组连续治疗3个周期。比较两组患者的临床疗效及治疗前后的血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原153(CA153)、生化指标血小板第4因子(PF4)、中期因子(MK)、脂质运载蛋白-2(LCN-2)水平；比较两组患者治疗前后的外周血PI3K/Akt通路相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)表达量、生活质量欧洲癌症研究与治疗组织生命质量测定量表(EORTC QLQ-C30)及毒副反应发生率。随访1年后，比较两组患者的生存率。结果联合组患者的治疗总有效率、疾病控制率分别为44.12%、79.41%，明显高于单一组的20.59%、47.06%，差异均有统计学意义(P0.05)；治疗后，联合组患者的血清CEA、CA125、CA153、PF4、MK、LCN-2水平和p-PI3K、p-AKT蛋白表达量明显低于单一组，差异均有统计学意义(P0.05)；治疗后，联合组患者的EORTC QLQ-C30评分为(116.329.13)分，明显高于单一组的(101.248.46)分，差异有统计学意义(P0.05)；联合组患者的总生存率为93.75%，明显高于单一组的72.41%，差异有统计学意义(P0.05)。结论曲妥珠单抗联合TP化疗方案可提高BC患者的临床疗效，降低肿瘤标志物和生化指标水平，提高生存率，且具有一定安全性，其可能通过抑制PI3K/Akt通路活化发挥作用。【关键词】乳腺癌；曲妥珠单抗；化疗；PI3K/Akt通路；疗效【中图分类号】R737.9【文献标识码】A【文章编号】10036350（2023）15215405Efficacy and mechanism of Trastuzumab combined with chemotherapy in the treatment of breast cancer.LUJia-tuan,WANG Zheng,ZHANG Hao.Ward,Breast Department,Nanyang Central Hospital,Nanyang 473200,Henan,CHINA【Abstract】ObjectiveTo evaluate the efficacy of Trastuzumab combined with chemotherapy in the treatmentof breast cancer(BC),and to explore its intervention effect on the phosphatidylinositol-3-kinase(PI3K)/protein kinaseB(Akt)pathway in peripheral blood.MethodsSixty-eight BC patients admitted to Ward,Breast Department,Nan-yang Central Hospital from March 2019 to January 2021 were selected as the research subjects.The patients were divid-ed into a single group(n=34)and a combined group(n=34)using parity grouping method.The single group received TP 论著 doi:10.3969/j.issn.1003-6350.2023.15.006基金项目：河南省科技攻关计划项目(编号：222102310474)。通讯作者：陆佳团(1989)，男，硕士，主治医师，主要研究方向为乳腺癌的诊治，E-mail：。2154Hainan Med J,Aug.2023,Vol.34,No.15海南医学2023年8月第34卷第15期乳腺癌(breast cancer，BC)主要发生于乳腺腺上皮组织，我国BC筛查率较低，20%的BC患者确诊时已处于局部晚期，5年生存率约为24%1。目前尚未有统一治疗方案，部分患者存在多种耐药性或多线治疗失败，因而寻找合理有效BC治疗方案具有重要意义。TP化疗方案常用于治疗BC，仅采用TP化疗方案未达到临床预期2-3。曲妥珠单抗是一种重组人源化单克隆抗体，可提高HER2阳性转移性BC治疗效果4-5。但曲妥珠单抗联合TP化疗方案治疗BC的临床价值尚未明确。磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路异常活化与BC预后不良有关，Akt磷酸化可调节丝状肌动蛋白、上皮-间质转化(EMT)相关蛋白表达，促进 BC 细胞转移6，而 PI3K/Akt信号通路是否可作为治疗BC的潜在靶点尚未明确。本研究探讨其联合治疗BC的疗效、生存率、毒副反应发生率，并分析其对PI3K/Akt通路的影响，为临床治疗提供参考。1资料与方法1.1一般资料选取2019年3月至2021年1月南阳市中心医院收治的 68 例女性 BC 患者为研究对象。纳入标准：符合BC诊断标准7；经组织病理学检查确诊为BC；生存时间6个月；卡氏功能状态(KPS)评分60分；无化疗禁忌证；签署知情同意书。排除标准：合并其他恶性肿瘤者；精神障碍者；既往放化疗史者；非原发性BC；合并全身感染性疾病者。采用奇偶分组法将患者分为单一组和联合组，每组34例。两组患者的一般资料比较差异均无统计学意义(P0.05)，具有可比性，见表1。本研究经我院医学伦理委员会批准。1.2治疗方法1.2.1单一组该组患者予以TP方案(紫杉醇+顺铂)化疗，化疗前12 h口服地塞米松20 mg(昆药集团股份有限公司，国药准字H53020826，规格：0.75 mg)，前30 min内分别肌内注射苯海拉明50 mg(湖北科伦药业有限公司，国药准字H42021175，规格：1 mL20 mg)、西咪替丁300 mg(江苏朗欧药业有限公司，国药准字H32025601，规格：2 mL0.2 g)，第1天静脉滴注紫杉醇 150 mg/m2(海南紫杉园制药有限公司，国药准字H20066558，规格：5 mL30 mg)，持续3 h；第2天静脉滴注顺铂25 mg/m2(云南生物谷药业股份有限公司，国药准字H20043889，规格：2 mL10 mg)，1次/d，21 d为一个周期，连续治疗3个周期。