两种乙醇_盐双水相纯化蓝莓花青素的比较.pdf

食品研究与开发圆园23 年 9 月第 44 卷第 17 期DOI：10.12161/j.issn.1005-6521.2023.17.018基金项目：“玫瑰茄色素的分离提取研究”横向课题项目（SK19H21）作者简介：尚彦文（1997），女（汉），硕士研究生，研究方向：天然产物的分离提取。*通信作者：常秀莲（1965），女（汉），教授，博士，研究方向：天然产物的分离提取。两种乙醇/盐双水相纯化蓝莓花青素的比较尚彦文1，王云颖1，杨晓雪1，张晓1，程龙1，王少峰2，常秀莲1*（1.烟台大学 生命科学学院，山东 烟台 264005；2.漳州金三角生物科技有限公司，福建 漳州 363000）摘要：为比较乙醇/硫酸铵和乙醇/磷酸二氢钠两种双水相体系对蓝莓皮渣粗提液中的花青素的纯化效果，通过单因素试验和正交试验，得到最佳的工艺条件：乙醇/硫酸铵体系中硫酸铵质量分数 22.5%、乙醇质量分数 24.0%、pH4.5、色素添加量 15%，选择性系数 茁 为 27.10；乙醇/磷酸二氢钠体系中磷酸二氢钠质量分数 25%、乙醇质量分数 29%、pH2.5、色素添加量 14%，选择性系数 茁 为 140.05，乙醇/磷酸二氢钠体系的选择性系数是乙醇/硫酸铵体系的 5 倍。采用乙醇/磷酸二氢钠体系纯化的色素保留率高，且磷酸二氢钠具有溶解度低、易于回收的特点，所以该体系具有更好的工业化应用前景。关键词：蓝莓皮渣；花青素；双水相；色素保留率；选择性系数Comparison of Two Ethanol/Salt Aqueous Two-Phase Systems for Purifying Blueberry AnthocyaninsSHANG Yanwen1，WANG Yunying1，YANG Xiaoxue1，ZHANG Xiao1，CHENG Long1，WANG Shaofeng2，CHANG Xiulian1*（1.School of Life Sciences，Yantai University，Yantai 264005，Shandong，China；2.Zhangzhou Gold SagaBiotechnology Co.，Ltd.，Zhangzhou 363000，Fujian，China）粤遭泽贼则葬糟贼：Ethanol/ammonium sulfate and ethanol/sodium dihydrogen phosphate aqueous two-phase systemswere compared in the purification of anthocyanins from blueberry peel residues.The single factor and orthogonaltests were conducted to optimize thepurification conditions.The ethanol/ammonium sulfate system was optimizedas ammonium sulfate of 22.5%，ethanol of 24.0%，pH4.5，and pigment addition of 15%，under which theselectivity coefficient 茁 was 27.10.The ethanol/sodium dihydrogen phosphate system was optimized as sodiumdihydrogen phosphate of 25%，ethanol of 29%，pH2.5，pigment addition of 14%，under which the selectivitycoefficient 茁 was 140.05.The selectivity coefficient of the ethanol/sodium dihydrogen phosphate system was5 timesthat of the ethanol/ammonium sulfate system.The anthocyanins purified by the ethanol/sodium dihydrogenphosphate system had a high retention rate.Moreover，sodium dihydrogen phosphate in the system had lowsolubility and was easy to be recovered.Therefore，this system demonstrated a promosing prospect of industrialapplication.