枯草芽孢杆菌和牛至提取物对北极狐生长性能和粪便中细菌数量的影响.pdf

116DOl:10.16720/ki.tcyj.2022.151Special Wild Economic Animal and Plant Research特产研究枯草芽孢杆菌和牛至提取物对北极狐生长性能和粪便中细菌数量的影响宗文丽，郭亮，邓露芳，辛娜，王冬冬（北京三元种业科技股份有限公司饲料分公司，北京10 110 5）摘要：本试验探究了枯草芽孢杆菌和牛至提取物对北极狐生长性能和粪便中细菌数量的影响。试验采用双因素3x3随机试验设计,选取6 0 日龄体重相近、健康且精神状态良好的北极狐2 40 只，随机分成10 个处理，每个处理设4个重复，每个重复6 只，公母比例1:1，试验期30 d。对照组添加金霉素7 50 mg/kg，试验组添加牛至提取物和枯草芽孢杆菌组合，添加量依次为12 5mg/kg+150mg/kg(1)125 mg/kg+300 mg/kg(II)、12 5 mg/k g +450 mg/k g(II)、2 50 mg/k g +150 mg/k g(IV)、2 50 mg/k g +30 0 mg /k g(V)、2 50 mg/k g +450 mg/k g(VI)、37 5mg/k g+150 mg/k g(VI)、37 5mg/k g+30 0 mg/k g(V)和37 5mg/kg+450mg/kg(IX)。结果表明试验组V末体重、平均日增重最高，其次是试验组VI和II；试验组V料重比最低，其次为试验组VI和II；腹泻率试验组I、V和VI分别比对照组低6.38%、6.49%和6.60%；粪便中试验组IX乳酸菌数量最高，试验组V大肠杆菌数量最低，乳酸菌/大肠杆菌比值最高。在本试验条件下，北极狐日粮中添加枯草芽孢杆菌2 50 mg/kg和牛至提取物30 0 mg/kg组合，生产性能效果最好，并且优于金霉素组。关键词：枯草芽孢杆菌；牛至提取物；北极狐；生长性能；粪便；细菌中图分类号：S865.2+3Effect of Bacillus subtilis and Origanum vulgare L.Extracts on theGrowth Performance and Numbers of Bacteria in the Feces of Arctic文献标志码：AFox(Alopex lagopus)文章编号：10 0 1-47 2 1(2 0 2 3)0 5-0 116-0 6ZONG Wenli,GUO Liang,DENG Lufang*,XIN Na,WANG Dongdong(Beijing Sanyuan Seed Technology Co.,Ltd.Feed Branch,Beijing 101105,China)Abstract:In order to explore the effect of Bacillus subtilis and origanum vulgare L.extracts on the growth performance of the arctic fox(Alopex lagopus),this trial was carried out.In the two-factor 3x3 randomized trial,At 60 days old,240 arctic foxes with healthy,good mentalstate and similar weight were randomly divided into nine treatments,4 replicates for each treatment,6 animals per replicate,the proportionof male and female in each group was 1:1.The trial was 30 days for the trial period.In the each trial,the control group was supple-mented with 750 mg/kg chlorotetracycline,the test groups were supplemented with 150 mg/kg bacillus subtilis and 125 mg/kg O.vul-gare extracts,300 mg/kg B.subtilis and 125 mg/kg 0.vulgare extracts,450 mg/kg B.subtilis and 125 mg/kg O.vulgare extracts,150 mg/kgB.subtilis and 250 mg/kg O.vulgare extracts,300 mg/kg B.subtilis and 250 mg/kg 0.vulgare extracts,450 mg/kg B.subtilis and 250 mg/kg0.vulgare extracts,150 mg/kg B.subtilis and 375 mg/kg 0.vulgare extracts,300 mg/kg B.subtilis and 375 mg/kg 0.vulgare