1.2.2联合组该组患者予以曲妥珠单抗+TP方案化疗，TP化疗方案同单一组，同时予以曲妥珠单抗(上海复宏汉霖生物制药有限公司，国药准字S20200019，规格：150 mg/瓶)治疗，初始剂量8 mg/kg，1.5 h/次，21 d为一个周期，每周期给药一次，连续治疗3个周期。1.3观察指标与评价(检测)方法(1)临床疗效8：完全缓解(CR)，肿瘤病灶完全消失且至少维持4周；部分缓解(PR)，肿瘤面积缩小50%且至少维持4周；表1两组患者的一般资料比较x-s，例(%)Table 1Comparison of general information between the twogroups x-s,n(%)组别单一组联合组t/2值P值例数3434年龄(岁)56.243.0357.133.151.1870.239绝经22(64.71)20(58.82)未绝经12(35.29)14(41.18)0.2490.618期23(67.65)24(70.59)期11(32.35)10(29.41)0.0690.793月经情况TNM分期regimen(paclitaxel+cisplatin)chemotherapy,while the combined group received Trastuzumab+TP regimen chemothera-py,both continuously for three cycles.The clinical efficacy and serum tumor markers carcinoembryonic antigen(CEA),carbohydrate antigen 125(CA125),carbohydrate antigen 153(CA153),biochemical indicators platelet factor 4(PF4),mid-term factor(MK),and lipid carrier protein-2(LCN-2)levels before and after treatment were compared betweenthe two groups.The expression levels of peripheral blood PI3K/Akt pathway related proteins phosphorylated phosphati-dylinositol-3-kinase(p-PI3K),phosphorylated protein kinase B(p-AKT),quality of life(EORTC QLQ-C30),and inci-dence of toxic side effects were compared between the two groups before and after treatment.After a one-year fol-low-up,the survival rates of the two groups of patients were compared.ResultsThe total effective rate and disease con-trol rate of the combined group were 44.12%and 79.41%,respectively,which were significantly higher than 20.59%and47.06%of the single group(P0.05).After treatment,the serum levels of CEA,CA125,CA153,PF4,MK,LCN-2,andthe expression of p-PI3K,p-AKT proteins in the combined group were significantly lower than those in the single group(P0.05).After treatment,the EORTC QLQ-C30 score of patients in the combined group was(116.329.13)points,sig-nificantly higher than(101.248.46)points of patients in the single group(P0.05).The overall survival rate of patientsin the combined group was 93.75%,significantly higher than 72.41%in the single group(P0.05).ConclusionThecombination of Trastuzumab and TP chemotherapy regimen can improve the clinical efficacy of BC patients,reduce thelevels of tumor markers and biochemical indicators,improve survival rate,and have certain safety,which may play arole by inhibiting the activation of PI3K/Akt pathway.【Key words】Breast cancer;Trastuzumab;Chemotherapy;PI3K/Akt pathway;Curative efficacy2155海南医学2023年8月第34卷第15期Hainan Med J,Aug.2023,Vol.34,No.15疾病稳定(SD)，肿瘤面积增加25%或缩小25%或出现新病灶。