运藻赠 憎燥则凿泽：blueberry peel residues；anthocyanin；aqueous two-phase；pigment retention ratio；selectivity co原efficient引文格式：尚彦文，王云颖，杨晓雪，等.两种乙醇/盐双水相纯化蓝莓花青素的比较J.食品研究与开发，2023，44（17）：126-132.SHANG Yanwen，WANG Yunying，YANG Xiaoxue，et al.Comparison of Two Ethanol/Salt Aqueous Two-Phase Systems forPurifyingBlueberryAnthocyaninsJ.Food Research and Development，2023，44（17）：126-132.蓝莓为杜鹃花科越橘属植物，果实中含有丰富的活性物质，如花青素、糖类、多酚等，其中每 100 g 蓝莓鲜果中花青素含量高达 387487mg1。截至 2020 年底，我国蓝莓总产量 34.72 万 t，蓝莓鲜果价格昂贵，除了应用技术126食品研究与开发圆园23 年 9 月第 44 卷第 17 期鲜食，蓝莓还应用于制作蓝莓果汁、果酱等蓝莓的衍生品，但生产过程中产生了大量废弃皮渣。目前蓝莓皮渣多用于肥料、饲料以及直接垃圾处理2。皮渣中富含花青素，花青素是一种天然色素，具有抗氧化3、保护视力4、降血糖5、抗肿瘤6-7、保护心脑血管8-9等多种功效。在食品添加剂及膳食补充剂方面得到了广泛的应用10。蓝莓花青素市场价格昂贵，从蓝莓皮渣中提取花青素可以变废为宝，提高蓝莓产品的附加值。目前花青素的主要提取方式是溶剂提取法，但提取液中含有大量的糖类杂质，需要进一步地分离纯化。分离纯化方法中的树脂吸附法纯化操作周期长11，膜分离法无法将分子量接近的色素与糖类物质分开12，层析法处理量少，不适合工业化生产13-14，而双水相法操作简单、处理周期短、分离条件温和并且容易实现规模化15。文献报道较多的双水相体系是采用聚乙二醇/无机盐体系16-17，得到的花青素上相中含有大量聚乙二醇，难以与花青素分离，并且聚乙二醇价格高、黏度大、回收困难、工业操作难度大，它还具有毒性，不能应用于食品中。因此，本文分别选择乙醇/硫酸铵和乙醇/磷酸二氢钠两种双水相体系进行蓝莓花青素的纯化，花青素上相中的乙醇可以通过蒸馏法与花青素分离并回收利用，相比于聚乙二醇/无机盐体系更加安全、节能、环保，以期为后续蓝莓皮渣中花青素的工业纯化生产提供参考。1材料与方法1.1材料与试剂蓝莓皮渣：福建康之味食品工业有限公司；无水乙醇（分析纯）：西陇科学股份有限公司；硫酸铵（分析纯）：天津市永大化学试剂有限公司；磷酸二氢钠（分析纯）：天津市瑞金特化学品有限公司；浓硫酸（分析纯）：国药集团化学试剂有限公司；苯酚（优级纯）：天津市科密欧化学试剂有限公司。1.2仪器与设备紫外可见分光光度计（UVmini-1285）：岛津仪器（苏州）有限公司；电子天平（YP6002）：上海佑科仪器仪表有限公司；pH 计（S210）：梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；涡旋振荡器（HY-4A）：常州普天仪器制造有限公司。1.3试验方法1.3.1蓝莓皮渣花青素粗提液的制备取蓝莓皮渣和 60%乙醇水溶液按 1 颐 6（g/mL）的料液比浸提 6 h，100 目滤布过滤去除粗渣，离心机3 000 r/min 离心 15 min，去除沉淀，上清液真空旋转蒸发浓缩，浓缩液浓度为 1 166.67 mg/L，浓缩液 4 益储存备用，使用前调节 pH 值。1.3.2单因素试验设计1.3.2.1无机盐质量分数对选择性系数和色素保留率的影响乙醇/硫酸铵体系：在 50 mL 离心管中分别添加质量分数为 18%、19%、20%、21%、22%的硫酸铵，无水乙醇质量分数 24%，色素添加量 10%，调节 pH 值为 3.0，加水补足体系至 30.0 g。置于漩涡振荡器振荡 10 min，静置 20 min，待体系稳定后，测定上下相溶液中的花青素含量和总糖含量，计算选择性系数 茁 及色素保留率。乙醇/磷酸二氢钠体系：分别加入质量分数为18%、20%、22%、24%、25%的磷酸二氢钠，各管中加入无水乙醇的质量分数为 30%，色素添加量 10%，调节 pH 值为 3.0，其余操作条件同上。1.3.2.2乙醇质量分数对选择性系数和色素保留率的影响乙醇/硫酸铵体系：分别加入质量分数为 20%、21%、22%、23%、24%的无水乙醇，各管中加入硫酸铵质量分数 22%，色素添加量 10%，调节 pH 值为 3.0，其余操作条件同 1.3.2.1。乙醇/磷酸二氢钠体系：分别加入质量分数为22%、24%、26%、28%、30%的无水乙醇，各管中加入磷酸二氢钠质量分数 24%，色素添加量 10%，调节 pH 值为3.0，其余操作条件同 1.3.2.1。