extracts,450 mg/kg B.subtilis and 375 mg/kg O.vulgare extracts respectively.The results showed that both final weight and average daily gain ofthe arctic foxes in test group V was the highest among the test groups,followed by both test group VIl and test group II.The ratio of the ma-terial to weight of the arctic foxes in test group V was the lowest among the test groups,followed by both test group VIl and test group II.Diarrhea rate of the arctic foxes in test,group II,V,VIl were 6.38%,6.49%,and 6.60%lower than the control group respectively.The num-收稿日期：2 0 2 2-0 2-14基金项目：北京三元种业科技股份有限公司重点专项项目（SYZYZ20200005）作者简介：宗文丽（197 2-），女，黑龙江哈尔滨人，硕士，畜牧师，从事特种经济动物营养研究。通讯作者：邓露芳，女，北京人，博士，高级畜牧师，从事饲料营养与微生态制剂研究。第5期ber of fecal Lactobacillus the arctic foxes in test group IX was the highest.The number fecal E.coli of the arctic foxes in test group V wasthe lowest.Lactobacillus/E.coli ratio of the arctic foxes in test group V was the highest.It is thus clear that the performance effect of thearctic fox was the best under the test conditions and was better than the group with chlorotetracycline,when the combination of B.subtilis250 mg/kg and 300 mg/kg 0.vulgare extracts was added to the arctic fox diet.Key words:Bacillus subtilis;Origanum vulgare extract;arctic fox;growth performance;feces;bacteriu北极狐（Alopexlagopus）属于食肉目（Carnivoraes）犬科（Canidae)动物，产于亚欧北部、北美北部和南美洲南部，2 0 世纪50 年代从苏联引种至我国1。目前我国养殖区主要分布在黑龙江、内蒙古、辽宁、吉林、山东及河北等地区。益生菌和植物提取物具有天然无毒副作用、无耐药性、无残留和无环境污染等特点2,3，一直是饲料领域研究热点。自2 0 13年国家批准35种益生菌，12 种植物提取物进入饲料添加剂目录，枯草芽孢杆菌和牛至提取物一一牛至香酚也在其中。枯草芽孢杆菌和牛至提取物可以抑制畜禽肠道中的大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌等常见的有害菌，增加乳酸菌数量4-6 。Ma等7 研究表明枯草芽孢杆菌能显著提高肉鸡的平均体重、平均日采食量和平均日增重。黄其春等8 研究发现日粮中添加50 0 mg/kg牛至提取物可提高生长育肥猪生长性能，改善肉品质和风味。但目原料名称Ingredient膨化玉米豆粮鱼粉玉米蛋白粉膨化大豆牛肉骨粉鸡油预混料合计/kg1.3试验动物与设计试验在河北省秦皇岛市抚宁区某狐貉养殖场进行，试验采用双因素33随机试验设计，选取6 0 日龄体重相近，精神状态良好，健康的北极狐2 40 只，随机宗文丽，等：枯草芽孢杆菌和牛至提取物对北极狐生长性能和粪便中细菌数量的影响表1北极狐试验基础日粮组成及营养成分含量Table 1Compsition and nutrient content of the basal diet for arctic fox含量/%Content38.08.015.011.07.08.08.05.0100.0117前，北极狐日粮中枯草芽孢杆菌和牛至提取物联合使用，对其生产性能影响的研究少见报道。本试验在北极狐日粮中添加不同水平的枯草芽孢杆菌和牛至提取物组合，研究其对北极狐生长性能和粪便中细菌数量的影响，以期获得适宜的添加量，可为其在实践生产中应用提供理论依据。1木材料与方法1.1试验材料枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)2.0 x1010CFU/g,为山东蔚蓝生物科技有限公司生产；牛至提取物：牛至香酚10%，山东鲁西兽药股份有限公司生产；金霉素10%，为内蒙古金河动物药业有限公司生产。