山药山楂茶对糖尿病阳痿模型大鼠阴茎NF-KB的影响.pdf

新疆中医药40Xinjiang Journal of Traditional Chinese Medicine2023年第41卷第3 期2023Vol.41No.3方药研究山药山楂茶对糖尿病阳痿模型大鼠阴茎NF-KB的影响岳宗相，何俊安，易琼，张培海，钟振东3（1眉山市中医医院，四川眉山6 2 0 0 10；2 成都中医药大学，四川成都6 10 0 7 5；3四川省人民医院，四川成都6 10 0 7 0）摘要：目的观察山药山楂茶对糖尿病性阳痿模型大鼠阴茎核转录因子NF-kB(nuclear factor-kappa B)的影响。方法取SPF(SpeceficpathogenFree)级5月龄雄性CK(GotoKakizaki)大鼠45只，随机分为空白组、模型组、治疗组，另设15只Wistar大鼠为正常组；予以一氧化氮合成酶（eNOS)抑制剂L-NAME造模，高脂饲料喂养，药茶灌胃4w。观察大鼠一般情况，阴茎勃起次数及勃起率,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清睾酮水平、WesternBlot法检测阴茎海绵体NF-kB蛋白水平。结果模型组与正常组及空白组相比，模型组勃起率和勃起次数明显低于正常组(P0.01)和空白组(P0.05);治疗组勃起率和勃起次数明显高于模型组（P0.05)；模型组血清睾酮水平低于治疗组(P0.05);模型组阴茎NF-kB蛋白水平明显高于治疗组（P0.01)。结论山药山楂茶可以改善糖尿病性阳痿大鼠勃起功能,可以调节糖尿病性阳痿大鼠阴茎海绵体(NF-kB)蛋白水平。关键词：山药山楂茶；糖尿病性阳瘘；NF-kB蛋白；睾酮糖尿病是以血糖升高为主要特征的一种全身性、代谢性疾病，糖尿病患者人数呈逐年增加并全球蔓延趋势，目前有研究统计全球糖尿病患者已达到3.6 6 亿，已成为全人类的公共卫生问题。作为发展中国家的中国糖尿病情况更为严峻,其患者已超过1亿,是糖尿病病情重灾区。众所周知,糖尿病本身并不可怕,可怕的是糖尿病导致的并发症3,尤其是糖尿病血管并发症,是糖尿病患者致残、致死主要因素之一,因此糖尿病并发症防治研究4成为当前热点之一。而糖尿病性阳痿（diabetic erectiledysfunction,DED)是男性糖尿病患者最常见、最苦恼的并发症之一,不仅影响到患者的生活质量及患者的家庭幸福,还是其他糖尿病并发症发生的前期征兆5,因此,糖尿病性阳痿应引起糖尿病患者及内分泌科医生的重视。有资料显示男性糖尿病患者并发阳瘘的患病率是非糖尿病患者患病率的3 5倍,50 岁以上男性糖尿病患者阳痿患病率高达7 5%，70岁以上患病率则高达9 5%。笔者从事糖尿病及其并发症相关研究多年,在中医药防治糖尿病并发症上做了大量工作，我们的前期研究8 发现山药山楂茶可以改善糖尿病性阳痿患者的勃起功能，在糖尿病性阳痿防治上有较好作用，但其深在机制未明，限制了临床应用推广，为进一步揭示其作用机理设计了本次研究。1材料1.1动物购买雄性5月龄大GK大鼠47 只和Wistar大鼠15只，均为无特定病原体（SPF)级别实验动物。GK大鼠购买于上海斯莱克(SLACCAS)实验动物有限责任公司，许可证号：2 0 2 0-0 0 0 5，质量合格证号：2007000512752。Wis t a r 大鼠购买于成都达硕实验动物有限公司，SCXK(川)2 0 2 0-2 4。实验期间所有实验动物饲养于室温2 2 2 4的动物饲养室内，所有实验动物不限制摄食和饮水，适应性饲养一周后使用。