1.3.2.3pH 值对选择性系数和色素保留率的影响乙醇/硫酸铵体系：加入硫酸铵质量分数 22%，无水乙醇质量分数 24%，色素添加量 10%，分别调节 pH值为 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0，其余操作条件同 1.3.2.1。乙醇/磷酸二氢钠体系：加入磷酸二氢钠质量分数24%，无水乙醇质量分数 30%，色素添加量 10%，分别调节 pH 值为 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0，其余操作条件同1.3.2.1。1.3.2.4色素添加量对选择性系数和色素保留率的影响乙醇/硫酸铵体系：调节色素添加量为 8%、10%、12%、14%、16%，加入硫酸铵质量分数 22%，无水乙醇质量分数 24%，调节 pH 值为 4.0，其余操作条件同1.3.2.1。乙醇/磷酸二氢钠体系：调节色素添加量为 8%、10%、12%、14%、16%，加入磷酸二氢钠质量分数 24%，无水乙醇质量分数 30%，调节 pH 值为 3.0，其余操作条件同 1.3.2.1。1.3.3正交试验设计在单因素试验的基础上，进行四因素三水平的正交试验，以选择性系数为响应值，因素设计水平见表 1、表 2。应用技术127食品研究与开发圆园23 年 9 月第 44 卷第 17 期图 1无机盐的质量分数对选择性系数和色素保留率的影响Fig.1Effects of mass fraction of inorganic salt on selectivitycoefficient and anthocyanin retention ratio1.4指标测定1.4.1花青素含量的测定按照文献18的方法测定花青素含量。分别用pH1.0 的氯化钾缓冲液和 pH4.5 的乙酸钠缓冲液将待测样稀释，于 520 nm 和 700 nm 处测吸光度，按以下公式计算花青素含量（CTa、CBa，mg/L）。CTa或 CBa=M伊A伊D伊1 000l伊着A=（A520nm-A700nm）pH1.0-（A520nm-A700nm）pH4.5式中：CTa为上相花青素含量，mg/L；CBa为下相花青素含量，mg/L；M 为矢车菊-3-葡萄糖苷的分子量，449.2 g/mol；D 为待测液的稀释倍数；l 为光路长，1 cm；着 为矢车菊-3-葡萄糖苷的摩尔消光系数，26 900 L/（mol cm）；1 000 为 g 换算成 mg 的转换系数；A520 nm、A700nm分别为待测液在 520 nm 和 700 nm 处的吸光度。1.4.2总糖含量的测定采用苯酚-硫酸法测定总糖含量19。1.4.2.1标准曲线的绘制分别吸取 0（空白）、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 标准葡萄糖溶液，用去离子水补充至 1.0 mL，加入 1.0 mL 5%苯酚溶液、5.0 mL 浓硫酸，摇匀冷却至室温。在 480 nm处测吸光度。以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线方程。1.4.2.2总糖含量的测定取 1.0mL 待测液，加入 1.0mL5%苯酚溶液、5.0 mL浓硫酸，摇匀冷却至室温。480 nm 测吸光度并代入标准曲线，计算总糖含量。1.4.3选择性系数 茁 的计算选择性系数 茁、Ka、Ks的计算公式如下。茁=KaKsKa=CTaCBaKs=CTsCBs式中：Ka为花青素在双水相体系中的分配系数；Ks为糖类物质在双水相体系中的分配系数；CTa为上相花青素含量，mg/L；CBa为下相花青素含量，mg/L；CTs为上相总糖含量，mg/mL；CBs为下相总糖含量，mg/mL。1.4.4色素保留率 浊 的计算色素保留率（浊，%）的计算公式如下。浊=VTCTaVTCTa+VBCBa伊100式中：VT为上相体积，mL；VB为下相体积，mL。1.5数据处理采用 Excel 2021 及 SPSS 22.0 软件对试验结果进行分析。2结果与分析2.1单因素试验2.1.1不同无机盐质量分数对色素保留率 浊 和选择性系数 茁 的影响两种双水相体系无机盐的质量分数对色素保留率 浊 和选择性系数 茁 的影响如图 1 所示。水平因素A 硫酸铵质量分数/%B 乙醇质量分数/%C pH 值D 色素添加量/%121.523.53.513222.024.04.014322.524.54.515表 1乙醇/硫酸铵体系正交试验因素水平Table 1Factors and levels of orthogonal test for the ethanol/ammonium sulfate system表 2乙醇/磷酸二氢钠体系正交试验因素水平Table 2Factors and levels of orthogonal test for the ethanol/sodium dihydrogen phosphate system水平因素A 磷酸二氢钠质量分数/%B 乙醇质量分数/%C pH 值D 色素添加量/%123282.513224293.014325303.5153024181260181922硫酸铵质量分数/%2021选择性系数 茁1009590858075色素保留率 浊1501209060300182026磷酸二氢钠质量分数/%2224选择性系数 茁1009590858075色素保留率 浊（a）乙醇/硫酸铵体系（b）乙醇/磷酸二氢钠体系应用技术128食品研究与开发圆园23 年 9 月第 44 卷第 17 期由图 1（a）可知，随着硫酸铵质量分数的增加，选择性系数 茁 和色素保留率均呈上升趋势。