1.2基础日粮北极狐试验用基础日粮组成及营养成分含量，见表1。营养成分Nutrient content代谢能ME水分NMoisture粗蛋白CP粗纤维CF粗灰分Ash钙Ca总磷TP赖氨酸Lys分成10 个处理，每个处理设4个重复，每个重复6只，公母比例1:1。试验从7 月5日开始，预试期5d，正试期2 5d。试验组添加剂含量，见表2。含量Content15.87/(MJ/kg)9.83/%32.26/%1.54/%6.75/%1.67/%0.97/%1.77/%118Table 2Amount of additives added in the test groups金霉素/(mg/kg)项目ChlorotetracyItemscline对照组750试验组1试验组II试验组I试验组IV试验组V试验组VI试验组VI试验组VI试验组X1.4饲养管理饲养管理按养殖场日常管理进行，试验北极狐饲喂干粉状配合饲料，饲喂前用4倍水浸泡10 min，搅拌均匀后饲喂，每天饲喂3次，自由饮水。每天清理粪便1次，食盒每天清洗1次，每周用0.0 8%高锰酸钾溶液消毒2 次。1.5测定指标及方法1.5.1生长性能的测定重，记录始末体重；按重复记录采食量和腹泻只数；记录北极狐试验始末时间。计算平均日采食量、平均日增Table 3Effect of B.subtilis and O.vulgare extracts on the growth performance of arctic fox项目初始体重/kgItemInitial weight对照组2.83 0.05a试验组I2.84 0.04a试验组I2.85 0.08a试验组II2.84 0.04a试验组IV2.82 0.04a试验组V2.85 0.05a试验组VI2.82 0.08a试验组VI2.83 0.09a试验组VII2.82 0.07a试验组X2.83 0.08a枯草芽孢杆菌0.604牛至提取物0.354P值枯草芽孢杆菌牛至提取物注：同列数据肩标相同小写字母表示差异不显著（P0.05)，不同小写字母表示差异显著（P0.05)，不同大写字母表示差异极显著（P 0.05),different lowercase letters indicate there was significantdifference(P 0.05),and different upercase letters indicate there was very significant difference(P 0.01).The following table is the same.特产研究表2 试验组添加剂添加量重、料重比和腹泻率等。平均日采食量=仔狐试验期内总采食量/试验天数牛至提取物枯草芽孢杆菌/(mg/kg)(mg/kg)O.vulgareB.subtilisExtract125125125250250250375375375试验开始和结束，空腹称表3枯草芽孢杆菌和牛至提取物对北极狐生长性能的影响末体重/kg平均日增重/gFinal weightAverage daily gain4.81 0.02bcB79.40 3.55bAB4.74 0.03cdCD76.08 3.33cBC4.80 0.02bcdB77.99 4.35bcB4.82 0.01bB79.28 2.68 bB4.77 0.05cdB77.79 7.14bcB4.92 0.04aA82.92 4.44aA4.77 0.01cdB78.07 5.24bcB4.89 0.05aA82.20 5.74aAB4.76 0.04cdc77.58 4.79bcBC4.68 0.03TD74.02 5.50c0.010.0120.0300.0470.5470.012023年第45卷第5期平均日增重=(末体重一初始体重)/试验天数料重比=仔狐平均日采食量/平均日增重腹泻率=试验期内仔狐腹泻只次数（试验仔狐只数试验总天数）10 0%。1501.5.2粪便中细菌的测定在试验结束前3d,每天早300晨每个处理随机取5只北极狐新鲜粪便样品，混合均450匀，一8 0 保存。大肠杆菌用胆盐硫乳琼脂培养基在有150300450150300450氧条件下培养，乳酸杆菌用琼脂培养基在厌氧条件下培养,结果以每克粪便中含有微生物数量的对数值1g(CFU/g)表示。1.6数据分析试验数据用Excel2013进行初步整理后，利用SPSS26.0软件一般线性模型（GLM)进行方差分析，Duncan氏法进行多重比较。试验结果用“平均值标准差（meanSD)”表示，P0.05表示差异显著，P0.05表示差异不显著。2结果与分析2.1枯草芽孢杆菌和牛至提取物对北极狐生长性能的影响试验中枯草芽孢杆菌和牛至提取物对北极狐生长性能影响的统计分析结果，见表3。