总有效率=(CR 例数+PR 例数)/总例数100%，疾病控制率=(CR 例数+PR 例数+SD 例数)/总例数100%。(2)血清肿瘤标志物：于治疗前后分别采集两组患者的外周静脉血5 mL，离心10 min(3 000 r/min)后取血清。ELISA法检测血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、糖类抗原153(CA153)水平，上海酶联生物提供检测试剂盒。(3)生化指标：于治疗前后分别采集两组患者的外周静脉血5 mL，离心10 min(3 000 r/min)后取血清。ELISA 法检测血清血小板第4 因子(PF4)、中期因子(MK)、脂质运载蛋白-2(LCN-2)水平，上海酶联生物提供 PF4 检测试剂盒，武汉艾美捷科技提供 MK 检测试剂盒，上海白益生物提供 LCN-2 检测试剂盒。(4)外周血PI3K/Akt通路相关蛋白表达量：使用非抗凝管分别采集两组患者治疗前后空腹肘静脉血2 mL，提取单核细胞。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测蛋白表达量：使用 500 L 裂解液提取单核细胞总蛋白，二喹啉甲酸法(BCA)检测蛋白浓度，取蛋白样品(30 L)经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，分离蛋白转移至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上，加入磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)一抗美国Abcam公司，稀释比11 000、内参GAPDH稀释液(稀释比13 000)孵育24 h(4)，室温孵育山羊抗兔IgG二抗(美国CST公司，稀释比15 000)1 h，使用Quantity One软件检测蛋白条带灰度值。(5)生活质量和生存率：治疗前后使用欧洲癌症研究与治疗组织生命质量测定量表(EORTC QLQ-C30)评估生活质量9，包括健康(1项)、功能(5项)、症状(9项)，每项03分，分值越高表明生活质量较好。治疗结束后以门诊复查、电话方式进行随访，随访时间为 1 年，统计随访期间生存情况。(6)毒副反应：比较两组患者治疗期间的上消化道反应、中性粒细胞减少、蛋白尿、血红蛋白减少等不良反应发生情况。1.4统计学方法应用SPSS24.0统计学软件分析数据。计量资料以均数标准差(x-s)表示，组间比较采用t检验，计数资料比较采用2检验。以P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1两组患者的临床疗效比较联合组患者的治疗总有效率、疾病控制率均高于单一组，差异均有统计学意义(P0.05)。治疗后，两组患者的血清CEA、CA125、CA153水平明显低于治疗前，且联合组明显低于单一组，差异均有统计学意义(P0.05)。治疗后，两组患者的血清PF4、MK、LCN-2水平均较治疗前降低，且联合组患者治疗后的血清 PF4、MK、LCN-2 水平明显低于单一组，差异均有统计学意义(P0.05)，见表4。表3两组患者治疗前后的血清肿瘤标志物水平比较(x-s)Table 3Comparison of serum tumor marker levels between the twogroups(x-s)时间治疗前治疗后组别联合组单一组t值P值联合组单一组t值P值例数34343434CEA(ng/mL)17.263.7517.413.820.1720.8644.581.02a10.222.41a12.5670.001CA125(U/mL)95.3818.7194.4317.520.2160.83040.319.46a72.3914.13a11.0010.001CA153(U/mL)74.3615.8675.0316.130.1730.86335.178.72a56.6112.27a8.3050.001注：与同组治疗前比较，aP0.05。Note:Compared with that in the same group before treatment,aP0.05.表4两组患者治疗前后的生化指标比较(x-s)Table 4Comparison of biochemical indexes between the two groups(x-s)时间治疗前治疗后组别联合组单一组t值P值联合组单一组t值P值例数34343434PF4(ng/mL)0.360.080.340.071.0970.2770.190.04a0.260.06a5.6600.001MK(pg/mL)706.41135.42711.28147.090.1420.887413.2197.76a577.09112.36a6.4160.001LCN-2(ng/mL)95.3620.7896.5122.070.2210.82665.7612.05a74.0919.63a2.1090.039注：与同组治疗前比较，aP0.05。Note:Compared with that in the same group before treatment,aP0.05)。治疗后，两组患者的p-PI3K、p-AKT蛋白表达量均较治疗前降低，且联合组明显低于单一组，差异均有统计学意义(P0.05)。治疗后，联合组患者的EORTC QLQ-C30评分为(116.329.13)分，明显高于单一组的(101.248.46)分，差异具有统计学意义(t=7.064，P0.05)，见表6。3讨论紫杉醇、顺铂化疗可促进微管聚合，抑制微管网重组，诱导细胞周期停滞于M期，降低肿瘤细胞增殖能力10。曲妥珠单抗可结合HER2，减缓肿瘤生长进程，提高侵袭性无病生存期11-12。