在硫酸铵质量分数为 22%时，茁 达到最高值 22.97，色素保留率最高为 92.36%，因此选择硫酸铵质量分数 21.5%、22.0%、22.5%进行正交试验。由图 1（b）可知，随着磷酸二氢钠质量分数的增加，选择性系数 茁 在磷酸二氢钠质量分数为 24%时达到最高值 138.73，色素保留率随磷酸二氢钠质量分数升高的变化不大。因此选择磷酸二氢钠质量分数 24%为较优水平，选择其质量分数为 23%、24%、25%进行正交试验。无机盐质量分数的增加均有利于色素的分离纯化，但硫酸铵和磷酸二氢钠在体系中的溶解度限制了无机盐的持续增加，无机盐质量分数过高会出现析出沉淀现象。2.1.2不同乙醇质量分数对色素保留率 浊 和选择性系数 茁 的影响不同乙醇质量分数对色素保留率 浊 和选择性系数 茁 的影响结果如图 2 所示。由图 2 可知，随着体系中乙醇质量分数的增加，两个体系中选择性系数 茁 均呈现上升趋势。乙醇质量分数分别为 24%和 30%时 茁 达到最高，分别为 19.72 和100.79，色素保留率也达到最高，分别为 91.23%和99.52%。由图 2（a）可知，色素保留率随乙醇质量分数的增加而增加。由图 2（b）可知，色素保留率随乙醇质量分数的增加变化不大。乙醇质量分数的增加均有利于色素的分离纯化，但乙醇质量分数过高会出现析出沉淀现象。因此两体系分别选择乙醇的质量分数为24.0%和 30%为较优水平进行后续试验。2.1.3不同 pH 值对色素保留率 浊 和选择性系数 茁 的影响pH 值对色素保留率 浊 和选择性系数 茁 的影响结果如图 3 所示。由图 3（a）可知，乙醇/硫酸铵体系的选择性系数在pH4.0 时最高，为 24.78；由图 3（b）可知，色素保留率随 pH 值影响不大，选择性系数在 pH3.0 时最高，为115.81。可能由于 pH4.0 时乙醇/硫酸铵体系和 pH3.0时乙醇/磷酸二氢钠体系中的蓝莓花青素大多呈分子状态存在20，极性相对较低，更容易被分离到上相乙醇溶液中，使得 茁 达到最大。因此乙醇/硫酸铵体系选择pH4.0 为较优水平，选择 pH3.5、4.0、4.5 进行正交试验；乙醇/磷酸二氢钠体系在pH3.0 条件下的纯化效果优于其他条件，所以此体系选择pH3.0 为较优水平，选择 pH2.5、3.0、3.5 进行正交试验。3024181260202124乙醇质量分数/%2223选择性系数 茁1009590858075色素保留率 浊1501209060300222430乙醇质量分数/%2628选择性系数 茁1009590858075色素保留率 浊（a）乙醇/硫酸铵体系图 2乙醇的质量分数对选择性系数和色素保留率的影响Fig.2Effects of mass fraction of ethanol on selectivitycoefficientand anthocyanin retention ratio（b）乙醇/磷酸二氢钠体系30241812601.02.05.0pH 值3.04.0选择性系数 茁1009590858075色素保留率 浊15012090603001.02.05.0pH 值3.04.0选择性系数 茁1009590858075色素保留率 浊（a）乙醇/硫酸铵体系图 3pH 值对选择性系数和色素保留率的影响Fig.3Effects of pH on selectivity coefficient and anthocyaninretention ratio（b）乙醇/磷酸二氢钠体系应用技术129食品研究与开发圆园23 年 9 月第 44 卷第 17 期表 3乙醇/硫酸铵体系正交试验结果Table 3Results of orthogonal test for the ethanol/ammoniumsulfate system试验号ABCD选择性系数 茁1111117.442122222.323133325.174212321.435223125.646231221.087313223.088321326.909332124.39K164.9261.9565.4367.47K268.1574.8668.1366.48K374.3870.6473.8973.49k121.6420.6521.8122.49k222.7224.9522.7122.16k324.7923.5524.6324.50极差 