气相色谱法测定硫酸氢氯吡格雷中残留溶剂.pdf

总第2 13 期2023年第8 期分析与测试气相色谱法测定硫酸氢氯吡格雷中残留溶剂李素华1，吴绍锋2（1.广东省中医院药学部，广东广州510 0 0 6；2.广州中医药大学基础医学院实验教学中心，广东广州510 0 0 6）摘要：目的：建立顶空气相色谱法，测定硫酸氢氯吡格雷中甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯4种残留溶剂方法。方法：采用DB-624(6%氰丙基苯基-94%甲基聚硅氧烷,3 0 m0.53mm3.0m)毛细管色谱柱；检测器：FID;检测器温度：2 50；氮气为载气，流速为3.0 mL/min，分流进样，分流比为3：1；程序升温：起始温度为40，维持6 min，以10/m i n 的速率升温至2 0 0,维持8 min;顶空平衡温度为8 0,平衡时间为3 0 min。结果：此色谱条件下，4种残留溶剂均能达到良好分离，空白无干扰。甲醇在6 1.52 6 15.2 0 g/mL范围内（r=1.0000)，乙醇在10 0.2 1 10 0 2.12 g/mL范围内（r=1.0000），丙酮在10 0.0 3 10 0 0.2 5g/mL范围内（r=1.0000），乙酸乙酯在10 2.0 2 10 2 0.19g/mL范围内（r=1.0 0 0 0)线性关系良好。平均回收率（n=9)分别为甲醇10 0.10%(RSD=0.29%），乙醇10 0.14%(RSD=0.30%)，丙酮100.16%(RSD=0.38%)，乙酸乙酯10 0.0 2%(RSD=0.15%)。结论：方法灵敏、准确，可用于有效检测硫酸氢氯吡格雷中有机残留溶剂。关键词：硫酸氢氯吡格雷；气相色谱法；残留溶剂；线性；准确度中图分类号：0 6 57.7+1文献标识码：A硫酸氢氯吡格雷 1-2 是血小板聚集抑制剂,主要2.2溶液的配制用于患者预防动脉粥样硬化血栓的形成。目前已有报2.2.1对照品贮备溶液道测定本品残留溶剂,但是，由于生产工艺不同,所用精密称取甲醇6 15.2 0 mg、乙醇10 0 2.12 mg、丙酮到的残留溶剂也各有差异，本品在生产过程中用到的1000.25mg、乙酸乙酯10 2 0.19mg,置于同一2 0 mL4种残留溶剂,分别为甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯。量瓶中,加DMF溶解并稀释至刻度,精密量取1mL目前未见报道同时测定上述4种残留溶剂 3-5。参照置于50 mL量瓶中，加DMF溶解并稀释至刻度,摇中国药典2 0 15年版与人用药品注册技术规范国际匀，作为对照品贮备液。协调会(ICH)相关要求,建立适合生产工艺的顶空气2.2.2对照品溶液相色谱法测定硫酸氢氯吡格雷中甲醇、乙醇、丙酮、乙精密称取对照品贮备液5.0 mL置于10 mL量瓶酸乙酯4种残留溶剂方法。本法灵敏、准确，可用于有中,用DMF溶解并稀释至刻度,混匀,即得对照品溶效检测硫酸氢氯吡格雷中有机残留溶剂。液。精密量取2 mL置于顶空瓶中,轧盖，密封。1仪器、样品与试剂2.2.3供试品溶液仪器：7 8 90 B气相色谱仪，氢火焰离子化检测器精密称取本品0.2 0 g于顶空瓶中，加人DMF(FID);Agilent 7694E 顶空进样器。2.0mL,轧盖密封，溶解，作为供试品溶液。硫酸氢氯吡格雷，北京药物研究院化药部提供；2.3系统适用性实验甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯,色谱纯,迈瑞达;N,N-二取空白溶剂DMF、对照品溶液和供试品溶液，按甲基甲酰胺(DMF),HS-GC,CNW。“2.1”中色谱条件进样分析，记录色谱图。结果表明，2实验方法与结果空白溶剂DMF无干扰，上述4种溶剂峰型良好，出峰2.1色谱条件顺序分别为甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯,分离度均大色谱柱：DB-624(6%氰丙基苯基-94%甲基聚硅于2.0。氧烷,3 0 m0.53mm3.0m)毛细管色谱柱；检测2.4线性关系考察器：FID；检测器温度：2 50；氮气为载气，流速为精密量取对照品贮备溶液1.0、2.5、4.0、5.0、9.0 mL3.0mL/min，分流进样，分流比为3：1；程序升温：起置10 mL量瓶中,用DMF稀释至刻度，混匀,得到对始温度为40,维持6 min,以10/min的速率升温照品系列溶液I-VI。分别量取对照品系列溶液至2 0 0,维持8 min;顶空平衡温度为8 0,平衡时2.0mL置顶空瓶中,密闭,按上述 2.1 中色谱条件进间为3 0 min;进样量:1 mL。样分析。