本研究中联合组总有效率、疾病控制率高于单一组，表明联合治疗可提高 BC 治疗效果，有效控制 BC 发展进程。CEA、CA125、CA153属于肿瘤标志物，可用于监测病情发展、评估预后13。本研究结果与其相似，联合治疗可降低CEA、CA125、CA153水平，表明TP方案加入曲妥珠单抗后全面抗BC作用更为高效，可能与细胞增殖、血管生成得以抑制有关。PF4、MK可参与BC血管生成过程，LCN-2可调节EMT相关蛋白表达，促进BC浸润转移14。本研究比较治疗前后两组患者的血清PF4、MK、LCN-2水平，结果发现治疗后联合组患者的血清各指标水平低于单一组，表明联合治疗可降低酪氨酸激酶活性，抑制肿瘤生长、转移。分析原因可能为联合治疗可抑制 DNA 合成、HER2及其相关受体表达，调节肿瘤细胞增殖、分化，有效抑制BC病情进展。PI3K/Akt通路可调节肿瘤淋巴结转移、淋巴管形成，HER2等细胞外信号刺激PI3K后Akt发生膜转位，进入细胞内可参与肿瘤迁移、黏附、细胞外基质降解过程15。本研究说明联合治疗可降低p-PI3K、p-AKT蛋白表达。由此推测抑制PI3K/Akt通路活化可能是联合组疗效显著的原因之一。曲妥珠单抗对HER2具有高度亲和力，可竞争性与恶性细胞或正常细胞HER2胞外激酶结合，抑制PI3K磷酸化、PI3K/Akt通路活化，导致细胞周期停滞于G0/G1期，阻断肿瘤细胞生长进程，促进细胞凋亡16。同时本研究分析结果显示，治疗后联合组患者的EORTC QLQ-C30评分高于单一组，这是由于大部分BC患者经长期治疗后出现不同程度耐药性，降低生活质量；TP化疗联合曲妥珠单抗可控制BC进展，表明联合治疗有助于提高生活质量、生存率。BC治疗过程中可产生不同程度的毒副作用，本研究结果显示，两组患者的上消化道反应、中性粒细胞减少、蛋白尿、血红蛋白减少发生率比较差异均无统计学意义(P0.05)，表明联合治疗并不会增加毒副反应。综上所述，曲妥珠单抗联合TP化疗方案治疗BC效果显著，可降低肿瘤标志物和生化指标水平，提高生存率，改善生活质量，且具有一定安全性，其可能通过抑制PI3K/Akt通路活化发挥作用。参考文献1 Yu HH,Shi ZZ,Cang SD.Application of TC regimen neoadjuvantchemotherapy in ER-2 positive early breast cancer and its effecton expression of lipocalin-2 J.The Practical Journal of Cancer,2021,36(3):483-485.余花艳,史中州,仓顺东.TCH方案新辅助化疗在HER-2阳性早期乳腺癌治疗中的效果及对患者脂质运载蛋白-2表达的影响J.实用癌症杂志,2021,36(3):483-485.2 Qian WN,Li Z,Li RT,et al.Effect of Xihuang pill combined with TPregimen in treatment of advanced breast cancer J.Liaoning Journalof Traditional Chinese Medicine,2020,47(6):115-117.千维娜,李治,李仁廷,等.西黄丸联合TP方案治疗中晚期乳腺癌效果分析J.辽宁中医杂志,2020,47(6):115-117.表6两组患者的毒副反应发生率比较例(%)Table 6Comparison of the incidence of side effects between the twogroups n(%)组别联合组单一组2值P值例数3229上消化道反应6(18.75)6(20.69)0.0360.849中性粒细胞减少8(25.00)6(20.69)0.1600.689血红蛋白减少8(25.00)6(20.69)0.1250.724蛋白尿6(18.75)4(13.79)0.2730.602表5两组患者治疗前后的外周血PI3K/Akt通路相关蛋白表达量比较(x-s)Table 5The expression of PI3K/Akt pathway related protein inperipheral blood between the two groups(x-s)时间治疗前治疗后组别联合组单一组t值P值联合组单一组t值P值例数34343434p-PI3K0.850.190.820.180.6860.4950.330.08a0.790.1416.6350.001p-AKT0.780.130.800.150.5880.5590.280.04a0.760.1025.9870.001注：与同组治疗前比较，aP0.05。Note:Compared with that in the same group before treatment,aP0.05.2157海南医学2023年8月第34卷第15期Hainan Med J,Aug.2023,Vol.34,No.153Wang B,Sun T,Zhao Y,et al.A randomized phase 3 trial of Gem-citabine or Nab-paclitaxel combined with cisPlatin as first-line treat-ment in patients with metastatic triple-negative breast cancer J.NatCommun,2022,13(1):4025.4Xin L,Zhang H,Zhang S,et al.Docetaxel,carboplatin plus trastu-zumab as neoadjuvant setting in patients with early-stage human epi-dermal growth factor receptor 2 positive breast cancer:a 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