R3.154.302.822.34主次顺序B跃A跃C跃D最优水平A3B2C3D3最优组合A3B2C3D3表 4乙醇/磷酸二氢钠体系正交试验结果Table 4Results of orthogonal testfor the ethanol/sodiumdihydrogen phosphate system试验号ABCD选择性系数 茁1111160.422122282.723133362.194212363.875223181.9862312109.197313296.2883213124.2593321103.61K1205.33220.56293.86246.00K2255.03288.94250.19288.18应用技术2.1.4 不同色素添加量对色素保留率 浊 和选择性系数茁 的影响不同色素添加量对色素保留率 浊 和选择性系数 茁的影响结果如图 4 所示。由图 4 可知，两个体系中色素添加量对色素保留率的影响均不明显，但对选择性系数有明显影响，最高点均出现在添加量为 14%时，选择性系数最大值分别为 26.59 和 104.56。茁 整体呈先升高后下降的原因可能是随着色素添加量的增加，上相中花青素含量逐渐增加，Ka升高，而糖类物质在上下两相中分布差异不大，即 Ks变化不大，从而使 茁 升高，但当色素添加量超过 14%时，下相中花青素含量也增加，Ka下降，上相中糖类物质含量增加，Ks升高，因此导致 茁 下降。所以两体系都选择色素添加量 14%为较优水平，选择色素添加量 13%、14%、15%进行正交试验。2.2正交试验结果及分析在单因素试验的基础上，设计表 1、表 2 的正交试验，由于不同因素对色素保留率的影响不大，所以仅考虑处理对选择性系数 茁 的影响。使用 Excel 2021 软件对乙醇/硫酸铵体系正交试验结果进行极差分析，见表 3。如表 3 所示，乙醇/硫酸铵体系中 4 个因素对选择性系数 茁 的影响次序为乙醇质量分数跃硫酸铵质量分数跃pH 值跃色素添加量，最佳试验条件为硫酸铵质量分数 22.5%、乙醇质量分数 24.0%、pH4.5、色素添加量15%，此条件未出现在正交试验中，将最优组合进行验证试验，最终计算得到选择性系数 茁 为 27.10，为此体系试验最高值。对乙醇/磷酸二氢钠体系的正交试验结果进行极差分析，结果见表 4。302418126081016色素添加量/%1214选择性系数 茁1009590858075色素保留率 浊150120906030081016色素添加量/%1214选择性系数 茁1009590858075色素保留率 浊（a）乙醇/硫酸铵体系图 4色素添加量对选择性系数和色素保留率的影响Fig.4Effects of pigment addition on selectivity coefficient andanthocyanin retention ratio（b）乙醇/磷酸二氢钠体系130食品研究与开发圆园23 年 9 月第 44 卷第 17 期续表 4乙醇/磷酸二氢钠体系正交试验结果Continue table 4Results of orthogonal testfor the ethanol/sodium dihydrogen phosphate system试验号ABCD选择性系数 茁K3324.13274.99240.44250.31k168.4473.5297.9582.00k285.0196.3183.4096.06k3108.0491.6680.1583.44极差 R39.6022.7917.8114.06主次顺序A跃B跃C跃D最优水平A3B2C1D2最优组合A3B2C1D2变异来源III 类平方和自由度均方F值P值校正的模型8 284.72181 035.59014.2730.000截距136 764.5001136 764.500 1 884.990 0.000磷酸二氢钠质量分数4 747.46422 373.73232.7170.000乙醇质量分数1 740.1322870.06611.9920.003pH 值1 078.8572539.4297.4350.012色素添加量718.2672359.1334.9500.035误差652.990972.554总计145 702.21118校正后的总变异8 937.71117表 5乙醇/硫酸铵体系正交试验结果方差分析Table 5Analysis of variance of orthogonal test results of theethanol/ammonium sulfate system注：P约0.05 表示影响显著；P约0.01 表示影响极显著。