以峰面积(A)为纵坐标,质量浓度(p)为横坐标，进行线性回归,结果表明甲醇质量浓度在6 1.52 615.20g/mL范围内、乙醇质量浓度在10 0.2 1收稿日期：2 0 2 2-12-0 9作者简介：李素华，女，198 8 年出生，毕业于广州中医药大学，本科，主要从事药学研究工作。山西化工Shanxi Chemical IndustryTotal 213No.8,2023D0I:10.16525/14-1109/tq.2023.08.015文章编号：10 0 4-7 0 50(2 0 2 3)0 8-0 0 41-0 3山西化工第43 卷10002.12g/mL范围内、丙酮质量浓度在10 0.0 3 1000.25g/mL范围内、乙酸乙酯质量浓度在10 2.0 2 1020.19g/mL范围内,线性关系良好(见图1)。400y=0.5531x-4.4795300600200y=0.5589x-2.0137100R=1.000 0?0质量浓度/(g/mL)1-1甲醇线性2000y=1.5326x-3.30141500R2=1.000 0.01000500质量浓度/g/mL)1-3丙醇线性图1甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯线性图2.5进样精密度实验精密量取对照品溶液2.0 mL置顶空瓶中，轧盖，密封，平行6 份，按“2.1 中色谱条件进样分析，计算甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯的RSD,结果见表1。表1进样精密度结果名称甲醇Prec-1171Prec-2171峰Prec-3面Prec-4积Prec-5APrec-6平均值RSD/%由表1可知：甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯RSD均不大于40%，表明仪器进样精密度良好。2.6定量限和检测限将“2.2.2”项下对照品溶液用DMF逐级稀释进样，当信噪比(S/N)=10时，为检测限浓度，当信噪比(S/N)=3时为检测限浓度,结果见表2。表2 灵敏度结果名称信噪比(S/N)10.3甲醇3.311.2乙醇3.510.5丙酮2.8乙酸乙酯12.13.1由表2 可知，该法灵敏度高，供试品浓度满足本品中残留溶剂检测。2.7重复性同一批样品平行测定6 次，按外标法计算供试品中待测溶剂的残留量，并对6 次测定结果进行比较，来评价方法的重复性。结果见表3。表3 残留溶剂-重复性结果名称甲醇Repeat-1Repeat-2Repeat-3R2=1.000 0质量分数Repeat-44001%2000500100050010001500乙醇2722731752721732751722701712741722730.930.64质量浓度/g/mL)0.50.22.50.80.70.21.10.3乙醇0.008 50.008 70.00910.0089Repeat-50.008 8Repeat-60.008 50500质量浓度/(g/mL)1-2乙醇线性y=0.918 1x-1.753 4R2=1.000 01 000800600400200质量浓度/(g/mL)1-4 乙酸乙脂线性丙酮乙酸乙酯7664667654657684667634687684607664627664650.250.64灵敏度/%0.000 50.000 150.00250.000 750.000 70.000 210.00110.000 33丙酮乙酸乙酯1 0001 5005001000 1500平均值R.SD/%由表3 可知,同一批样品6 次结果测定值基本一致，表明方法重复性好。2.8加样回收率精密称取9份2 0 1912 12 批样品0.2 0 g于顶空瓶中,分别加入I、IV、V对照品系列溶液2.0 mL,各3 份，密闭，使溶解。按“2.1 中色谱条件进样分析结果见表4 表7。表4甲醇加样回收实验结果（n=9）称样量利稀释本底加人量测得量回收率区平均值名称RSD/量/mg倍数/ugAccu-1-1200.1120492.16 490.5699.67Accu-1-2202.1220492.16492.1299.99Accu-1-3205.1220492.16Accu-2-1210.3420615.20616.66100.24Accu-2-2201.5620615.20614.7099.92100.100.29Accu-2-32207.1320615.20 619.29100.66Accu-3-1200.21201 107.361105.8999.87Accu-3-2208.18201 107.361108.80100.13Accu-3-32202.89201 107.361 108.51100.10表5乙醇加样回收实验结果（n=9）本底称样量稀释名称倍数量/mg/ug/ugAccu-1-1200.1120801.70800.9099.90Accu-1-2202.1220801.70805.89 