1.2药物制备山药山楂茶：药物组成（按照成人体重6 0 kg，每日剂量配制）黄芪40 g、赤芍2 0 g、肉桂10g、山药40 g、炒山楂40 g，购自眉山市中医医院中药房，批号：2 0 112 2；按照上述比例制成混悬液：由眉山市中医医院药剂科协助制作。2方法2.1动物及分组适应性饲养1w后,检测尾静脉血随机血糖，剔除随机血糖 7.8 mmolL-的Wistar大鼠1只,余14只Wistar大鼠为正常组。2.2造模及给药配制一氧化氮合成酶(eNOS)抑制剂L-NAME溶液（按照0.1mgmL-浓度，用灭菌纯净水配制),给予模型组、治疗组大鼠自由摄取;空白组及正常组大鼠则饮用灭菌纯净水。配制高脂饲料（按照普通全价饲料占8 8.2%，精炼猪油占10%，胆固醇占1.5%，猪胆盐占0.3%比例制作）,给予模型组、治疗组、空白组自由摄取；正常组则给予普通全价大饲料自由摄取喂养。造模时即开始给药，给药方法如下：模型组、空白组和正常组每天按5mLkg-灌服生理盐水，,每天1次，连用4w；治疗组每天按1.44gkg（相当于体重为60kg成人剂量的10 倍）灌服山药山楂茶混悬液，每天1次，连用4W。2.3观测指标2.3.1观察记录大鼠的精神状态、体毛色泽、活动、摄食、饮水、尿色、尿量等一般情况。每周称重一次，根据体重调整给药。2.3.2阴茎勃起功能情况，给药4w后按10 0 pgkgl剂量在每只大鼠颈项皮肤松弛处注射APO，注射后观察记录大鼠阴茎有无勃起及勃起次数，观察时间30min，以阴茎体增长和阴茎龟头充血计为阴茎勃起1次。2.3.3大鼠处死前1日晚8 时开始禁食不禁水，测处死当日上午8 时空腹血糖。2.3.4睾酮的检测,脱颈椎处死大鼠后,右心腔采血1.5mL,置于无菌离心管，2 5静置2 h后离心（转速4000rmin-)5min，收集上层血清置于-2 0 冰箱备用,待所有标本收集后,统一使用ELISA试剂盒完成测定。2.3.5NF-kBp56蛋白的检测 9,处死大鼠后,解剖游离大鼠阴茎海绵体组织并剪碎，用超声匀浆器制作阴茎海绵体组织匀浆液，置离心机（转速40 0 0 rmin-)离心2 0 min后取上清液1mL;WesternBlot(免疫印迹)法检测阴茎海绵体中NF-kB p56含量,蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳分离；电转膜；抗原抗体反应：一抗为兔抗NF-kBp56多克隆抗体，稀释成1:40 0;显色；曝光，显影，定影;NF-kBp56蛋白相对含量以目的蛋白与-actin的灰度比值表示 0。2.4统计学处理统计数据以均数标准差（xs）新疆中医药Xinjiang Journal of Traditional Chinese Medicine表示，用SPSS17.0软件进行各组间单因素方差分析，方差齐时采用LSD，方差不齐时采用非参数检验,以P0.05为差异有统计学意义。3结果3.1各组大鼠一般情况实验开始造模前所有大鼠精神状态好，反应灵敏，体毛光亮润泽。与正常Wistar大鼠相比,GK大鼠饮水量多,摄食量少，尿量及大便量多，体重偏轻。造模后，除正常组、空白组大鼠外，模型组和治疗组大鼠毛色逐渐加深、枯黄、体毛脱落，反应较迟钝，行动较迟缓，精神状态逐渐变差，模型组大鼠尤为明显。至试验结束时,治疗组死亡2 只（考虑与灌胃有关），模型组死亡2 只（考虑与灌胃有关）,其余组无死亡。