黔产追风伞总黄酮含量测定.pdf

黔产追风伞总黄酮含量测定姜 特黄 颖李 军何兰兰马四补张丽艳(贵州中医药大学贵州 贵阳)摘 要:目的:优选追风伞中总黄酮的提取工艺建立追风伞总黄酮含量测定方法测定贵州不同产地追风伞药材中总黄酮的含量 方法:以芦丁为对照品采用紫外分光光度计法测定不同产地追风伞药材中总黄酮的含量 结果:根据单因素试验确定了总黄酮的最佳提取工艺以 乙醇作为提取溶剂回流提取 在 波长下所得的总黄酮含量最高 测得 批追风伞中总黄酮含量在 之间平均值为 结论:优选的提取工艺稳定可行该方法操作简单、重复性好可为追风伞药材质量标准的制定提供参考关键词:追风伞总黄酮含量测定质量标准中图分类号:文献标识码:文章编号:()():.:.:追风伞为报春花科植物狭叶落地梅(.)和落地梅()的全草分布于湖北、湖南、广东、广西、四川、贵州、云南等地具有祛风通络、活血止痛之功效用于治疗风湿痹痛、四肢拘挛、半身不遂、小儿惊风、跌仆、骨折等在贵州作为苗药使用始载于贵州民间方药集苗药名为“科土欧”(贵州黔东南州)追风伞现载于 版贵州省中药材、民族药材质量标准且仅记录了形状和显微鉴别并没有可以反映追风伞质量的相关指标无法对其进行质量评价追风伞的主要成分为黄酮类、甾醇类、脂肪酸类及挥发油类化合物其中黄酮类化合物也是珍珠菜属植物的主要活性成分之一 研究表明追风伞黄酮可抗氧化、抗风湿、抗炎 在淫羊藿、头花蓼等苗药中黄酮已作为该药材的质量评价指标之一 因此黄酮类成分可作为追风伞药材质量评价的指标之一生命科学/第 卷黔产追风伞药材主要来源于报春花科植物狭叶落地梅(.)因此本研究考察了贵州省贵阳、遵义、毕节 批药材的总黄酮提取工艺采用紫外可见分光光度法测定了 批追风伞总黄酮含量旨在为追风伞药材的质量控制及贵州民族药特色产业的可持续发展研究与应用提供参考 材料与试药.仪器 超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)型电热恒温水浴锅(上海一恒科学仪器有限公司)型十万分之一电子分析天平(瑞士梅特公司)可见紫外分光光度计(日本岛津公司)数显恒温水浴锅(常州普天仪器制造有限公司).试药芦丁对照品(批号:购于中国药品检定研究院)甲醇(分析纯天津市北辰方正试剂有限公司批号:)乙醇(分析纯天津市北辰方正试剂有限公司批号:)亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠(分析纯国药集团化学试剂有限公司批号:、)纯净水 本实验采用的追风伞样品来源信息见表 追风伞药材由国药集团同济堂(贵州)制药有限公司提供药材经贵州中医药大学植物栽培教研室魏升华教授鉴定为报春花科植物狭叶落地梅(.)的全草表 追风伞样品来源编号产地批号编号产地批号贵州遵义贵州贵阳贵州遵义贵州毕节贵州遵义贵州毕节贵州遵义贵州毕节贵州遵义贵州毕节贵州贵阳贵州遵义贵州贵阳贵州毕节贵州贵阳 方法与结果.溶液的制备 供试品溶液制备:精密称取追风伞粉末 精密加入 乙醇溶液 回流 过滤即得追风伞供试品溶液对照品溶液制备:精密称取芦丁对照品 置 容量瓶中用甲醇定容至刻度得浓度为 /的对照品溶液.显色条件精密吸取上述供试品溶液 置 容量瓶中加入 亚硝酸钠溶液 混匀放置 加入 硝酸铝溶液 混匀放置 加入 氢氧化钠溶液 混匀放置 后加水至刻度线摇匀离心 (/)以相应试剂为空白于紫外可见分光光度计 波长下检测测定其吸光度.检测波长确定精密量取芦丁对照品溶液 置 容量瓶中按“”项下显色于紫外可见分光光度计 处进行全波长扫描 结果显示对照品溶液在波长 左右吸收峰值较大根据查阅相关文献最终确定总黄酮含量测定波长为 结果见图 M FON图 芦丁对照品溶液 波长扫描图 提取溶剂的考察精密称取追风伞粉末 共 份分别精密加入甲醇、乙醇、乙醇、乙醇、乙醇、乙醇各 按“”项下供试品溶液制备显色后于 波长下检测 结果表明以 乙醇溶液作为供试品提取溶剂总黄酮含量最高故选择 乙醇溶液作为追风伞总黄酮含量测定提取溶剂贵 州 科 学():表 不同提取溶剂考察结果序号称样量/溶剂浓度/(/)含量/(/)平均值/(/).甲醇.乙醇.乙醇.乙醇.乙醇.乙醇.提取时间的考察精密称取追风伞粉末.共 份分别精密加入 乙醇 按“.”项分别提取、显色后在 波长下检测 结果表明提取时间为 时测得的总黄酮含量较大故选择 作为供试品提取时间表 不同提取时间考察结果序号称样量/时间/浓度/(/)含量/(/)平均值/(/).供试品溶液提取方法的考察精密称取追风伞粉末.共 份精密加入乙醇溶液 按“.”项分别采用超声、回流、静置三种方式提取显色后在 波长下检测 结果表明回流和超声两种方法提取供试品测得的总黄酮含量较高且差异不明显为实验操作简便故以回流作为供试品溶液提取方法 结果见表表 不同提取方法的考察序号称样量/提取方法浓度/(/)含量/(/)平均值/(/).静置.超声.回流.方法学考察.