100.52Accu-1-3205.1220801.70804.94100.40Accu-2-1210.34201002.121 000.3499.82Accu-2-2201.56201 002.121002.11100.00100.140.30Accu-2-3207.132 01002.121007.82100.57Accu-3-1200.21201 803.821 800.0999.79Accu-3-2208.18201 803.821 806.90100.17Accu-3-3|2202.89201 803.821805.48100.09表6丙酮加样回收实验结果（n=9）本底名称称样量禾稀释/mg倍数量/ug/ugAccu-1-1200.1121.75800.20802.12 100.02Accu-1-2202.1221.77800.20803.12 100.14Accu-1-3205.1221.79800.20801.1199.89Accu-2-1210.3421.841000.251 000.2299.81Accu-2-2201.5621.761 000.251 001.3499.93100.160.38Accu-2-3207.1321.811 000.251 003.67100.16Accu-3-1200.2121.751800.451801.4799.96Accu-3-2208.1821.821 800.451810.78100.47Accu-3-32202.8921.781 800.451820.56101.020.008 82.68/ug/ug493.67 100.31加人量测得量回收率平均值RSD/ug1%加人量测得量回收率平均值RSD/ug1%1%1%1%1%2023年第8 期表7 乙酸乙酯加样回收实验结果（n=9本底称样量稀释加人量测得量回收率平均值RRSD/名称/mg倍数量/ug/ug1%/ugAccu-1-1200.1120816.15 815.7899.95Accu-1-2202.1220816.15813.8599.72Accu-1-3205.1220816.15817.93100.22Accu-2-1210.34201020.191 022.12100.19Accu-2-2201.56201020.191020.95100.07100.020.15Accu-2-3207.13201020.191 020.1199.99Accu-3-1200.21201836.341 837.77100.08Accu-3-2|208.18201 836.341 836.89100.03Accu-3-3202.89201836.341835.6299.96由表4表7 可知,甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯的平均回收率均在90%110%,RSD%均小于5,说明供试品对残留溶剂的检测无干扰，本方法准确度高。2.9样品测定取硫酸氢氯吡格雷四批样品（批号：2 0 1912 13、20191215、2 0 1912 17、2 0 1912 19）按“2.2”中溶液配制方法，按“2.1中色谱条件进样分析，按外标法计算4种有机溶剂残留量,结果见表8。3结论该法选用DB-624色谱柱是考虑到4种溶剂的极性为中等偏高极性，且为实验室常用的气相色谱GC Determination of Residual Solvents in Clopidogrel Bisulfate(1.Department of Pharmacy,Guangdong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine,GuangzhouGuangdong 510006,China;2.Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine Laboratory,Abstract:Objective:To establish a method of headspace gas chromatography for the determination of four organic residual solvents(methanol,ethanol,acetone and ethylacetate)in Clopidogrel Bisulfate.Methods:A capllary GC method was established with FID detector,using the DB-624(6%cyanide propylbenzene-94%-dimethylsiloxane copolymer,30 m 0.53 mm 3.0 m)capillary column.The injector:FID;The injector