变异来源III 类平方和自由度均方F值P值校正的模型132.657816.5825.5900.009截距9 563.52619 563.526 3 223.7660.000硫酸铵质量分数30.794215.3975.1900.032乙醇质量分数57.764228.8829.7360.006pH 值24.922212.4614.2010.051色素添加量19.17829.5893.2320.088误差26.69992.967总计9 722.88318校正后的总变异159.35617表 6乙醇/磷酸二氢钠体系正交试验结果方差分析Table 6Analysis of variance of orthogonal test results of theethanol/sodium dihydrogen phosphate system注：P约0.05 表示影响显著；P约0.01 表示影响极显著。应用技术如表 4 所示，乙醇/磷酸二氢钠体系中 4 个因素对选择性系数 茁 的影响次序为磷酸二氢钠质量分数跃乙醇质量分数跃pH 值跃色素添加量，最佳试验条件为磷酸二氢钠质量分数 25%、乙醇质量分数 29%、pH2.5、色素添加量 14%，此条件也未出现在正交试验中，将最优组合进行验证试验，最终计算得到选择性系数 茁 为140.05，为此体系试验最高值。使用 SPSS 22.0 对乙醇/硫酸铵体系的正交试验结果进行方差分析，见表 5。如表 5 所示，乙醇质量分数对选择性系数 茁 有极显著影响（P约0.01）。硫酸铵质量分数对选择性系数 茁有显著影响（P约0.05）。pH 值、色素添加量对选择性系数 茁 无显著影响（P跃0.05），但是不宜再提高色素添加量和体系 pH 值，继续增加色素添加量可能会导致分相失败，而且蓝莓皮渣色素作为花青素的一种，在酸性条件下稳定，有研究表明，在相同条件下，pH 值越大，花青素降解速率越快20-22。由表 5 可知，影响选择性系数的因素的主次顺序为乙醇质量分数跃硫酸铵质量分数跃pH 值跃色素添加量，与表 3 中的极差分析结果一致。对乙醇/磷酸二氢钠体系的正交试验结果进行方差分析，见表 6。如表 6 所示，磷酸二氢钠质量分数、乙醇质量分数对选择性系数 茁 均有极显著影响（P约0.01），pH 值、色素添加量对选择性系数 茁 均有显著影响（P约0.05）。方差分析结果表明，影响选择性系数的因素的主次顺序为磷酸二氢钠质量分数跃乙醇质量分数跃pH 值跃色素添加量，与表 4 中的极差分析结果一致。3结论试验得到乙醇/硫酸铵体系最佳试验条件为硫酸铵质量分数 22.5%、乙醇质量分数 24.0%、pH4.5、色素添加量 15%，选择性系数 茁 最高为 27.10。4 个因素对选择性系数 茁 的影响顺序为乙醇质量分数跃硫酸铵质量分数跃pH 值跃色素添加量。乙醇/磷酸二氢钠体系最佳试验条件为磷酸二氢钠质量分数 25%、乙醇质量分数29%、pH2.5、色素添加量 14%，4 个因素对选择性系数茁 的影响顺序为磷酸二氢钠质量分数跃乙醇质量分数跃pH 值跃色素添加量，选择性系数 茁 最高为 140.05，约为乙醇/硫酸铵体系选择性系数的 5 倍，因此相较于乙醇/硫酸铵体系，乙醇/磷酸二氢钠体系对蓝莓花青素的选择性更高。且乙醇/磷酸二氢钠体系的色素保留率均98%以上，所以此体系更有利于蓝莓花青素的纯化。同时磷酸二氢钠在水中的溶解度对于温度的变化比硫酸铵更为敏感，使得磷酸二氢钠比硫酸铵更容易通过浓缩降温析出的方法进行回收，从而循环利用、节约能源。含有色素的上相乙醇可以通过蒸发法进行回收，实现乙醇的循环利用，达到节约能耗和资源的目的。利用溶剂提取法得到的花青素粗提液中常含有131食品研究与开发圆园23 年 9 月第 44 卷第 17 期应用技术大量糖类杂质，影响产品的稳定性，而且很难利用喷雾干燥法得到粉末状产品，因此提取液需要进一步纯化，双水相纯化法相对于其他纯化方法成本较低、回收产品容易，综合考虑选择性系数、色素保留率、色素回收和无机盐的回收利用，选择乙醇/磷酸二氢钠双水相体系纯化蓝莓花青素对实际生产更有指导意义。参考文献：1尤丽,党娅.蓝莓花青素的代谢及功能特性研究进展J.食品研究与开发,2021,42(14):193-200.YOU Li,DANG Ya.Research progress in metabolic and functionalproperties of blueberry anthocyaninsJ.Food Research and Devel原opment,2021,42(14):193-200.2于桐.添加刺葡萄皮渣挤压膨化食品配方及工艺研究D.长沙:湖南农业大学,2019.YU Tong.Study on the formula and technology of extruded food withspine grape residueD.Changsha:Hunan Agricultural University,2019.3SUN L Q,DING X P,QI J,et 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