线性关系精密称取芦丁对照品 置 容量瓶中加甲醇定容至刻度制成 /的芦丁对照品溶液备用分别精密吸取芦丁对照品溶液 、置 容量瓶中按照“”项下显色后测定吸光度以芦丁对照品的浓度为横坐标()吸光度为纵坐标()绘制标准曲线 结果表明在 /范围内吸光度值 与对照品的质量浓度 线性关系良好 表 线性考察序号浓度/(/)吸光度.ZY3NHN-图 芦丁线性考察图.精密度精密吸取 /的芦丁对照品溶液 共 份显色后于 波长下检测计算吸光度的 值 结果表明其吸光度平均值为、值为 表明该仪器具有较好的精密度生命科学/第 卷表 精密度试验结果()序号浓度/(/)吸光度/.稳定性精密称取追风伞粉末 按“”项下供试品溶液制备显色后分别在、时测定其吸光度计算其 值 结 果 表 明 样 品 吸 光 度 的 平 均 值 为 为 说明该样品在 内稳定性较好表 稳定性考察序号称样量/时间/吸光度/.重复性精密称取追风伞粉末 共 份按“”项下供试品溶液制备显色后测定其浓度计算其含量和 值 结果表明样品中总黄酮含量的平均值为 /为 说明该方法的重复性良好.加样回收试验精密称取追风伞 置 容量瓶中共 份分别精密加入芦丁对照品 按“”项下供试品溶液制备显色后测定计算其回收率及 值 结果表明芦丁对照品的平均回收率为 为 满足实验要求表 重复性考察序号称样量/浓度/(/)含量/(/)/.表 加样回收率试验序号称样量/已知量/加入对照品量/浓度/(/)测得量/回收率/平均回收率/.批追风伞中总黄酮含量测定精密称取 批追风伞粉末 每批次 份按“”项下供试品溶液制备显色后检测计算每批追风伞中总黄酮的含量 结果表明 批追风伞药材中总黄酮含量范围在 之间平均值为 由 批实测结果可知各批次间总黄酮含量存在差异其中第 批次最高为 第 批最低为 分析不同产地、采收期等差异对追风伞中总黄酮含量有较大的影响 结果见表 表 批追风伞中总黄酮含量测定批次称样量/浓度/(/)含量/平均值/.贵 州 科 学():续表 批次称样量/浓度/(/)含量/平均值/.讨论本实验采用紫外分光光度计法以芦丁为对照品测得 批追风伞中总黄酮含量在 之间平均值为 结果表明不同产地与不同批次之间的总黄酮含量差异较大而样品 和样品 中总黄酮含量较平均值低 刘趣采用()比色法测得 批贵州不同产地追风伞药材中总黄酮含量在 之间平均值为 其中贵州省贵阳市样品的总黄酮含量最低()雷山县样品的总黄酮含量最高()通过对比发现追风伞黄酮均值含量在 左右本实验总黄酮含量差值较小刘趣测得的总黄酮含量差异较大造成这种差异的原因可能与样品的栽培技术、土壤条件及采收时间等有关目前从追风伞中分离得到:木犀草素木犀草素葡萄糖苷刺槐素葡萄糖苷杨梅树皮素柚皮素芦丁刺槐素槲皮素槲皮素葡萄糖苷山柰酚葡萄糖苷异鼠李素葡萄糖苷等黄酮类成分 有学者采用 法测定了追风伞提取物中芦丁、异鼠李素葡萄糖苷、木犀草素和刺槐素的含量且快速、准确、重复性好为追风伞的质量控制提供了一定的参考但标识性成分仍需要进一步探索 结论通过对波长、提取溶剂、提取时间以及提取方法的考察最终确定测定条件为:以 的乙醇作为供试品提取溶剂在回流条件下提取 在 波长下所得的总黄酮含量最佳 该方法操作简单可行提取效率高可为追风伞中总黄酮的提取工艺提供参考致力于追风伞的进一步发展研究参考文献【】国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草:苗药卷.贵阳:贵州科技出版社.邱德文杜江.中华本草:苗药卷.贵阳:贵州科技出版社.贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药材质量标准.贵阳:贵州科技出版社:.张水国何顺志.贵州珍珠菜属药用植物的种类与分布.世界科学技术():.汪毅.黔本草:第一卷.贵阳:贵州科技出版社.张援虎何丽关焕玉等.追风伞中黄酮类成分的研究.中国中药杂志():.张援虎张吉明唐丽佳等.狭叶落地梅化学成分的研究.时珍国医国药():.向秋玲.追风伞的化学成分研究.贵阳:贵州大学.周欣梁光义王道平等.追风伞挥发油的化学成分研究.色谱():.常海涛孔维梁屠鹏飞.珍珠菜属植物化学成分及药理作用研究进展.中国中药杂志():.黄旭龙范东生高源等.苗药追风伞的研究进展.黑龙江农业科学():.郭青吴晓燕宁青等.淫羊藿茎叶中 种黄酮类成分分析及质量评价.中草药():.潘雯婷张丽艳谢宇等.主成分及聚类分析法对不同产地头花蓼的综合质量评价.中国实验方剂学杂志():.刘趣严福林徐文芬等.不同产地追风伞药材总黄酮含量分析.贵州科学():.陈婷徐加兵.高效液相色谱法测定追风伞提取物中 种酚酸类成分含量.中国药业():.收稿日期:修回日期:基金项目:贵州省科技计划项目(黔科合后补助)贵州中医药大学科研创新和探索专项()作者简介:姜 特女硕士研究生主要从事中药及民族药质量控制与新药研究通讯作者:张丽艳女教授主要从事中药及民族药质量控制与新药研究生命科学/第 卷