temperature:250.T h e c a r r i e d g a s w a s N2,t h e f l o w r a t e w a s 3.0 mL/mi n.T h e me t h o d w a s s p l i t i n j e c t a n d t h e s p l i t r a t i owas 3:1.The column temperature was initially maintained at 40 f o r 6 mi n a n d t h e n u p t o 2 0 0 a t t h e r a t e o f 10 C/mi n f o r 8 mi n;T h eheadspace equilibrium temperature was 80 C,the balance time was 30 min.Results:The detected four solvents were separated completely,blank control had no interference.The peak area and concentration of methanol showed a good linearity within the concentration range of61.52 615.20 g/mL(r=1.000 0).The peak area and concentration of ethanol showed a good linearity within the concentration range of100.21 1002.12 g/mL(r=1.000 0).The peak area and concentration of acetone showed a good linearity within the concentration range of100.03-1000.25 g/mL(r=1.000 0).The peak area and concentration of ethylacetate showed a good linearity within the concentrationrange of 102.021020.19 g/mL(r=1.000 0).The average recovery of methanol,ethanol,acetone,ethylacetate was calculated as 100.10%(RSD%=0.29),100.14%(RSD%=0.30),100.16%(RSD%=0.38),100.02%(RSD%=0.15),99.71%(RSD=3.19%).Conclusion:This methodwas accurate,sensitive and simple,and could be effectively used in the determination of residual organic solvents in Clopidogrel Bisulfate.Key words:Clopidogrel Bisulfate;gas chromatography;residual solvents;linearity;accuracy李素华,等：气相色谱法测定硫酸氢氯吡格雷中残留溶剂1%Li Suhua,Wu Shaofeng?Guangzhou Guangdong 510006,China)表8 样品测定结果(n=3)残留溶剂检测量/%名称20191213甲醇乙醇丙酮乙酸乙酯柱。方法验证过程中对进样口温度2，氮气流速0.2 mL/min，分流比1,顶空平衡温度5,平衡时间5min作了耐用性考察，结果显示耐用性良好。综上所述,本方法适用于同时分析硫酸氢氯吡格雷中4种残留溶剂,方法灵敏、准确，可用于有效检测硫酸氢氯吡格雷中有机残留溶剂的检测。1王雅君.阿司匹林联合小剂量氯吡格雷治疗7 5岁以上急性脑梗死患者的效果及安全性 J.中国现代药物应用,2 0 2 0,14(11)：118-120.2郑壮辉，龚煜，王兵.阿司匹林联合氯吡格雷在缺血性脑卒中中的应用 J.中国现代药物应用，2 0 16,10(7)：13 6-13 7.3商国举，全红娜，蔡振华，等.气相色谱法测定硫酸氢氯吡格雷中残留溶剂 J.现代仪器与医疗，2 0 15,2 1(1)：6 1-6 3.4罗忠华，文景兵.静态顶空气相色谱法测定原料药硫酸氢氯吡格雷有机残留溶剂 J.湖南师范大学自然科学学报，2 0 13,3 6(1)：58-62.5赵海桥，付建,刘存领，等.顶空气相色谱法测定硫酸氢氯吡格雷中有机溶剂残留量 J.齐鲁药事，2 0 11,3 0(8)：455-457.201912150.0110.008参考文献201912170.011201912190.006