平均日采食量/g料重比Average daily intakeMaterial weight ratio255.07 6.64a3.21 0.04cBC256.30 8.94a3.37 0.05abAB257.04 7.86a3.30 0.03bcB253.24 9.69a3.19 0.03cBC257.14 9.48a3.31 0.03bcB255.70 11.93a3.08 0.05dc251.30 11.33a3.22 0.03 bcBC255.59 8.56a3.11 0.04cdc258.25 10.10a3.33 0.03bAB256.54 10.34a3.46 0.04aA0.8460.2000.2290.0060.010.961腹泻率/%Diarrhea rate22.19 0.62bAB23.48 0.72aA22.13 0.58bAB20.78 0.86cB22.60 0.93abA20.75 1.22cB21.90 1.05bcAB20.73 0.66cB21.88 1.28bcAB23.03 1.12abA0.1660.5600.010.01第5期各试验组初始体重相近。对于末体重，枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和牛至提取物交互作用影响差异极显著，牛至提取物影响差异显著；试验组V、V I 分别比对照组高2.2 4%、1.55%(P0.01)，试验组I、I I、V I与对照组比差异不显著。对于平均日增重，牛至提取物影响差异显著，枯草芽孢杆菌和牛至提取物交互作用影响差异极显著；试验组V、V I 分别比对照组高4.43%、3.53%（P 0.0 5)；试验组II、I、I V、V I、V I I 与对照组比差异不显著。对于平均日采食量，枯草芽孢杆菌、牛至提取物及枯草芽孢杆菌和牛至提取物交互作用影响差异不显著，试验各组与对照组比差异不显著。对于料重比，枯草芽孢杆菌影响差异不显著，牛至提取物及枯Table 4 Effect of B.Vasubtilis and O.vulgare extracts on numbers of bacteria in the feces of arctic fox lg项目Item对照组试验组1试验组II试验组II试验组IV试验组V试验组VI试验组VI试验组VII试验组IX枯草芽孢杆菌P值牛至提取物枯草芽孢杆菌牛至提取物对于粪便中细菌总数，枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和牛至提取物交互作用影响差异不显著，牛至提取物影响差异极显著；试验组III、IV、V、VI、VI、VII和IX与对照组比差异不显著。对于乳酸菌数量，枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和牛至提取物交互作用影响差异不显著，但枯草芽孢杆菌有先增后降的趋势；试验组II、IV、V、V I 和VII与对照组比差异不显著；试验组II比对照组高7.35%，实验组VI比对照组低7.6 9%（P0.05)；试验组I、分别比对照组高8.6 3%、10.30%（P0.01）。对于粪便中大肠杆菌数量，枯草芽孢杆菌、牛至提取物及枯草芽孢杆菌和牛至提取物交互作用影响差异极显著，试验组V、V I 与对照组比差异不显著，其他试验组宗文丽，等：枯草芽孢杆菌和牛至提取物对北极狐生长性能和粪便中细菌数量的影响表4枯草芽孢杆菌和牛至提取物对北极狐粪便中细菌数量的影响乳酸菌/(CFU/g)Lactobacillus7.86 0.1 bcBCD8.54 0.19abA8.44 0.15abAB8.17 0.23bcABC7.88 0.20bcBCD7.80 0.22bcBCD7.26 0.22dBCD7.77 0.04bcBCD8.30 0.06abcABC8.67 0.12aA0.7790.0040.071119草芽孢杆菌和牛至提取物交互作用影响差异极显著；试验组V与对照组比差异显著，试验组V比对照组低4.01%；试验组II、I I I、I V、V I 和VI与对照组差异不显著。对于腹泻率，枯草芽孢杆菌和牛至提取物影响差异不显著，枯草芽孢杆菌和牛至提取物交互作用影响差异极显著；试验组III、V 和VI分别比对照组低6.38%、6.49%和 6.6 0%(P 0.01)。2.2枯草芽孢杆菌和牛至提取物对北极狐粪便中细菌数量的影响试验中枯草芽孢杆菌和牛至提取物对北极狐粪便中细菌数量影响的统计分析结果，见表4。大肠杆菌/(CFU/g)乳酸菌/大肠杆菌/(CFU/g)EscherichiacoliLactobacillus/E.coli2.28 0.11ghF3.63 0.29abAB3.19 0.08fD2.69 0.14bcBC4.29 0.09cc1.97 0.09bcBC4.84 0.17bB1.71 0.13bcBC3.86 0.17dc2.07 0.16bcBC2.00 0.22hF4.32 0.36aA2.68 0.08ghDF2.72 0.18bABC4.72 0.08bBC1.65 0.04beBC4.31 0.15cBC1.94 0.1 1 bcBC5.49 0.18aA1.59 0.05cBC0.0040.0150.010.010.010.001均高于对照组（P0.01）。对于粪便中乳酸菌与大肠杆菌比值，枯草芽孢杆菌影响差异显著，牛至提取物、枯草芽孢杆菌和牛至提取物交互作用影响差异极显著；试验组I、V、V I 与对照组比差异不显著；试验组IV比对照组低43.0 1%(P0.05);其他试验组均比对照组低(P 0.01)。