3.2各组大鼠注射APO后阴茎勃起情况勃起功能比较，治疗组勃起次数及勃起率明显多于模型组(P0.01）,但低于正常组（P0.05);与空白组相比，治疗组勃起次数及勃起率明显多于空白组（P0.05)。见表1。表1各组大鼠注射APO后阴茎勃起的情况组别只数正常组14空白组15模型组13治疗组13注：与模型组比较：*P0.05,*P0.01；与空白组比较：P0.05,AP0.01。3.3各组大鼠空腹血糖及血清睾酮情况空腹血糖比较，治疗组空腹血糖水平明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.01);空白组空腹血糖高于正常组,差异有统计学意义(P0.05);空白组与模型组比较无统计学差异；血清睾酮水平比较，治疗组大鼠血清睾酮水平明显高于模型组，差异有统计学意义(P0.01);治疗组血清睾酮水平低于正常组,差异有统计学意义(P0.05)。见表2。表2 各组大鼠空腹血糖及血清睾酮情况（x土s）组别只数空腹血糖(mmolL-)正常组14空白组15模型组13治疗组13注：与模型组比较：*P0.05,*P0.01；与正常组比较：P0.05,P0.01。3.4各组大鼠阴茎NF-KBp56蛋白情况鼠阴茎NF-KBp56蛋白比较，治疗组大鼠阴茎NF-KB41勃起次数（x士s）勃起率（%）2.60.3*100*1.20.25*48*0.90.4231.80.5*492*4睾酮(ngdl-1)5.411.87*301.1746.90*8.842.614184.938.38*449.442.3598.338.367.21.20*4215.4626.73*新疆中医药42Xinjiang Journal of Traditional Chinese Medicinep56蛋白明显低于模型组，差异有统计意义（P0.01)；治疗组大鼠阴茎NF-KBp56蛋白高于正常组,差异有统计学意义(P0.05)。详见表3。表3各组大鼠阴茎NF-KBp56蛋白情况（xs）组别只数正常组14空白组15模型组13治疗组13注：与模型组比较：*P0.05，*P 0.0 1；与正常组比较：P0.05,P0.01。4讨论糖尿病性阳瘘(DED)是男性糖尿病患者常见并发症,也是男性糖尿病患者就诊于男科门诊的主要原因之一,其患病率随着患者糖尿病病程的延长逐渐增加,50 岁以上男性糖尿病患者患病率高达75%，7 0 岁以上则高达9 5%。糖尿病性阳痿不仅影响到患者的生活质量及家庭幸福，还是其他糖尿病并发症发生的前期征兆，因此备受患者及医生关注 12 和重视。常规的西医治疗为营养神经和改善循环，外科则以假体植人为手段，有一定的副作用且费用高，患者难以接受 13。该类患者更热衷于中医治疗。笔者从事中医药防治糖尿病性阳痿的临床及基础研究工作多年,糖尿病性阳痿归属于中医“消渴变证”“阴萎”“阳痿”及“络病”范畴 4,其核心机理是“虚”和“瘀”,中医治疗以补虚祛瘀通络为主法 15-16。有研究 7 显示补肾活血类中药可提高DED模型大鼠阴茎白膜弹性纤维数量，减轻阴茎组织实质性损伤，诱导阴茎组织一氧化氮合成酶(nNOS)的生成表达,可促进神经元的修复，改善阴茎组织血液循环及神经传导。还有资料 18 显示,补肾活血类中药治疗DED效果明显,因此中医药治疗糖尿病性阳痿有一定的理论及临床优势，但因中药口感及煎煮方法的复杂性导致患者不能坚持服用,限制了中药的临床应用 19 。鉴于此，笔者对中药剂型进行了改进，研制出药茶山药山楂茶并进行了临床研究，发现山药山楂茶在糖尿病性阳痿的防治上有较好作用 2 0 。