3讨论3.1木枯草芽孢杆菌和牛至提取物对北极狐生长性能的影响饲用益生芽孢杆菌能够分泌多种胞外消化酶，包括淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、糖化酶、纤维素酶、木聚糖酶和肌醇六磷酸酶等，能显著改善动物肠道消化内环细菌总数/(CFU/g)Total bacterial count5.46 0.19abABC4.48 0.13cBCD4.67 0.14cBCD5.00 0.14bcBCD5.53 0.17aABC5.52 0.02aABC5.59 0.11aABC5.69 0.50aABC5.84 0.17aA5.73 0.14aAB0.4950.010.739120境，提升饲料利用率，促进生长性能9。枯草芽孢杆菌属于饲用益生芽孢杆菌。植物提取物的抗菌作用机制包括破坏/降解细胞壁结构、破坏细胞膜蛋白质结构、破坏细胞质膜、使细胞内容物外泄、凝聚细胞质及减弱质子运动力等10 。牛至提取物中香芹酚和百里香酚主要作用模式是膜穿孔和膜黏合，细胞膜通透性改变和胞内物质外泄，导致重要的酶系统受到损害，从而引起微生物死亡11。本试验中，末体重试验组V比对照组高2.2 4%，平均日增重试验组V和VI分别比对照组高4.43%和3.53%，平均日采食量试验各组与对照组比差异不显著，料重比试验组V比对照组低4.0 1%，腹泻率试验组III、V 和VI分别比对照组低6.38%、6.49%和6.6 0%。聂利芳12 在AA肉鸡日粮中添加牛至油可提高1 2 1日龄AA肉鸡日增重和采食量，降低料重比；但对2242日龄AA肉鸡采食量影响差异不显著。丁浩等13饲粮添加50 0 g/t枯草芽孢杆菌DSM32315制剂可改善保育猪的机体氮利用和糖脂代谢相关的血浆生化参数,降低腹泻率,进而提高生长性能。蒲俊宁14 在断奶仔猪日粮中添加苯甲酸、凝结芽孢杆菌和牛至油组合可提高仔猪的生长性能，降低腹泻率41.7 1%。在北极狐仔狐日粮中添加枯草芽孢杆菌和牛至提取物能够提高北极狐仔狐末体重和平均日增重，改善平均日采食量和料重比，降低腹泻率，与上述在猪鸡上的研究有相似的效果。3.2枯草芽孢杆菌和牛至提取物对北极狐粪便中细菌数量的影响肠道微生物菌群结构受到多个因素的影响，宿主的遗传背景和环境共同决定着动物肠道微生物的种类和数量。环境因素尤其是饮食是肠道微生物菌群结构差异的主要影响因素15。本试验中,细菌总数试验组V与对照组相比差异不显著，试验组X粪便中乳酸菌和大肠杆菌数量最高，乳酸菌和大肠杆菌的比值也最低，试验组V乳酸菌和大肠杆菌的比值最高，同时大肠杆菌数量最低。田跃等16 育肥猪日粮添加10 0 mg/kg和200mg/kg枯草芽孢杆菌可以显著降低6 周和15周育肥猪粪便中氨气浓度和大肠杆菌数量，提高育肥猪粪便中乳酸杆菌数量。韩庆功等17 在仔猪日粮中添加牛至油后粪便中细菌总数显著增加，但牛至油组、抗生素组之间差异不显著；大肠杆菌数量降低，乳酸杆菌、双歧杆菌的数量增加，减少断奶仔猪发生腹泻的概率。邓雨英等18 研究发现在雪峰乌骨鸡日粮中，添加枯草特产研究芽孢杆菌和植物精油复合制剂粪便大肠杆菌数量无显著差异。韩丽等19 在围产母猪日粮中添加枯草芽孢杆菌，母猪粪便中的乳酸杆菌/大肠杆菌呈增加趋势。本试验中，枯草芽孢杆菌和牛至提取物对北极狐仔狐粪便中细菌数量也有不同程度的影响。动物粪便菌群组成存在差异性，与动物品种、健康状态和日粮的结构等因素有关2 0-2 2 。试验组IX粪便中乳酸菌和大肠杆菌数量同时增加，具体是由哪种原因引起的还需要进一步研究探讨。4结论综上所述，试验组V末体重、平均日增重及乳酸菌和大肠杆菌的比值最高，腹泻率比金霉素组低，粪便中大肠杆菌数最低，与腹泻率最低的试验组VI比无显著差异。由此可见，在本试验条件下北极狐日粮中牛至提取物添加量为2 50 mg/kg和枯草芽孢杆菌添加量为300mg/kg组合时，生产性能效果最好，并且优于金霉素组。1覃能斌,孙海霞,刘春龙,等.实用养狐技术大全M.北京：中国农业出版社，2 0 0 4:4-6.2曾亚英，杜海波，阿拉腾格日勒，等.浅谈益生菌替代抗生素在畜禽养殖业的应用研究进展.国外畜牧学(猪与禽),2 0 2 0,40(3):63-66 3罗亚平.植物提取物的特性及其在畜禽生产中的应用J.湖南畜牧兽医,2 0 18,2 0 3(1):45-47.4李兰海，陈丽玲，游金明，等.酸化剂和牛至油替代硫酸黏杆菌素对断奶仔猪生长性能、腹泻率和盲肠微生物数量的影响J.动物营养学报，2 0 18,30(5)：18 6 4-18 7 1.5赵露露，廖秀冬，张丽阳，等.植物提取物及其复合物对鸡源致病菌的体外抑菌作用.动物营养学报,2 0 17,2 9(9):32 7 7-32 8 6.6 JEONG J S,KIM I H.Effect of Bacillus subtilis C-3102 sporesas a probiotic feed supplement on growth performance,nox-ious gas emission,and intestinal 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