现代医学研究 2 认为,DED的发生发展与机体大量释放的炎症因子所导致阴茎海绵体损伤有关，而NF-KB是炎症链的“基因开关”,参与许多炎症因子的释放和调控 2 。阴茎勃起功能状况与机体激素水平有关,尤其是雄激素水平,有研究 2 3 显示血清睾酮水平的下降会导致阴茎勃起障碍。有研究 2 4发2023年第41卷第3 期2023Vol.41No.3现蛋白质的非酶氧化、晚期糖化终产物及氧化应激产生的活性氧族均可激活NF-KB，而激活的NF-KB 可以启动下游基因的转录，导致包括 TNF-、白介素等在内的一系列炎症因子的大量释放和过NF-kB/-actin度表达，致使炎症细胞聚集、粘附，还能刺激机体产0.78 0.04*生大量自由基,形成恶性循环圈，损伤阴茎海绵体1.23 0.0844血管及神经,是导致DED形成的重要因素 2 5。还有研究 2 6 发现NF-KB不仅可调节细胞线粒体合成及细胞1.55 0.0544功能，还可以抑制细胞线粒体中活性氧的产生，进0.82 0.12*而调整机体整个氧化系统与抗氧化系统状态，减少氧化应激损伤，并发现可通过调控NF-KB的表达可控制细胞线粒体生物合成，减少阴茎海绵体损伤 2 ,改善勃起功能。课题组前期研究 2 8 发现药茶山药山楂茶对糖尿病性阳痿患者具有防治作用，但其机理未明，为临床推广应用提供依据，设计了本次课题。本实验结果显示，治疗组阴茎勃起次数及勃起率高于模型组（P 0.0 1），治疗组阴茎组织NF-KB蛋白明显低于模型组（P0.01），治疗组血清睾酮水平高于模型组(P0.01)。因此，我们认为山药山楂茶可以提高糖尿病性阳痿大鼠阴茎勃起功能,其机理可能是通过调控NF-KB蛋白水平，提高血清睾酮水平而实现。参考文献：1】郭立新.糖尿病的流行势态和应对策略.中国临床保健杂志，2020,23(4):433-436.2于丹丹,娄瑞可,林洁娜.男性2 型糖尿病患者血糖水平及其对性生活质量的影响 J.海南医学，2 0 2 0,31（13）：16 6 6-16 6 8.3】韦婷婷，孟立锋，李丽容，等.中医药干预Wnt/-catenin信号通路治疗糖尿病肾病的研究概述 J.海南医学院学报,2 0 2 1,（9)：1-9.4】张静静，祝超瑜，肖元元，等胰高血糖素样肽1受体基因rs3765467变异与2 型糖尿病的关联研究 .上海交通大学学报（医学版）,2 0 2 1,41(9)：12 15-12 2 1.5韩莉,邹大进.减重手术治疗肥胖型2 型糖尿病热点问题 ,中国实用内科杂志，2 0 17,37（1）：9-12.6林向楠,石磊,高振利,等.糖尿病性勃起功能障碍中血管因素发病机制的研究.中国男科学杂志,2 0 16,30(10)：6 6-6 9.7邓云山.糖尿病神经病变与勃起功能障碍研究进展 中国性科学,2 0 13,2 2(3):13-16,19.8岳宗相,卓文秀,黄荣利,等.山药山楂茶治疗肾阳虚型糖尿病性阳痿临床研究 J.河南中医，2 0 19 39（7)：10 7 2-10 7 5.9何荃,王萌,魏萌,等.冬凌草甲素抑制NF-KB p65活化对糖尿病肾病幼龄大鼠肾损伤和免疫紊乱的影响 J.西部医学,2 0 19,31(11):1646-1650,1656.10刘丽,王文进,朱浩,等.核因子-kB在糖尿病性阴茎勃起功能障碍中的作用 J.解剖学杂志，2 0 11,34（2）：2 0 3-2 0 6.11 岳宗相,卓文秀,张培海.中医药治疗糖尿病性阳痿 .河南中医,2 0 2 0,40(1):2 9-31.12李宪锐，张耀圣，王景尚，等.糖尿病性勃起功能障碍中西医机2023年第41卷第3 期2023Vol.41No.3新疆中医药Xinjiang Journal of Traditional Chinese Medicine43中医教育“元宇宙”下的针灸推拿学教学模式的探索与展望田育魁，摆雪，刘俊昌，马鑫文（1.新疆医科大学附属中医医院，新疆乌鲁木齐齐8 30 0 0 0)摘要：在未来的世界中，元宇宙的经济、教育和生活方式都在受到深刻的影响和变化。元宇宙教学将会对现有的教学模式产生重大影响，从而使教学条件得到改善，改进了教育环境，提高学习的效果，增加学习的效率，扩大学生的学习资源，使混合实际的学习方法在各个领域得到广泛地运用，将混合现实教学法应用于所有领域。这也是利用元宇宙进行教学的最基本思路。本文探讨了在元宇宙理论下中医针灸推拿学未来的教学模式所涉及的若干问题，包括未来元宇宙教学模式下的针灸推拿专业教学模式的架构与实现，以及对于未来针灸推拿学的展望。关键词：元宇宙；针灸推拿学；远程教育“元宇宙”的观念和想象在八十年代的一部小说作品雪崩里早就有了描述。体现了人类对于突破时空限制的期待，让人体找到通向另一个感官体下8 30 0 0 0；2.新疆医科大学中医学院，新疆乌鲁木验的门户，构成一个合意幻觉的共享虚拟世界叫。2018年电影头号玩家更是将元宇宙概念的解读搬上银幕，它集合了目前人们对元宇宙概念的理解基金项目：新疆医科大学附属中医医院院级课题（ZYY2021JX01）；新疆高校本科教育教学研究和改革项目（PT-2021020）；新疆医科大学附属中医医院院级课题教育教学研究专项（ZYY2019JX08）作者简介：田育魁（19 9 2 一）,男，主治医师，从事推拿手法治疗骨关节及脏腑相关疾病的教学及临床研究。Tel:[phone],E-mail：*通讯作者：马鑫文（19 8 4一），男，讲师，副主任医师，从事推拿治疗骨关节及脏腑疾病的临床与基础研究。Tel:[phone],E-mail：理研究及治疗进展.中国性科学,2 0 2 0,2 9(1)：111-115.13李宪锐,张耀圣,王景尚,等.糖尿病性勃起功能障碍中西医机理研究及治疗进展 J.中国性科学,2 0 2 0,2 9(1)：111-115.14林家坤，张运萍，姚晓文，等.2 型糖尿病勃起功能障碍中医诊治进展 J.光明中医,2 0 2 1,36(1)：152-155.15岳宗相，刘平，张培海，等.从气阴两虚脉络瘀阻论治糖尿病阳痿 J.四川中医,2 0 11,2 9(6)：2 4-2 5.16 尹昀东,方朝晖.糖尿病性勃起功能障碍中医药研究进展 J.中医药临床杂志，2 0 19,3111)：2 0 2 7-2 0 30.17潘章宇,黄江涛.益肾活血汤在糖尿病性阳痿患者治疗中的效果分析 J临床医药文献电子杂志，2 0 2 0,7 32)：46.18岳宗相，卓文秀，张培海.中医药治疗糖尿病性阳痿 河南中医,2 0 2 0,40(1):2 9-31.19张迅,梁季鸿，刘志飞.糖尿病性勃起功能障碍的中医药治疗新进展 J.微创医学,2 0 19,14(2：18 2-18 5,18 8.20岳宗相，王艳红，黄荣利，等参芪复方对糖尿病大鼠血管PGC-1mRNA的影响 J.河南中医,2 0 17,37(1)：6 8-7 1.21 SST-PIERRE J,DRORI S,ULDRY M,et al.Suppression of reactiveoxygen species and neu rodegeneration by the PGC-1 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